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铅对孕鼠及其胎鼠肝微粒体药酶活性的影响
铅是一种不可降解的环境污染物质,在环境中可长期蓄积,可通过食物链、土壤、水和空气进入人体.近年来环境污染日益严重,人类铅摄入量及铅负荷不断升高,众多的研究表明,铅对人体的影响是全身性的,对神经、血液、消化、泌尿、生殖、心血管、免疫等系统均有毒性作用[1],本文拟观察孕鼠接触不同剂量铅对孕鼠、胎鼠肝药酶活性的变化,以进一步研究铅对孕妇及胎儿肝药物代谢功能的影响.
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清开灵注射剂等5种中药注射剂对大鼠肝微粒体CYP3A的体外抑制作用
目的:考察清开灵注射剂、金纳多注射剂、疏血通注射剂、参麦注射剂、康艾注射剂这5种临床常用的中药注射剂对大鼠肝微粒体CYP3A的体外抑制作用,预测发生药物相互作用的可能性,以确保这些中药注射剂临床应用的安全性与有效性.方法:采用SD大鼠肝微粒体体外孵育法,在孵育体系中加入底物睾酮和不同体积的清开灵注射剂等5种中药注射剂,用高效液相色谱法测定睾酮的羟化代谢产物6β-羟基睾酮的生成量反映CYP3A的活性,酮康唑用作阳性对照药.结果:在体外孵育体系中,10%的清开灵注射剂大约能抑制93.0%的6β-羟基睾酮生成,抑制效果明显高于其他4种相同浓度的中药注射剂.根据其抑制动力学曲线,计算出清开灵注射剂的IC90和Ki值分别为1.O%和0.7%.结论:在体外系统中,金纳多注射剂和疏血通注射剂对大鼠肝微粒体CYP3A无抑制作用,参麦注射剂和康艾注射剂对CYP3A显示出弱的抑制作用,清开灵注射剂对CYP3A有明显的抑制作用.提示当清开灵注射剂与经CYP3A代谢的药物联合用药时可能会发生药物相互作用,临床联合用药须谨慎.
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黄连黄芩及配伍诱导对大鼠肝微粒体5种CYP450亚酶活性的影响
探讨黄连和黄芩配伍代谢性相互作用的机制.大鼠连续ig黄连、黄芩及药对提取物7d诱导肝药酶后,采用cocktail探针底物与肝微粒体体外温孵法,通过HPLC同时检测肝微粒体中5种探针底物代谢消除率,评价各给药组对大鼠肝微粒体CYP450酶活性的影响.与空白组相比,黄连对CYP2D6,CYP1A2呈显著抑制作用；黄芩对CYP1 A2,CYP2E1,CYP2C9具有显著抑制作用.黄连、黄芩按1∶1配伍后仅对CYP1 A2显示抑制作用,对CYP2D6,CYP3A4则呈显著的激活作用；而黄连、黄芩按2∶1配伍后对代谢酶的激活作用消失,表现为对CYP1A2,CYP2C9的显著抑制.结果表明黄连与黄芩对P450酶主要表现为抑制作用,二者按一定比例配伍后作用特点发生改变,呈现出激活和抑制的双重性,且与配伍比例相关.推测黄连与黄芩配伍对代谢酶的抑制和诱导作用是其发挥减毒增效作用的原因之一.
关键词： 黄连 黄芩 配伍 细胞色素P450亚酶 Cocktail探针法 鼠肝微粒体 -
6种黄连生物碱对鼠肝微粒体UGTs及UGT1A1活性影响的体内外研究
为探讨黄连与其他药物代谢性相互作用的机制,对6种黄连生物碱与尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGTs)及UGT1 A1的相互作用进行了考察.采用大小鼠肝微粒体,以及生物碱小鼠体内诱导后的肝微粒体,构建微粒体体外孵育模型,以4-硝基酚(4-NP)为底物检测UGTs活性,β-雌二醇为底物检测UGT1 A1活性,利用UV和HPLC测定底物或代谢物含量.结果,在大鼠体外实验中,小檗碱、表小檗碱、黄连碱及药根碱均能显著抑制UGTs活性,其中表小檗碱抑制作用强;对UGT1A1,药根碱表现为弱的抑制作用(IC5o≈227 μmol·L-1),而黄连碱和巴马汀则呈显著的激活作用.小鼠体外实验中,小檗碱、黄连碱、药根碱和巴马汀对UGTs均呈显著的抑制作用;而6种生物碱对UGT1 A1均表现为显著的激活作用.小鼠体内诱导实验中,只有小檗碱对UGTs,药根碱对UGT1 A1活性呈现显著升高作用,其他生物碱的作用不明显.综上,黄连生物碱在对UGT的作用上显示出明显的种属和体内外的差异,同时生物碱结构的变化对UGT活性也会产生较大的影响,这种影响可能是黄连与其他药物发生代谢性相互作用的原因之一.
