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MicroRNA-139-5p对多形性胶质母细胞瘤细胞增殖和细胞周期的影响及其机制研究
目的 探讨MicroRNA-139-5p(miR-139-5p)在多型性胶质母细胞瘤中对细胞增殖和细胞周期的影响及其机制.方法 通过miR-139-5p类似物、miR-139-5p抑制物和阴性对照microRNA分别转染U87MG和T98G细胞,RT-PCR分析miR-139-5p表达,通过MTT法观察其对细胞增殖的影响,通过流式细胞术检测细胞周期和凋亡,通过Western blot检测ELTD1蛋白表达.结果 转染miR-139-5p后胶质瘤细胞增殖能力下降、细胞凋亡增加,细胞侵袭能力下降,流式细胞术结果显示S期细胞比例增加,G0/G1期细胞比例下降.Western blot分析显示在miR-139-5p过表达的细胞中,ELTD1蛋白水平显著下降.结论 miR-139-5p过表达可抑制胶质瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡,其机制可能与下调ELTD1蛋白和调节细胞周期有关.
关键词： miR-139-5p 胶质瘤 ELTD1 细胞周期 -
miR-139-5p调控KRAS突变结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的功能与机制研究
目的 建立结直肠癌KRAS突变细胞DKO-1的miR-139-5p功能获得模型,探讨miR-139-5p对KRAS突变结直肠癌细胞恶性表型的影响及可能的分子机制. 方法 利用real-time PCR检测miR-139-5p在KRAS突变同源细胞系中表达;通过瞬时转染建立miR-139-5p功能获得细胞模型;通过绘制MTT生长曲线和集落形成实验检测miR-139-5p对DKO-1细胞生长增殖的影响;通过细胞划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-139-5p对DKO-1细胞生长迁移侵袭的影响;通过生物信息学分析miR-139-5p的下游靶基因,利用双荧光酶报告基因实验验证miR-139-5p与靶基因的直接结合情况. 结果 miR-139-5p在KRAS突变结直肠癌细胞中表达降低(P<0.01);过表达miR-139-5p能够抑制DKO-1细胞的生长能力(P<0.01)、集落形成能力(P<0.01)、迁移和侵袭能力(P<0.01);miR-139-5p能够直接结合FOS基因的3′-UTR区(P<0.01). 结论 miR-139-5p能够抑制DKO-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制FOS基因表达有关.
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miR-139-5 p和miR-210联合检测对子痫前期早期诊断的价值
目的：探讨miR-139-5p和miR-210联合检测在子痫前期的早期诊断价值。方法选择PE患者30例为PE组，正常产妇30例为N组，正常未孕女性30例为Z组，分别采用实时荧光定量-逆转录聚合酶链反应技术联合检测其血清中miR-139-5p和miR-210的表达量，并用ROC曲线分析miR-139-5p、 miR-210及两者联合检测对PE的诊断效能。结果PE组miR-139-5p和miR-210的相对表达量显著高于N组和Z组(P均<0.05)， miR-139-5P、 miR-210及两者联合检测所得曲线下面积分别为0.709、0.733、0.771。结论 miR-139-5p和miR-210联合检测对PE早期诊断具有重要价值。
关键词： miR-139-5p miR-210 子痫前期 -
miR-139-5p在多形性胶质母细胞瘤中的表达与靶基因验证
目的 探索miR-139-5p在多形性胶质母细胞瘤(GBM)患者中的表达水平,预测和验证miR-139-5p的靶基因.方法 利用实时定量PCR检测GBM患者和对照组脑组织中miR-139-5p的相对表达水平.选择starBase在线工具预测miR-139-5p的靶基因,通过TargetScan数据库分析miR-139-5p与靶基因的结合位点,并采用萤光素酶报告实验验证.检索miRPathDB数据库分析miR-139-5p靶基因显著富集的pathways,运用miRTargetLink工具构建miR-139-5p与其靶基因之间的交互网络.结果 相对于对照组,miR-139-5p在GBM患者脑组织中的表达水平显著下调.starBase预测工具取交集后得到8个靶基因,其中真核翻译起始因子4γ2(EIF4G2)为miR-139-5p靶基因之一.萤光素酶报告实验表明EIF4G2基因3′UTR区中含有明确的miR-139-5p结合位点.pathway富集分析发现靶基因显著富集于胰岛素样生长因子(IGF)-1信号通路、神经营养因子通路、趋化因子通路、T细胞受体通路、Ras信号通路和转化生长因子(TGF)-β信号通路等.结论 miR-139-5p在GBM患者中低表达,可能通过抑制靶基因EIF4G2表达参与肿瘤发生相关的过程.
