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高浓度葡萄糖条件下肾小球系膜细胞内源性烟酰胺磷酸核糖转移酶对波形蛋白表达的调控作用
目的:探讨高浓度葡萄糖条件下肾小球系膜细胞过度表达的内源性烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)对波形蛋白(Vimentin)表达的调控作用,阐明糖尿病并发肾脏炎症纤维化的形成机制.方法:取患严重自发性糖尿病的C57/BL6小鼠肾脏,以野生型C57/L86小鼠作为对照组,行病理切片和组织荧光染色,应用免疫共聚焦方法检测肾小球系膜细胞中内源性Nampt和Vimentin表达及定位;肾小球膜HBZY-1细胞随机分为4组,即0.56mmol·L-1低浓度葡萄糖(LG)对照组、200 mmol·L-1高浓度葡萄糖(HG)处理组、HG+ FK866组和HG+NMN组;高浓度葡萄糖干预5d后,分别施加FK866(10 μmol·L-1)和NMN(1 mmol·L-1)作用24 h后,通过免疫荧光和免疫印迹法检测细胞内源性Nampt、Vimentin、核因子κB p65 (NF-κBp65)和依赖于烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的组蛋白去乙酰化酶1 (Sirtl)表达水平;应用RT-PCR和免疫印迹等方法检测细胞Nampt和Vimentin表达水平.结果:与野生型C57/BL6小鼠组比较,严重糖尿病组小鼠肾小球明显萎缩,肾小球细胞内Vimentin表达水平随内源性Nampt表达水平升高而增加(P＜0.01);与0.56 mmol·L-1低浓度葡萄糖对照组比较,高浓度葡萄糖冲击细胞Nampt、NF-κBp65和Vimentin表达水平明显升高(P＜0.01),Sirt1表达水平明显降低(P＜0.01).HG+FK866和HG+NMN组肾小球系膜细胞中Nampt、Vimentin和NF-κBp65表达水平均较对照组明显降低(P＜0.01).结论:高浓度葡萄糖冲击条件下肾小球系膜细胞过度表达的内源性Nampt能够通过NF-κBp65和Sirt1信号通路促进Vimentin表达.
关键词： 高浓度葡萄糖 烟酰胺磷酸核糖转移酶 核因子κBp65 去乙酰化酶1 波形蛋白 -
去乙酰化酶1在人参皂苷Rg1体内正向调控造血干/祖细胞衰老中的作用
目的:探讨去乙酰化酶1 (SIRT1)在人参皂苷Rg1体内正向调控造血干/祖细胞(HSC/HPC)衰老中的作用.方法:免疫磁性分选法分离纯化雄性供体小鼠Sca-1+ HSC/HPC连续移植3代构建HSC/HPC衰老体内模型.60Co γ射线致死剂量辐射雌性受体鼠后分4组,照射对照组、衰老模型组、Rg1治疗衰老组和Rg1预防衰老组.衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养和细胞周期分析检测Rg1体内调控Sca-1+ HSC/HPC衰老的作用.荧光定量PCR及免疫印迹检测衰老调控分子SIRT1、核因子-κB(NF-κB) mRNA及蛋白的表达.结果:连续移植后受体鼠Sca-1+ HSC/HPC出现细胞衰老特征,随移植代数的增加,Sca-1+ HSC/HPC Go/G1期细胞比例及SA-β-Gal染色阳性率增高,CFU-Mix数量下降.与同代衰老模型组相比,Rg1治疗衰老组及Rg1预防衰老组受体鼠Sca-1+ HSC/HPC G0/G1期细胞比例、SA-β-Gal染色阳性率下降,CFU-Mix数量升高;SIRT6 mRNA及蛋白表达上调,NF-κB mRNA及蛋白表达下调;Rg1预防衰老组各指标变化均较Rg1治疗衰老组明显.结论:Rg1可能通过调控SIRT1/NF-κB信号轴发挥其在连续移植过程中抗Sca-1+ HSC/HPC衰老的作用.
