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大鼠脑缺血诱导脑组织中SUMOylation修饰变化的研究
目的:研究大鼠脑缺血组织中SUMO-1、SIRT-1和SUMO-1/SIRT-1的变化,探讨SUMO化修饰对大脑缺血的保护机制.方法:将25只Wistar大鼠随机分为2h组、6h组、12h组、24h组和对照组各5只.对照组不进行处理,2h组、6h组、12h组、24h组建立局灶性脑缺血模型,分别2h、6h、12h、24h处死大鼠,对照组在2h处死,研究组取大鼠缺血部位皮质组织,对照组取相应部位皮质组织,Western-Blot法测定脑组织中的SUMO-1、SIRT-1和SUMO-1/SIRT-1蛋白质水平.结果:缺氧2h后SUMO-1、SIRT-1、SIRT-1/SUMO-1复合物开始升高,和对照组比有统计学差异(P＜0.05),缺氧12h达到SUMO-1表达达到高峰,24h后降低,但仍较对照组和2h、6h表达为高(P＜0.05).结论:SUMO-1、SIRT-1和SUMO-1/SIRT-1参与了脑缺血中保护脑组织的过程,其机制可能与SUMO修饰上调SIRT-1的去乙酰化水平与关,详细机制还有待进一步研究.
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白藜芦醇在大鼠离体心脏低温保存中的保护作用及其机制
目的:探讨白藜芦醇(RES)对长时程低温保存的大鼠供心是否具有保护作用及其机制是否通过调节Sirt-1的表达.方法:SD大鼠随机分为以下7组,包括空白对照组(control),单纯9h低温保存组(9 h),RES组(3、10、30μmol/L RES组),尼克酰胺组(NAM:保存液中加入Sirt-1抑制剂尼克酰胺NAM 40 μmol/L),白藜芦醇+尼克酰胺组(RES+ NAM:保存液中加入30 μmol/L RES和40 μmol/L NAM).采用大鼠离体心脏Langendorff灌流模型,HE染色观察心肌细胞在各组中的形态学变化;用Real-TimePCR和Western blot法分别检测Sirt-1基因和蛋白在各组中的表达.结果:①与空白对照组相比,9h组心肌细胞损伤明显加重,Sirt-1基因和蛋白表达均明显下调(P＜0.01);②与9h组相比,3、10、30 μmol/L RES组心肌细胞损伤逐渐减轻,Sirt-1表达水平呈剂量依赖性升高(P＜0.05);③RES的心肌细胞保护作用可被Sirt-1抑制剂NAM所取消.结论:RES能够改善长时程低温保存引起的心肌细胞损伤,这种保护作用可能通过上调Sirt-1的表达来实现.
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丹参酚酸B通过Sirt-1对大鼠肝纤维化模型的影响
①目的研究丹参酚酸 B（SalB）抗大鼠肝纤维化分子的作用机制。②方法48只大鼠随机分为4组：对照组（A 组），DMN 损伤组（B 组），SalB 空白给药组（C 组），DMN 损伤＋SalB 预处理组（D组）。B、D 组大鼠腹腔注射 DMN，每周3次，给药4周；D 组大鼠在第一次注射 DMN 同时灌胃给予SalB 溶液；C 组也同时给该药，每天1次，连续给药6周。后一次灌胃结束后禁食24小时，取肝脏标本，测定肝匀浆羟脯氨酸（HYP）水平。明胶酶谱法检测 MMP-2、MMP-9活性，Western Blot 检测 AP-1和 Sirt-1表达水平。③结果 B 组大鼠肝脏 HYP 水平、MMP-2、MMP-9活性以及 AP-1蛋白表达水平明显上升；与 B 组相比，D 组大鼠肝脏 HYP 水平、MMP-2、MMP-9活性以及 AP-1蛋白表达水平明显下降。另外，B 组大鼠 Sirt-1蛋白表达水平明显下降，而 D 组 Sirt-1蛋白表达水平水平明显上升。④结论SalB 具有明显的抗肝纤维化作用，其机制与 SalB 激活 Sirt-1表达从而抑制 MMP-2、MMP-9的活性密切相关。
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真武汤通过SIRT1信号通路减轻心力衰竭大鼠心肌细胞线粒体损伤及心肌细胞凋亡
目的:观察真武汤通过Sirt1信号转导通路蛋白抑制心肌细胞凋亡的影响,探讨真武汤治疗心力衰竭的机制.方法:复制心梗后心衰模型,通过检测脑钠肽(BNP)来确定心衰造模成功,将心力衰竭大鼠随机分为治疗组(真武汤低、中、高剂量组)、阳性药物对照组(卡托普利)、模型组,分别给药15 d,同时设空白对照组.通过彩超测量左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)等评价心功能,用酶联免疫法(ELISA)检测心衰大鼠血清中BNP,电镜观察心肌细胞内线粒体形态和数量变化,Westemblotting来检测心肌Bax,Bcl-2,Caspase-3,和Sirt-1的表达.结果:1.与正常组相比,治疗组与模型组的BNP表达均升高;2.与正常组相比,模型组LVEF、LVFS水平明显降低(P＜0.01);与模型组相比,中、高剂量组LVEF、LVFS水平明显升高(P＜0.01).3.电子显微镜可观察到模型组大鼠的心肌细胞线粒体数量下降以及移位,并出现其他形态学改变,主要表现为线粒体数量和大小的变化,治疗后,数量和大小均有提升.4.与正常组比较,各组sirt-1蛋白表达均有不同程度减少,Bax及Caspase-3蛋白表达显著增加,Bcl-2的表达有不同程度的降低;与模型组相比,各治疗组sirt-1的表达均有所升高,其中阳性药物及真武汤中高剂量组的表达较高,各组Bax、Caspase-3的表达均有所下降,阳性药物对照组及真武汤中高剂量组表达低,各治疗组Bcl-2的表达均升高,阳性药物对照组及中药中高剂量组较显著.结论:真武汤可通过调节心肌细胞中线粒体通路,影响凋亡相关蛋白的表达,抑制心肌细胞的凋亡,从而延缓充血性心衰的发展.SIRT1信号通路在抑制心力衰竭心肌细胞的凋亡中起着关键的作用.
