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β-珠蛋白BamHI酶切位点基因多态性分析
目的 为揭示日本人β-珠蛋白基因领域一个内切酶位点多态性基因频率的分布,随机抽取35例健康日本大学生进行了研究.方法 用限制性片段长度多态性(RFLPs)技术测定研究对象的基因型和等位基因.结果 发现日本正常人β-珠蛋白基因领域BamHI酶切位点多态性基因型频率依次为:β-Gg1/2=0.6286,β-Gg1/1=0.2285,β-Gg2/2=0.1429,两种等位基因频率依次为β-Gg*1=0.5429,β-G*g2=0.4572.而基因座经检验符合Hardy-Weinberg平衡,结果显示该扩增体系在日本人群等位基因分布较好.结论 所得数据与其他人群的数据进行了比较.这对遗传制图、基因分离、疾病的关联研究,法医学个体识别扣双生子的卵性鉴定有一定的应用价值.
关键词： 群体遗传 β-珠蛋白基因 BamHI位点多态性 -
中国汉族人群β-珠蛋白基因BP1蛋白结合区多态性分析
本研究旨在对中国汉族人群β-珠蛋白基因BP1蛋白结合区序列进行分析,获取β-珠蛋白基因BP1蛋白结合区的多态性信息,为探讨BP1蛋白结合区多态性与β-珠蛋白表达的相关性奠定基础.收集110例健康中国汉族人群的外周血,并抽提基因组DNA,通过聚合酶链反应扩增B-珠蛋白基因BPI蛋白结合区序列,经DNA测序确定BP1蛋白结合区的多态性序列.结果显示:在中国汉族人群的β-珠蛋白基因BP1蛋白结合区共发现2个多态性位点,它们分别是- 551位点C/T、- 530位点(AC)n(AT)xTy.在-551位点存在C和T碱基,其频率分别为60.4％和39.6％,而- 530位点(AC)n(AT)xTy多态性序列存在(AC)2(AT) 9T5、(AC)2 (AT) 8T5、(AC)2(AT)7T7、(AC)3(AT)7T5、(AC)2(AT)8T9、(AC)3(AT)8T5、(AC)2 (AT)10 T3、( AC)2 (AT)11 T3和(AC)2(AT)7T5共9种单倍型,它们在人群中的频率分别为33.2％、29.1％、24.1％、5.4％、3.2％、1.8％、1.4％、0.9％和0.9％.结论:在中国汉族人群B-珠蛋白基因BP1蛋白结合区内,- 530位点(AC)n(AT)xTy多态性信息丰富,其中( AC)2 (AT) 9T5、( AC)2 (AT) 8T5和(AC)2 (AT) 7T7是三种常见单倍型.(AC)3(AT)8T5是一种新类型多态性序列.这些(AC)n(AT)xTy多态性与β-珠蛋白表达的相关性有待深入研究.
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温州籍轻型β珠蛋白合成障碍性贫血患者的基因多态性
本研究旨在对14例临床诊断的温州籍轻型β珠蛋白合成障碍性贫血患者的血液学及分子生物学进行分析,测定其PCR产物序列,找出引起该病的致病突变位点并进行单核苷酸多态性分析.对临床诊断的患者抽取静脉血,EDTA-K2抗凝,及时提取模板,设计相关引物,进行PCR扩增后测序,后经过序列比对和分析,找出引起β珠蛋白合成障碍性贫血的致病突变位点.结果表明:14例标本的DNA扩增产物测序分析中发现4例在IVS-2-654位点发生了C→T的杂合突变;1例为CD41/42位-TTCT缺失;2个位点存在单核苷酸多态性,分别是外显子1第59位的T/C多态性、IVS-2 nt 665,T/C多态性.结论:温州籍轻型β珠蛋白合成障碍性贫血患者单核苷酸多态性具有一定的特殊性;发现了两种基因突变类型,分别为IVS-2-654 C→T的杂合突变和CD41/42位-ITCT缺失.
关键词： β-殊蛋白合成障碍性贫血 β-珠蛋白基因 基因突变 单核苷酸多态性 DNA测序 -
β-珠蛋白基因新突变导致的β-珠蛋白生成障碍性贫血
本研究对1例轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者的β-珠蛋白基因进行序列分析,寻找基因的致病突变.提取患者外周血基因组DNA,扩增全长β-珠蛋白基因,然后对扩增产物进行DNA测序.结果显示,患者的β-珠蛋白基因1号内含子存在杂合IVS-I-129(A→G)突变.结论:IVS-J-129(A→G)突变为剪接突变使未成熟的β-珠蛋白基因mRNA产生剪接异常,导致其后的β-珠蛋白基因翻译错误.该突变为首次报道.
