首页 > 文献资料
-
Attractin在体外培养大鼠睾丸Leydig细胞的表达
目的:探讨Attractin(Atrn)在培养大鼠睾丸leydig细胞的表达.方法:体外培养成年雄性SD大鼠睾丸leydig细胞,采用实时荧光定量RT-PCR检测Atrn mRNA表达,western blot检测Atm蛋白的表达,同时应用化学发光法检测细胞睾酮分泌水平.结果:在体外培养大鼠睾丸leydig细胞过程中,Atrn mRNA、Atrn蛋白表达量和睾酮生成量逐渐减少.Atrn蛋白表达量与Atrn mRNA表达量(r=0.953,P＜0.05)和睾酮生成量(r=0.976,P＜0.01)成正相关.结论:大鼠睾丸Leydig细胞AtrnmRNA,Atrn蛋白表达量随培养天数的延长而减少,可能与睾酮的变化有关.
-
敲除Attractin或Mahoganoid基因对雄性小鼠生殖内分泌激素的影响
目的:探讨敲除Attractin(Atrn)或Mahoganoid(Md)基因对雄性小鼠生殖内分泌激素的影响.方法:选取成年雄性Atrn基因敲除纯合子、Md基因敲除纯合子及正常小鼠(均为C3H/Hej种系)各12只设为Atrn基因敲除组、Md基因敲除组和对照组.内眦静脉取血清取外周血,化学发光法检测血清睾酮(T)、雌二醇(E2)浓度,用酶联免疫法(ELISA)检测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和泌乳素(PRL)浓度,进行组间浓度对比.结果:Atrn基因敲除组和Md基因敲除组的外周血E2、LH、FSH、PRL浓度均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);血清T浓度Atrn基因敲除组高于对照组,而Md基因敲除组低于对照组,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:Atrn或Md基因敲除后雄性小鼠的外周血E2、LH、FSH、PRL浓度均有下降,其具体机制及对外周血T浓度的影响有待进一步研究.
关键词： Attractin Mahoganoid 基因敲除 生殖内分泌激素 -
Attractin基因敲除鼠下丘脑-垂体-睾丸轴组织学的观察
目的:观察Attractin基因敲除雄鼠下丘脑、垂体、睾丸等器官的组织学改变.方法:取Attractin基因功能丧失的雄鼠和正常雄鼠各6只分成实验组和对照组,颈椎脱臼处死后迅速取其下丘脑、垂体、睾丸和附睾组固定,石蜡包埋,并制做HE切片.结果:Attractin基因功能丧失的雄鼠下丘脑和垂体HE切片发现明显的海绵状变性.睾丸和附睾HE切片未发现明显改变.结论:Attractin基因功能的丧失能引起雄鼠下丘脑和垂体的海绵状变性,但未引起睾丸和附睾明显的组织学改变.
关键词： Attractin 下丘脑-垂体-睾丸性腺轴组织 HE切片 雄鼠 -
Attractin基因的研究进展
近年来,常染色体隐性基因Attractin已成为当前医学的研究热点之一.该基因在生物体内广泛分布,发挥重要的生理和病理作用.本文介绍了Attractin基因特点、表达、功能及分子作用机制.为以后的课题研究提供思路.
-
小鼠睾丸支持细胞Attractin基因的抗氧化和抗凋亡作用的初步研究
目的:观察Attractin(Atrn)基因不同程度缺失对小鼠睾丸支持细胞抗氧化和抗凋亡的作用,及其对细胞超氧化物歧化酶(SOD)、caspase6表达的影响. 方法:观察Atrn基因正常表达、部分缺失、完全缺失的三组细胞(psiRNA-TM4、psiAtrn-TM4、mu-SC)的细胞凋亡指数;采用荧光定量PCR、Western印迹技术检测SOD、caspase6 mRNA及蛋白表达水平;采用化学比色法检测细胞中SOD活性和丙二醛(MDA)含量. 结果:与对照组psiRNA-TM4比较,抑制Atrn基因的表达后,支持细胞的SOD mRNA表达水平下降,psiAtrn-TM4、mu-Sc组细胞SOD mRNA表达量分别下降了70.76％和92.58％,caspase6 mRNA表达水平上升,分别为对照组的5.28倍和2.97倍;蛋白水平的变化趋势与mRNA结果一致,psiAtrn-TM4及mu-Sc组细胞中SOD蛋白的表达分别下降了65.11％和71.0％,caspase6蛋白表达分别为对照组的3.4倍和2.5倍,差异均有统计学意义(P＜0.05).抑制Atrn基因表达后,psiAtrn-TM4、mu-SC组细胞凋亡率分别增加16.22％和22.03％,SOD活性分别下降23.00％和39.37％,mu-SC组MDA含量增加155.22％,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论:Atrn基因对睾丸支持细胞功能的影响是通过多途径实现的,抗氧化应激以及调控凋亡途径可能在其中起着重要作用.
-
Attractin和Mahogunin在神经变性中的发病机制
神经变性性疾病首先由于它们的典型的临床症状和组织学特征而被认识的.近年来由于研究这种疾病的病理生理学的方法逐渐地发展,使我们能够从分子和基因的水平较好地理解它们.例如,发现引起罕见的家族性的帕金森病(Parkinsonism)的基因,从而揭示蛋白代谢的缺损在非家族性疾病的发病机理方面起着关键性作用[1～4].常染色体显性帕金森病是由于alpha-synuclein基因的点突变,干扰蛋白质的正常折叠所致, 这种异常的蛋白质会被ubiquitinated 并且转运到蛋白小体(proteasome) 去分解.如果这种蛋白的产生超出细胞的分解能力,它们会堆积在胞浆内形成 Lewy 小体.