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SIRT-1和Ku70在胰腺癌中的表达及其临床病理意义
目的:研究胰腺癌中S IRT-1和Ku70的表达及其临床病理意义,为胰腺癌患者的预后及生物治疗提供理论依据.方法:采用免疫组织化学技术(S-P)法检测46例胰腺癌及20例非肿瘤性胰腺组织中SIRT-1和Ku70表达情况,并分析其与胰腺癌临床病理参数的关系.结果:胰腺癌组织中SIRT-1的表达明显升高,其表达强度与临床分期、淋巴结有无转移、年龄和肿瘤大小呈正相关(P＜0.05),与组织学分级呈负相关(P＜0.05),与患者的性别和肿瘤部位均无关.胰腺癌组织中Ku70表达明显升高,其表达强度与临床分期、淋巴结有无转移及呈正相关(P＜0.05),与组织学分级呈负相关(P＜0.05),与患者的性别、年龄、肿瘤部位和大小均无关.结论:SIRT-1和Ku70在胰腺癌组织中的表达显著高于非肿瘤胰腺组织,且与胰腺癌的临床病理及预后相关,在胰腺癌的发展中也起一定作用,存在协同关系.
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低剂量呼气相肺重建CT影像学特征与肺小气道病变患者外周血特异性标记物表达的相关性
目的 探讨肺小气道病变患者低剂量呼气相肺重建CT影像学特征与外周血特异性标记物沉默信息调节因子2相关酶1(Sirt-1)、Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素8(IL-8)水平及转化生长因子β1(TGF-β1)表达的相关性.方法 选择80例小气道病变患者为病例组,另选取80例健康体检者为对照组.对2组采用Western blotting法检测外周血单个核细胞(PBMCs)中Sirt-1、NLRP3蛋白的表达,同时运用酶联免疫吸附(ELISA)法检测2组血清TNF-α、IL-8、TGF-β1水平.探讨低剂量CT特征与外周血特异性标记物表达的相关性.结果 病例组PBMCs中Sirt-1蛋白表达水平低于对照组(P<0.05),NLRP3蛋白表达水平高于对照组(P<0.05).病例组血清TNF-α、IL-8、TGF-β1水平均低于对照组(P<0.05).将病例组根据CT影像学特征再分组比较外周血特异性标记物水平,结果显示有无空气潴留、有无磨玻璃样密度影、有无肺大泡、有无小叶中心肺气肿、有无肺实质微结节等组间的Sirt-1、NLRP3、TNF-α、IL-8、TGF-β1水平差异均有显著性(P<0.05).经Pearson相关分析显示,空气潴留、磨玻璃样密度影、肺大泡、小叶中心肺气肿、肺实质微结节等低剂量CT特征与外周血特异性标记物Sirt-1、NLRP3、TNF-α、IL-8、TGF-β1表达水平均呈显著正相关(P<0.05).结论 肺小气道病变患者空气潴留等低剂量CT特征与Sirt-1等多种特异性标记物表达相关.可将低剂量CT与上述特异性标记物联用,诊断肺小气道病变.
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Sirtuins与神经退行性疾病的研究进展
沉默调控基因(SIRTs)是一组激活依赖于NAD+的具有去乙酰化作用的蛋白.新的研究表明,SIRTs参与了细胞衰老过程的调节,尤其是在神经退行性疾病中扮演了重要角色.SIRTs基因家族中SIRT2首先发现于酵母中,其余成员则发现于多种有机物中[1].哺乳动物SIRTs有7种同源蛋白,其具有组蛋白去乙酰化作用,在NAD+存在的情况下可催化乙酰化底物转变为去乙酰化底物,同时生成氧代乙酰基ADP核糖基(O-acetyl-ADP-ribose)和尼克酰胺等副产物.SIRT-1与SIRT2同源性高,其不但具有组蛋白去乙酰化作用,同时可以催化胞核和胞质内大量非组蛋白去乙酰化[2].这个过程涉及一系列细胞功能,包括维持基因组稳态、抑制炎症反应、增强突触可塑性及对抗神经退行性变.SIRT3~5主要存在于线粒体中,SIRT6是只存在于细胞核内的NAD_依赖的去乙酰化酶及ADP核糖基转移酶.SIRT7调控核糖体的DNA基因表达,其分布于核仁中.早期的研究表明SIRT2的缺失导致酵母寿命缩短,反之,过表达使其寿命延长[3].近来SIRT2的抗衰老作用受到挑战,尽管如此,大量证据显示,Sirtuins无论在原生动物还是多细胞生物中都起到了重要的作用[4].本文重点关注Sirtuins家族在神经退行性疾病中新的可能致病机制,尤其是蛋白质内稳态、神经可塑性、线粒体功能及炎症途径.