关键词： 多形性胶质母细胞瘤 miR-139-5p 靶基因 生物信息学 -
miR-139-5p在前列腺癌患者外周血中的表达及临床意义
目的:研究miR-139-5p在前列腺癌患者外周血中的表达及临床意义.方法:收集2015年4月至2016年9月于我院进行诊治的65例前列腺疾病患者和20例男性健康志愿者外周血样本,使用RT-qPCR方法检测各组miR-139-5相对表达量,统计分析前列腺癌患者外周血miR-139-5p水平与临床特征相关性,使用ROC曲线分析外周血miR-139-5p诊断前列腺癌的临床价值.结果:与良性增生组(n=15)患者和对照组(n=20)健康志愿者相比,前列腺癌组(n=50)患者外周血中miR-139-5p相对表达量均显著升高(P均＜0.05).中高分化、转移癌、Gleason评分高危前列腺癌患者外周血miR-139-5p相对表达量显著高于低分化、原位癌和Gleason评分中危的前列腺癌患者(P均＜0.05).外周血miR-139-5p在区分前列腺癌和良性前列腺增生或健康人中特异性和敏感性均较高,ROC曲线下面积为0.942(95％CI:0.0.785～0.971).结论:miR-139-5p在50例前列腺癌患者外周血中呈高表达,或可作为非侵入性前列腺癌诊断标志物.
关键词： miR-139-5p 前列腺癌 外周血清 肿瘤标志物 -
结直肠癌中miR-139-5p与TGIF1的表达及相关性的研究
目的:检测微RNA (microRNA,miRNA,miR) miR-139-5p和转化生长因子β-诱导因子1 (transforming growth factorβ-induced factor 1,TGIF1)mRNA在结直肠癌中的表达情况,分析二者的关系及其在结直肠发展及预后中可能的作用.方法:采用实时荧光定量PCR法检测miR-139-5p在44例结直肠癌及其相应癌旁正常组织中的表达情况,通过TargetScan软件预测miR-139-5p的靶基因,并采用实时荧光定量PCR法检测TGIF1 mRNA在44例结直肠癌及其相应癌旁正常组织中的表达情况.在结肠癌HCT116细胞中转染miR-139-5p前体(pre-miR-139),随后采用实时荧光定量PCR和双荧光素酶报告系统鉴定miR-139-5p与TGIF1间的相互作用.统计分析TGIF1 mRNA在结直肠癌组织中的表达情况与结直肠癌患者临床病理特征及预后的相关性.结果:miR-139-5p在结直肠癌组织中的表达水平较癌旁正常组织明显降低(P＜0.001),而TGIF1 mRNA在癌组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P＜0.001).结直肠癌组织中miR-139-5p与TGIF1 mRNA的表达水平呈显著负相关(r=-0.708,P＜0.001).将pre-miR-139-5p转染结肠癌HCT116细胞后,细胞中miR-139-5p的表达水平显著上调(P＜0.001),而TGIF1 mRNA的表达则呈略微下调的趋势(P=0.09).miR-139-5p与其靶基因TGIF1相互作用,TGIF1 mRNA的表达水平与结直肠癌患者肿瘤浸润深度有关,但其表达和患者生存期无关.结论:miR-139-5p在结直肠癌组织中表达显著下调,TGIF1 mRNA在结直肠癌中表达显著上调.miR-139-5p可能通过下调TGIF1的表达,参与了结直肠癌的发展.
关键词： 结直肠肿瘤 微RNA miR-139-5p 转化生长因子 -
miR-139-5p低表达重组慢病毒的构建及其在H9c2细胞的表达验证
目的：构建miR-139-5p低表达慢病毒载体,检测其在H9c2细胞的表达效果。方法根据大鼠miR-139-5p序列,设计合成其靶点序列,并合成寡核苷酸双链,克隆入慢病毒载体pGC-LV,与pHelper 1．0和pHelper 2．0共转染293T细胞,包装病毒。收取病毒上清液,纯化后感染 H9 c2细胞。
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microRNA-139-5p及其靶基因Notch1在结直肠癌中的作用
目的：探讨microRNA-139-5p（miR-139-5p）在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞转移和侵袭的影响。
方法：用荧光定量PCR方法检测miR-139-5p在结直肠癌组织与不同结直肠癌细胞株中的表达变化；用Boyden小室分析和伤口愈合实验检测miR-139-5p转染及miR-139-5p抑制对结直肠癌细胞转移和侵袭能力的影响；生物信息学方法预测miR-139-5p的靶基因，并采用荧光素酶报告基因实验验证， Westernblot方法检测miR-139-5p转染对靶基因表达的影响。
结果：与各自的正常对照组比较，结直肠癌组织与结直肠癌细胞系中miR-139-5p表达均明显降低（P<0.05）。结直肠癌DLD1细胞和HCT116细胞转染miR-139-5p后，转移与侵袭能力均明显降低（均P<0.05），而miR-139-5p抑制剂处理后，两种细胞的的侵袭能力均明显增强（均P<0.05）。生物信息学预测显示，Notch1是miR-139-5p的靶基因，且得到荧光素报告实验结果证实。Westernblot结果显示，转染miR-139-5p后，结直肠癌DLD1细胞和HCT116细胞中Notch1蛋白表达均明显下调（均P<0.05）。
结论：miR-139-5p可能通过调节Notch1的表达而抑制肿瘤细胞的转移和侵袭，而下调的miR-139-5p可能在结直肠癌的发生发展中起了重要作用。关键词： 结直肿瘤 微RNAs miR-139-5p Notch1