关键词： β-珠蛋白基因 突变 β-珠蛋白生成障碍性贫血 -
β地中海贫血一个特殊基因突变的家系分析
目的:对一个国人罕见的重型地中海贫血基因突变[CD41/42(-TCTT)-90(C→T)]及其父母进行基因分析.方法:采用PCR/ASO探针杂交法检测中国人常见17种β-地贫基因突变,β-珠蛋白基因全长DNA克隆测序技术分析其突变基因型.结果:发现先证者父亲携带中国人常见基因突变CD41/42(-TCTT),母亲则为中国少见地中海贫血基因突变-90(C→T),而先证者则为密码子CD41/42(-TCTT)缺失突变复合-90(C→T)转录子突变.结论:-90(C→T)在我国目前仅发现1例家系突变.
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新疆克里雅人β-珠蛋白基因多态性分析
目的 探讨血红蛋白病的点突变有关β-珠蛋白AvaII位点基因多态性的分布规律.方法 以居住于塔克拉玛干沙漠腹地克里雅河下游封闭人群(克里雅人群)为研究对象,采用聚合酶-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术和凝胶成像分析方法,对54例无血缘关系的健康克里雅人群的染色体进行检测,应用SPSS 12.0统计软件分析基因型频率、基因频率分布,并与其他种族进行比较.结果 调查人群β-珠蛋白AvaII位点基因的等位基因频率:β-Gg1=42.59%,β-Gg2= 57.41%;基因型频率依次为:β-Gg1/2=48.15%,β-Gg1/1=18.52%,β-Gg2/2=33.33%,3种基因型的分布符合哈迪-温伯格(Hardy-Weinberg)平衡吻合度定律.与外国人群相比,β-Gg1/1型分布频率显著高于韩国和柬埔寨人群(χ2 =7.154 3,χ2=6.102 4,P=0.005)而Gg2/2型分布频率显著低于中国南方汉族人群(χ2=6.216 3,P=0.01).β-Gg1和β-Gg2等位基因频率分析显示,克里雅人群同样与中国南方汉族和日本人群的差异有统计学意义(χ2=10.9351,P=0.001).而与其他的人群比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 新疆健康克里雅人群β-珠蛋白AvaII位点基因分布特征及其等位基因频率分布与其他人群不完全相同,存在不同民族与区域上的差异.
关键词： β-珠蛋白基因 AvaII位点多态性 克里雅人 -
轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者β-珠蛋白基因单核苷酸多态性分析
目的对临床诊断为轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者进行β-珠蛋白基因单核苷酸多态性分析.方法用PCR法对β-珠蛋白基因进行扩增,扩增产物经纯化后测序,确定其单核苷酸多态性.结果β-珠蛋白基因分析片段中共发现3个位点存在单核苷酸多态性,分别是外显子1第59位的T/C多态性、内含子2第-16位的G/C多态性及内含子2第-74位的T/G多态性.结论同国外报道的正常人群相比,轻型β-珠蛋白生成障碍性贫血患者的β-珠蛋白基因单核苷酸多态性位点显著减少,各位点的碱基频率也有不同.
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补肾益髓法对地中海贫血患者β-珠蛋白及BCL11A基因表达的影响
目的:探讨补肾益髓法对地中海贫血患者β-珠蛋白基因的调控作用及B细胞淋巴瘤11A蛋白(B-cell lymphoma 11A,BCL 11A)基因表达影响.方法:将82例患者随机分为对照组和治疗组,每组41例.对照组口服羟基脲片治疗,每日25 mg· kg-1,每周2次,6周为1个疗程,连续治疗2个疗程.治疗组:在对照组的治疗基础上,配合应用补肾益髓法治疗,方药组成:山萸肉、何首乌、熟地黄、补骨脂、黄芪、鳖甲、甘草.各每袋10 g,生药量相当于2.27 g中药原材,由中国中医科学院广安门医院大兴制剂中心生产,每日1袋,每日3次,温开水冲服,连续治疗3个月.观察两组患者治疗前后血常规、β珠蛋白基因mRNA(β-mRNA)、γ珠蛋白基因mRNA (γ-mRNA)、BCL 11A水平变化情况,并比较两组患者的临床疗效.结果:与治疗前比较,两组患者血红蛋白(hemoglobin,Hb)、红细胞总数(red blood cel,RBC)、网织红细胞(reticulocyte,Ret)、红细胞正均体积(erythrocyte mean corpuscular,MCV)、γ-mRNA及γ/(γ+β) mRNA水平均较治疗前明显升高,差异有统计学意义(P ＜0.05);BCL 11A及中医证候评分均较治疗前明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,治疗组患者治疗后Hb、RBC、Ret、MCV、γ mRNA、γ/(γ+β)mRNA表达水平改善情况及治疗有效率高于对照组,差异有统计学意义(P ＜0.05);BCL 11A水平及中医证候评分均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),两组之间及治疗前后β-mRNA水平比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);两组不良反应比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:补肾益髓法能有效降低地中海贫血患者BCL11A表达水平,提高Hb、WBC、Ret和γ-mRNA表达水平,具有较好的临床疗效,安全性良好,但对β-mRNA水平无明显影响,其具体作用机制有待于进一步研究.