关键词： Attractin Mahoganoid 神经变性性疾病 -
重组分泌型Atrn蛋白（rAtrn）对原代培养大鼠睾丸Leydig细胞功能的影响
目的：检测rAtrn对基础状态和hCG刺激下体外培养大鼠睾丸Leydig 细胞睾酮分泌的影响，进一步阐明Atrn在生殖内分泌中的作用。方法：分别用0、500、1000、2000、4000、8000 ng/ml rAtrn对基础状态和10ng/ml hCG刺激下的原代培养大鼠睾丸Leydig 细胞进行干预，分别于干预24h、48h收集培养液检测睾酮含量。结果：基础状态和hCG刺激下，不同浓度rAtrn干预24h、48h后，大鼠 Leydig细胞睾酮产量无显著性差异。结论：重组分泌型 Atrn在0～8000ng/ml 剂量范围内，均不能显著影响体外培养大鼠L ey dig 细胞生成睾酮的能力。
关键词： Attractin leydig cell 睾酮 -
AttractinmRNA和Attractin蛋白在原代培养小鼠Leydig细胞的表达
目的：检测 Attractin（Atrn）在原代培养小鼠睾丸leydig 细胞的表达。方法：体外培养性成熟雄性小鼠睾丸 leydig 细胞，采用RT-PCR检测 Atrn mRNA 表达，western blot 和免疫荧光细胞化学方法检测 Atrn蛋白表达。结果：RT-PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳，显示为单一、特异扩增条带，与预期产物片断大小一致。 Western Blot 检测到 Atrn蛋白，分子量约为160KD ，免疫荧光细胞化学结果显示 Atrn蛋白在小鼠睾丸 Leydig 细胞胞膜和胞浆表达。结论：原代培养小鼠睾丸Leydig 细胞表达 Atrn mRNA 和Atrn蛋白，Atrn蛋白定位于细胞胞膜和胞浆。
-
Attractin mRNA 和 Attractin 蛋白在小鼠睾丸发育过程中的表达变化
目的：通过定量检测和比较 Attractin（Atrn） mRNA 和 Atrn蛋白在小鼠睾丸发育过程中的动态变化，为进一步研究Atrn在睾丸的生理作用提供实验依据。方法：用相对定量法检测 Atrn mRNA 在生后1、5、10、15、21、28、35、42、56和120天龄小鼠睾丸发育过程中的表达变化，并用Western blot 方法检测各天龄小鼠睾丸Atrn蛋白表达。结果：Atrn mRNA 和Atrn蛋白在小鼠睾丸发育过程中的表达变化趋势相似，在生后第1天两者均有表达，但是处于相对较低水平，此后是一个逐渐增高的过程，在28天出现较明显上调。在这之后，两者表达变化出现差异。 Atrn mRNA 在生后28～35天表达丰富，随后稳定于这一水平，Atrn 蛋白表达则是继续增加直至成年。结论：Atrn参与精子发生的启动、精原干细胞的增殖分化、精母细胞的减数分裂和精子形成等过程，并有助于L ey dig 细胞进一步成熟。
关键词： Attractin 小鼠 睾丸 实时定量逆转录多聚酶链反应 -
Attractin在小鼠睾丸组织的表达
目的：检测 Attractin (Atrn)mRNA和 Atrn蛋白在小鼠睾丸组织中的表达以及 Atrn蛋白在睾丸组织的分布.方法：取10~12周龄雄性BALB/c 小鼠睾丸组织,应用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot方法,检测 Atrn mRNA和 Atrn蛋白在成熟雄性小鼠睾丸组织中的表达,用免疫组织化学方法检测 Atrn蛋白在睾丸组织的分布.结果：RT-PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,显示为单一、特异扩增条带,与预期产物片断大小一致. Western Blot 检测到 Atrn蛋白,分子量约为160KD.免疫荧光组织化学结果显示 Atrn蛋白在小鼠睾丸组织分布广泛,表达于精原细胞、精母细胞、精子细胞、Sertoli细胞、Leydig细胞和管周肌样细胞,主要表达于胞膜.结论：成熟小鼠睾丸组织表达 Atrn mRNA和 Atrn蛋白.Atrn蛋白定位于间质细胞和生精细胞胞膜.
-
hCG调节原代培养小鼠睾丸Leydig细胞Atrn mRNA和Atrn蛋白的表达及与睾酮分泌的相关性
目的 探讨hCG刺激的Leydig细胞睾酮分泌与Atrn mRNA和Atrn蛋白表达的关系.方法 将原代培养的Leydig细胞分为5组,分别在培养液中加入0、0.1、1、10、100 ng/mL hCG,培养24 h后吸取培养液用于测定睾酮分泌量.同时提取细胞mRNA和总蛋白,用实时定量RT-PCR和Western blot方法分别检测Leydig细胞中Atrn mRNA和Atrn蛋白表达量.结果 刺激24 h后,与0 ng/mLhCG剂量组相比较,0.1,1,10,100 ng/mL hCG剂量组睾酮生成量都明显增加,统计学差异较大(P＜0.01).Leydig细胞Atrn mRNA表达量增加(0.1 ng/mL hCG组P＜0.05,其余剂量组P＜0.01).睾酮生成量与Atrn蛋白表达量(r=0.987,P＜ 0.01)和Atrn mRNA表达量(r=0.982,P＜0.01)呈正相关.结论 原代培养的Leydig细胞在hCG刺激下,睾酮生成量、Atrn mRNA和Atrn蛋白表达量都呈现hCG剂量依赖性的增加.
