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TIMP-3对肝癌细胞增殖、凋亡及侵袭转移的影响
目的 建立以真核表达载体介导的过表达TIMP-3基因的肝癌细胞株(SMMC-7721和HepG2),探讨TIMP-3基因对两细胞增殖、凋亡、周期、侵袭等功能的影响.方法 将TIMP-3质粒pCMV6-AC-GFP/TIMP-3(TIMP-3组)和空载对照质粒pCMV6-AC-GFP(对照组)稳定转染入SMMC-7721和HepG2细胞株,用Western blot技术检测细胞内TIMP-3蛋白的表达,通过MTS实验、流式细胞术、侵袭实验测定细胞的各种生物学行为.结果 Western blot检测结果显示,TIMP-3组的SMMC-7721和HepG2细胞高表达TIMP-3蛋白,而对照组细胞没有TIMP-3蛋白表达.MTS实验和流式细胞术检测结果显示,与对照组比较,TIMP-3组两种细胞的增殖能力显著减弱(第5天时P=0.003,P=0.009),凋亡率显著升高(P=0.001,P=0.038),细胞周期停滞于G2/M期(P=0.030,P=0.034);体外侵袭实验结果显示,TIMP-3组两种细胞的侵袭能力较对照组显著下降(P=0.033,P=0.015).结论 TIMP-3能显著抑制SMMC-7721及HepG2细胞的增殖和侵袭能力,并诱导细胞发生凋亡和产生G2/M期阻滞.
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TIMP-3对内皮细胞增殖抑制作用的研究
目的:探讨TIMP-3对内皮细胞增殖的抑制作用及特点.方法:采用形态学观察、MTT法、[3H]-TdR掺入法流式细胞仪分析等技术方法观测不同浓度TIMP-3作用下人脐静脉内皮细胞增殖活性的变化.结果:①不同浓度(10～100ng/ml)的TIMP-3处理HUVEC细胞不同时间(1～7天)后,生长均有显著抑制作用且呈现明显的剂量和时效依赖关系.②经TIMP-3处理后,HUVEC细胞增殖活性降低,主要表现为有丝分裂计数降低,细胞的生长抑制率及移行抑制率增加.③细胞生长减慢,TIMP-3能有效抑制G1、S期的细胞;抑制细胞从G2期进入M期;同时促进细胞的凋亡等.结论:TIMP-3具有抑制内皮细胞增殖、迁移、促进细胞凋亡,进而抑制血管生成的作用.
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TIMP-3在移植物慢性排斥反应血管病变中的作用研究
目的 探讨TIMP-3在移植物慢性排斥反应血管病变中的作用.方法 在大鼠移植段主动脉转染TIMP-3质粒,利用免疫组织化学法测定移植段腹主动脉内MMP-1,2、TIMP-3表达;Northern杂交分析MMP-2表达;酶图分析术后MMP-2的活性.结果 ①同系移植组MMP-1,2、TIMP-3表达均较低;异系移植组MMP-1,2、TIMP-3表达显著增加.②转染TIMP-3的异系移植组术后1、2周时TIMP-3免疫组化染色密度指数为(1.7±1.1)和(0.9±0.4),较单纯异系移植组、同系移植组明显增强,有显著差异(P＜0.05).③转染TIMP-3的异系移植组MMP-2活性相对单纯异系移植组、同系移植组明显降低.结论 调控MMPs与TIMPs之间的平衡,利用TIMP-3可能有效抑制MMPs表达及活性,干预细胞外基质的形成,从而减缓CR的发生.