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1例少见型β珠蛋白生成障碍性贫血-90位点突变病例报告
目的 对1例少见型β-珠蛋白生成障碍性贫血(简称β-地贫)-90位点突变病例进行结果分析.方法 应用常规血液学检查、碱性琼脂糖凝胶血红蛋白电泳进行表型分析;通过跨越断裂点聚合酶链反应(GAP-PCR)法检测α-地贫,反向点杂交(RDB)法检测β-地贫;应用DNA克隆测序技术对β-珠蛋白基因全长进行测序,检测β-珠蛋白基因突变类型.结果 通过对β-珠蛋白基因簇进行直接测序发现该患者为少见型β-地贫-90(C->T) beta++杂合突变(HBB:c.-140C>T).结论 联合应用血液学、血红蛋白电泳和基因测序技术可以明确先证者的基因型,对防治出生缺陷和提高人口素质都具有十分重要的意义.
关键词： β-珠蛋白生成障碍性贫血 β-珠蛋白基因 基因测序 突变 -
用跨越断裂点的PCR技术快速诊断一种HPFH缺失突变
目的 建立一种简便快速检测缺失型遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征(hereditary persistence of fetal hemoglobin,HPFH)的PCR基因诊断技术.方法 基于本室通过序列测定获得的该基因断裂点周围新的DNA顺序资料,采用跨越断裂点的三引物双重PCR设计方案,1个共用引物与2个分别针对正常和突变基因的引物在单管反应中构成2对特异性的PCR反应.结果 2个特异性扩增片段分别为565bp和376bp,与预期的PCR产物大小相符,其中565bp为正常等位基因的扩增产物;376bp产物示缺失型等位基因.此三引物双重PCR可在同一反应体系中进行,其结果能区别样品的不同基因型.结论 该法简便快速,可作为常规方法用于临床疑诊样品的分子筛查.
关键词： 遗传性持续性胎儿血红蛋白综合征 聚合酶链反应 β-珠蛋白基因 -
中国人群β-珠蛋白基因增强子区多态性分析
目的 对中国人群β-珠蛋白基因3'端增强子区序列进行分析,探讨β-珠蛋白基因增强子区的核苷酸多态性.方法 采集100名正常中国人外周血并抽提基因组DNA,通过聚合酶链反应扩增β-珠蛋白基因3'端增强子区,经DNA测序确定增强子区序列的变异.结果 在中国人群中,β-珠蛋白基因3'端增强子区共存在五个单核苷酸变异位点,它们分别是101G/C,182G/A,184C/A,221G/A,340A/T.其中101G/C,182G/A,184C/A和340A/T位点的单核苷酸在人群中出现的频率均大于1%.结论 在β-珠蛋白基因3'端增强子区的五个单核苷酸变异位点中,101G/C,182G/A,184C/A和340A/T为单核苷酸多态性,221G/A可能为突变.
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轻型β-地中海贫血的β-珠蛋白基因突变检测
目的对深圳地区临床诊断为轻型β-地中海贫血个体的β-珠蛋白基因进行突变分析.方法用PCR法对轻型β-地中海贫血个体的β-珠蛋白基因进行扩增,扩增产物经纯化后测序,确定其基因突变.结果在25例深圳地区轻型β-地中海贫血个体的β-珠蛋白基因所分析的片段中仅发现三种基因突变,它们分别是外显子1上的CD41/42(-TCTT)突变、启动子中-28(A→G)突变及内含子1上IVS-I-11(A→C)突变.结论在深圳地区轻型β-地中海贫血个体中仅发现两种流行的β-珠蛋白基因突变,同时发现一种新的β-珠蛋白基因突变.
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湖南地区206例儿童β-地中海贫血基因突变类型分析
目的 分析湖南地区儿童β-地中海贫血患儿珠蛋白基因缺陷类型,为开展相关的研究与治疗提供依据.方法 通过血液常规检查、血红蛋白电泳和红细胞渗透脆性分析筛查地中海贫血患儿,用PCR法扩增目的基因,使用反向膜杂交技术检测靶基因,判断基因突变类型,检测中国人8个常见及9个罕见β-地中海贫血基因突变位点.结果 206例儿童β-地中海贫血中突变基因类型共有17种,分别为纯合子13例,基因型是CD41-42(2.43 %),IVS-2-654(3.39 %)和CD17(0.49 %);杂合子175例,常见的基因型是CD41-42(40.77 %),IVS-2-654(22.81 %),CD17(7.76 %),-28(7.28 %),CD71-72(2.43 %);双重杂合子18例,基因型是CD41-42/IVS-2-654(2.43 %),IVS-2-654/-28(1.94 %),CD41-42/CD17(1.46 %),IVS-2-654/CD17(0.97 %),CD41-42/CD27-28(0.49 %),IVS-2-654/CD71-72(0.49 %),IVS-2-654/-29(0.49 %),CD41-42/-28(0.49 %).结论 本研究发现湖南地区儿童β-地中海贫血患儿β-珠蛋白基因缺陷类型共有17种,β-地中海贫血基因突变类型分布存在区域差异.