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探针药物法评价苦碟子注射液对大鼠肝微粒体CYP3A4的体外抑制作用
目的：观察苦碟子注射液对大鼠肝微粒体CYP3A4的体外抑制作用与CYP3A4酶底物合用药时可能产生的相互作用。方法采用SD大鼠肝微粒体体外孵育法，设阴性对照组、阳性抑制剂对照组和苦碟子注射液组。利用高效液相色谱法测定底物睾酮的减少量，计算得到IC50,评价苦碟子注射液对大鼠肝微粒体CYP3A4酶的抑制活性，以酮康唑为阳性对照药。结果在体外人肝微粒体孵育体系中，当Tris-HCl缓冲液浓度为0.1mol/L，pH为7.4，温度为37℃时，睾酮佳反应底物浓度为100μmol/L，佳孵育时间为40min，佳蛋白浓度为0.5mg/mL。阳性抑制剂酮康唑的IC50值为0.0707μmol/L，表明孵育体系满足CYP3A4酶抑制活性的评价要求。9个不同体积终浓度（0、0.01%、0.10%、0.20%、0.50%、1.00%、2.00%、5.00%、10.00%）的苦碟子注射液对CYP3A4酶的相对抑制率分别为0，2.94%、16.44%、22.70%、31.44%、37.47%、46.37%、51.74%和60.40%，半数抑制率IC50值为3.46%，高于其日用药量浓度。结论在体外正常剂量下，苦碟子注射液对人CYP3A4无明显抑制作用，可以与其底物联合用药。
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灯盏细辛注射液对大鼠肝微粒体CYP3A的抑制作用
目的:研究灯盏细辛注射液对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性的抑制作用.方法:在体外大鼠肝微粒体孵育体系中加入底物睾酮和不同体积的灯盏细辛注射液,用高效液相色谱法测定睾酮的羟化代谢产物6β-羟基睾酮的生成量反映CYP3A酶的活性.酮康唑用作阳性对照药.结果:在体外孵育体系中,灯盏细辛注射液对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性有抑制作用,IC_(50)和K_i值分别为0.40%和0.24%(V/V).结论:体外给药灯盏细辛注射液对大鼠肝微粒体CYP3A酶活性有抑制作用,符合混合型抑制模型.
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阿替洛尔的手性衍生化RP-HPLC法拆分及在鼠肝微粒体中的测定
目的:建立阿替洛尔两对映体在鼠肝微粒体中的RP-HPLC测定方法.方法:从鼠肝微粒体中提取阿替洛尔消旋体,采用手性衍生化试剂2,3,4,6-四-O-乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖异硫氰酸酯(GITC)对阿替洛尔消旋体进行柱前手性衍生化再以RP-HPLC拆分,测定鼠肝微粒体中阿替洛尔各对映体含量.结果:建立了在碱性条件下从水相中用乙酸乙酯提取阿替洛尔,用GITC进行柱前手性衍生化,以及用流动相NaH2PO4缓冲液-CH3OH-CH3CN(50:20:30)在ODS柱上拆分的分析方法,254 nm波长处检测.阿替洛尔对映体在1～20 μg·mL-1范围内呈良好线性关系,S(-)-阿替洛尔:Y=840 076.5X+141 742.8,r=0.999 8;R(+)-阿替洛尔:Y=873 157.2X+192 187.5,r=0.999 8),LOD为55 ng·mL-1,LOQ为145 ng·mL-1(RSD<7%),相对回收率在95%～105%(RSD<5%).用此方法试验了阿替洛尔在鼠肝微粒体中的代谢测定.结论:结果表明此方法可用于研究阿替洛尔消旋体在鼠肝微粒体中代谢和酶动力学研究.