关键词： 人参皂苷Rg1 去乙酰化酶1 核因子-κB Sca-1+造血干/祖细胞 衰老 -
氧化应激致组蛋白修饰在慢性阻塞性肺病发生发展中的作用
慢性阻塞性肺病（ chronic obstructive pulmonary disease ， COPD）是一种严重影响人类健康的疾病，目前为止发病机制尚不清楚。吸烟导致的肺组织氧化应激和慢性炎症是2个明确致病因素，以往氧化应激等环境因素和遗传因素在COPD发病中被认为是相互独立的危险因素，但是表观遗传学（ epigenetic ）的出现，把遗传和环境这2个独立的因素紧密地结合在一起。文中综述了COPD发病过程中，氧化应激所致的组蛋白修饰与COPD的肺部炎症、抗氧化反应、细胞凋亡、自噬及T细胞亚群的分化等病理改变的联系，揭示了表观遗传修饰在COPD发病中的重要地位，为该病的临床治疗提供更多的选择。
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miR-34a靶向调控Sirtuin 1表达对食管鳞癌细胞侵袭、转移的影响
目的 探讨miR-34a靶向调控去乙酰化酶1(Sirtuin 1)表达对食管鳞癌细胞侵袭、转移的影响.方法 采用miRNAs靶标预测软件、TargetScanHuman5.1生物在线工具预测Sirtuin 1可能是miR-34a的靶基因.将体外培养的人食管鳞癌细胞EC9706分别转染miR-34a mimic(EC9706/miR-34a组)、miR-34a scramble(EC9706/scramble组),转染48 h后收集细胞,采用Western blotting法检测 Sirtuin 1蛋白表达、Transwell 侵袭试验检测穿膜细胞数、细胞划痕实验检测细胞划痕愈合率.将裸鼠随机分为对照组和miR-34a组,分别经尾静脉注射转染miR-34a scramble和转染miR-34a agomir的EC9706细胞悬液,接种8周后处死裸鼠,取出双肺,计数肺转移瘤数量.结果 EC9706/miR-34a组及EC9706/scramble组细胞Sirtuin 1蛋白相对表达量分别为0.75±0.07、1.90±0.06,穿膜细胞数分别为(123.00±8.89)、(203.33±5.86)个,细胞划痕愈合率分别为(33.67±2.08)%、(64.00±2.65)%,两组比较P均<0.01.miR-34a组和对照组裸鼠形成肺转移瘤分别为(4.67±0.82)、(8.83±1.17)个,两组比较P<0.01.结论 Sirtuin 1是 miR-34a的靶基因.miR-34a通过靶向抑制Sirtuin 1蛋白表达抑制食管鳞癌EC970细胞的侵袭、转移.
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去乙酰化酶1在肝癌干细胞更新中的机制研究
目的 探讨去乙酰化酶l(Sirtuins,SIRTl)在肝癌干细胞(cancer stem cells,CSCs)更新中的作用及相关的分子机制.方法 获取肝CSCs,Western blotting和免疫荧光染色法检测CSCs和非-CSCs中SIRT1表达;包装过表达SIRT1的慢病毒,感染肝脏非-CSCs,Western blotting检测非-CSCs中SIRT1表达,克隆形成实验探讨过表达SIRT1后非-CSCs克隆形成能力,球体形成实验探讨非-CSCs的自我更新能力,裸鼠体内移植瘤实验探讨非-CSCs和过表达SIRT1的非-CSCs体内致肿瘤性;CSCs转染SIRT1特异性siRNA或NC-siRNA,或经不同浓度(2、4、6、8、12μmol/L)SIRT1特异性抑制剂VT6处理,然后检测CSCs的克隆形成能力、自我更新能力及体内致肿瘤性;Western blotting检测SOX2、c-Myc和Nanog蛋白表达;SIRT1特异性RNA或NC-siRNA与过表达SOX2的质粒共转染CSCs,克隆形成实验探讨CSCs克隆形成能力,球体形成实验探讨CSCs的自我能更新能力.结果 CSCs中SIRT1表达显著高于非-CSCs中SIRT1的表达(P＜0.01).与NC-siRNA转染组相比,siSIRT1转染组克隆形成能力与球体形成能力下均降了,且体内致肿瘤性也显著下降(P＜0.01);感染过表达SIRT1的慢病毒后,非-CSCs中SIRT1表达显著高于空载体对照组,且与对照组相比,过表达SIRT1后非-CSCs克隆形成能力与球体形成能力均提高(P＜0.01),且体内致肿瘤性也显著增强;Western blotting检测结果表明,敲低或抑制SIRT1表达后,SOX2、Nanog表达显著被抑制(P＜0.01),而c-Myc的表达无显著变化(P＜0.05);过表达SOX2显著逆转了敲低SIRT1表达对克隆形成能力和自我更新能力的抑制作用(P＜0.01).结论 SIRT1在肝脏CSCs的自我更新和致肿瘤过程中发挥重要作用,其可能为肝癌的治疗提供新的靶标.