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MMP-7、MMP-9和TIMP-3在骨巨细胞瘤中的表达及临床意义
目的：探讨基质金属蛋白酶（MMP）‐7、MMP‐9和金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP）‐3在骨巨细胞瘤中的表达及临床意义。方法运用免疫组织化学法，检测 MMP‐7、MM P‐9、TIMP‐3和 CD34在骨巨细胞瘤组织标本中的表达情况，对其在肿瘤非复发组和复发组间的关系进行分析。结果 MMP‐7、MM P‐9和 TIMP‐3在骨巨细胞瘤中的阳性表达率分别为97．6％、100．0％和92．8％。 MM P‐7、MMP‐9的表达和 MVD 在骨巨细胞瘤复发组和非复发组间比较，差异有统计学意义（P ＜0．01）， MMP‐7、MMP‐9表达与 MVD 存在正相关性（均 P＜0．05）；TIMP‐3的表达在骨巨细胞瘤复发组和非复发组间比较，差异无统计学意义（P＞0．05），与 MVD 不存在相关性（P＞0．05）。结论 MMP‐7、MMP‐9和 TIM P‐3在骨巨细胞瘤中高度表达，MMP‐7、MMP‐9表达失衡可能会加速肿瘤血管形成并影响肿瘤的复发。
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TIMP-3和mtp53在非小细胞肺癌中的表达及意义
背景与目的 基质金属蛋白酶组织抑制剂-3(tissue inhibitor of metalloproteinases-3,TIMP-3)可通过多种途径调节肿瘤的浸润和转移,且可能与突变型p53(mutant-type p53,mtp53)存在一定的相关性.本研究旨在利用组织芯片技术检测TIMP-3和mtp53在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织及其淋巴结转移癌中的表达并探讨其意义.方法 应用免疫组织化学LSAB法和Elivision法检测24例良性病变肺支气管黏膜上皮组织(对照组)、288例NSCLC组织(原发灶)及106例淋巴结转移灶癌组织(转移灶)中TIMP-3和mtp53的表达.结果 原发灶与转移灶中TIMP-3的表达明显低于对照组(P＜0.001),而mtp53的表达明显高于对照组(P＜0.001)；TIMP-3和mtp53在伴有/不伴有淋巴结转移的原发灶中的表达差异有统计学意义( P=0.015,P=0.030).TIMP-3的表达与NSCLC的病理学分级有关( P=0.030),mtp53的表达与NSCLC的TNM分期和组织学类型有关(P=0.016,P=0.004).TIMP-3与mtp53 在原发灶中的表达呈负相关( P=0.008),其表达均与NSCLC患者的术后生存率有关(P=0.011,P=0.003).结论 TIMP-3的低表达和mtp53的高表达都可促进肺癌的转移,且二者在肺癌转移中相互抑制,可能成为研究NSCLC转移机制的新靶点.
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TIMP-3基因甲基化调控与大肠癌发生发展的关系研究
目的:探讨TIMP-3甲基化调控与大肠癌发生发展的关系.方法:随机收集45例大肠癌病例、42例大肠腺瘤病例、48例非肿瘤性大肠病例标本,用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)分别检测TIMP-3基因启动子5'CpG岛甲基化状况.结果:非肿瘤性大肠病变、大肠腺瘤、大肠癌分别有0例 (0.00%)、5例 (11.90%)、14例(31.11%)TIMP-3基因启动子发生甲基化.大肠癌组织TIMP-3甲基化率高于非肿瘤性大肠病变(P＜ 0.01)和大肠腺瘤(P＜ 0.05).大肠腺瘤TIMP-3甲基化率高于非肿瘤性大肠病变(P＜ 0.05).大肠癌肝转移组、淋巴结转移组TIMP-3基因甲基化率分别高于非肝转移组(P＜ 0.01)、非淋巴结转移组(P＜ 0.01);Duck's C+D组甲基化率分别高于Duck's A+B组(P＜ 0.01).结论:大肠癌TIMP-3基因的高甲基化在大肠癌的发生、发展中发挥重要作用,对于大肠癌的早期预防、诊断、恶性程度及预后判断有重要意义.
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祛风散寒除湿中药正清风痛宁缓释片对小鼠软骨细胞TGF-β、IL-1β、Fstl-1、TIMP-3表达水平的影响
目的：探讨祛风散寒除湿法治疗骨关节炎的分子机制。方法：以正清风痛宁缓释片为研究载体，通过实时定量PCR试验，检测软骨细胞转化生长因子-β、白细胞介素-1β、卵泡抑素样蛋白-1、基质金属蛋白酶组织抑制因子-3 mRNA表达水平。结果：在正清风痛宁缓释片水提液高、中、低剂量组（以下简称S100、S50、S25组）以及模型对照组软骨细胞都有软骨细胞转化生长因子-β、白细胞介素-1β、卵泡抑素样蛋白-1、基质金属蛋白酶组织抑制因子-3 mRNA表达。软骨细胞转化生长因子-βmRNA表达量，S100、S50、S25组明显高于模型对照组（P<0.01），而S25组与模型对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）；白细胞介素-1βmRNA表达量S50组明显低于模型对照组，差异有统计学意义（P<0.01），S100组与模型对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）；S25组白细胞介素-1β表达量与模型对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）；卵泡抑素样蛋白-1 mRNA表达量S100、S50、S25组均高于模型对照组，但差异无统计学意义（P>0.05）；基质金属蛋白酶组织抑制因子-3 mRNA表达量，S50、S100组明显高于模型对照组（P<0.01），而S25组与模型对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：祛风散寒除湿中药正清风痛宁缓释片对关节软骨具有保护作用，其对骨关节炎软骨的保护作用可能是通过上调软骨细胞转化生长因子-β、卵泡抑素样蛋白-1及基质金属蛋白酶组织抑制因子-3 mRNA在软骨细胞的表达及下调炎性致病因子白细胞介素-1β的表达来实现的。