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miR-494通过抑制SIRT1表达调节人宫颈癌Hela细胞系增殖和迁移
目的 观察宫颈癌组织中miR-494的表达情况及其对宫颈癌细胞系Hela增殖和迁移的影响,并对其相关机制进行初步的分析. 方法 RT-PCR方法检测miR-494在宫颈癌组织和宫颈癌细胞系中的表达情况.克隆形成实验检测miR-494对宫颈癌细胞系Hela增殖能力的影响;划痕实验检测miR-494对宫颈癌细胞系Hela迁移能力的影响.TargetScans软件预测miR-494可能的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验验证预测的靶基因.Western blot方法检测miR-494对预测靶基因表达的影响. 结果 miR-494在宫颈癌组织和宫颈癌细胞系中的表达较正常组织相比显著降低(P＜0.01).转染miR-494可显著抑制Hela细胞的增殖和迁移能力(P＜0.01),而转染anti-miR-494可增加Hela细胞的增殖和迁移能力(P＜0.01).Targetsscan软件预测miR-494可能的靶基因为去乙酰化酶1(sirtuin 1,SIRT1),且得到荧光素报告实验结果证实.Western blot结果显示转染miR-494可显著抑制Hela细胞中SIRT1的表达(P＜0.01),而转染anti-miR-494可增加Hela细胞中SIRT1的表达(P＜0.01). 结论 miR-494可通过调节SIRT1的表达而发挥宫颈癌抑制作用.
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去乙酰化酶1在消化道肿瘤中的研究进展
目的 总结去乙酰化酶1 (SIRT1)分子在消化道恶性肿瘤发生和发展过程中所起的重要作用.方法 查阅近年来国内外关于消化道肿瘤发生发展过程中SIRT1分子作用的文献并作综述.结果 SIRT1分子通过与中长链非编码RNA (LncRNA)、微小RNA (microRNA)和自噬相关联,在食管癌、胃癌、结直肠癌、肝癌和胰腺癌中高表达,影响消化道肿瘤的发生和发展.结论 SIRT1分子的异常表达与消化道肿瘤的发生和发展密切相关.
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白藜芦醇上调人肺泡上皮细胞SIRT1表达抑制高氧诱导的细胞凋亡
目的 探讨去乙酰化酶SIRT1激动剂白黎芦醇(Res)对高氧诱导人肺泡上皮细胞(HPAEC)凋亡的保护作用.方法 体外培养HPAEC,随机分为对照组、高氧组、Res组.培养24h,采用免疫细胞化学SP法检测caspase-9、X联锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、SIRT1蛋白的表达,采用MitoSOXTM、JC-1标记结合激光共聚焦显微镜分别检测HPAEC线粒体内活性氧(ROS)及其膜电位的变化,Western blot法检测SIRT1蛋白的表达,annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双标记结合流式细胞术检测HPAEC细胞凋亡率的变化.结果 对照组相比,高氧组HPAEC中caspase-9蛋白表达增强、线粒体内ROS增加、细胞凋亡率增加,而XIAP、SIRT1蛋白的表达减少、膜电位降低;与高氧组相比,Res组HPAEC中caspase-9的表达减弱、线粒体内ROS产生减少、细胞凋亡率降低,XIAP、SIRT1蛋白表达增强、膜电位增高.结论 Res通过上调HPAEC中SIRT1的表达,减少ROS的产生从而维持细胞膜电位抑制肺泡上皮细胞凋亡,减轻高氧所致肺损伤.
