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自噬抑制2-DG诱导内皮细胞凋亡
目的 探讨2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)诱导人脐静脉血管内皮细胞发生凋亡与自噬及两者之间的关系.方法 传代培养人脐静脉血管内皮细胞,在常氧实验条件下,细胞被分为对照组,不同浓度的2-DG组、2-DG联合甘露糖组、阳性对照组(衣霉素组),利用MTS比色法检测2-DG对人脐静脉血管内皮细胞增殖活性的影响;利用Western blot免疫印记技术,检测细胞内质网应激相关蛋白-葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的表达水平,以反映处理后的细胞内质网应激的水平变化;以Annexin V-PI流式细胞术检测人脐静脉血管内皮细胞凋亡.为了检测2-DG对细胞自噬的影响,引入自噬抑制剂3-MA,采用Western blot免疫印记技术,检测自噬相关蛋白Beclin 1和Atg5的表达水平,以反映处理后的细胞自噬水平变化.结果 2-DG组细胞增殖活力明显降低,与对照组相比具有统计学意义,且该抑制作用呈剂量依赖性;2-DG联合甘露糖组增殖活力有所增加,与单独2-DG组相比具有统计学意义;2-DG组凋亡率明显增加,与对照组相比具有统计学意义,2-DG联合甘露糖组细胞凋亡减少,与单独2-DG组相比具有统计学意义;2-DG组GRP78蛋白水平增加,与对照组相比具有统计学意义;加入甘露糖后,GRP78蛋白水平减少,与单独2-DG组相比具有统计学意义;2-DG组Bec-lin1和Atg5蛋白表达均有所增加,与对照组相比具有统计学意义;3-MA预处理细胞抑制自噬后,2-DG诱导的细胞凋亡增多,Beclin1和Atg5蛋白表达也有所减少,与2-DG组相比具有统计学意义.结论 2-DG显著抑制人脐静脉血管内皮细胞增殖,诱导人脐静脉血管内皮细胞凋亡及自噬;内质网应激可能是介导2-DG诱导细胞凋亡的相关作用机制;2-DG诱导的细胞自噬则能抑制细胞凋亡.
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2－脱氧葡萄糖对体外培养人γδT细胞CCR5表达及杀伤功能影响
目的：观察糖基化抑制剂2－脱氧葡萄糖（2－deoxy－D－glucose，2－DG）对γδT细胞增殖、趋化因子受体CCR5和杀伤功能的影响。方法：从健康人外周血中分离单个核细胞，加入到γδT细胞完全培养基培养获得γδT细胞。用不同浓度的2－DG诱导培养γδT细胞48 h后，用CCK－8法测定不同浓度2－DG组的γδT细胞增殖和杀伤能力；用流式细胞术检测γδT细胞CCR5的表达和杀伤功能指标的影响。结果：培养10 d后的γδT细胞纯度达到（88．18±3．41）％。2－DG浓度在0～1．0 mmol／L时对γδT细胞的增殖影响不明显，而当浓度大于1．0 mmol／L后能显著抑制γδT细胞的增殖。2－DG浓度在0～2．0 mmol／L范围内能促进CCR5的表达，且在0．5和1．0 mmol／L时能促进杀伤指标CD107a和穿孔素的表达及对结肠癌HCT116细胞的杀伤能力。结论：2－DG能促进γδT细胞表面趋化因子受体CCR5的表达，且在一定浓度范围内能提高γδT细胞的体外杀伤功能。
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2-DG增强TRAIL诱导鼻咽癌细胞凋亡的敏感性作用
目的 探讨糖基化抑制剂2-脱氧葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumors necrosis factor-related apotosis-inducing ligand,TRAIL)诱导肿瘤细胞凋亡作用的影响,以期为鼻咽癌的治疗提供新的靶点.方法 MTT法检测不同浓度(0、0.625、1.25、2.5、5、10 mmol·L-1)2-DG以及不同浓度2-DG与TRAIL(200 μg·L-1)合用对鼻咽癌细胞CNE-2的增殖抑制作用.溴化丙啶(propidium iodide,PI)单染检测2-DG(5 mmol·L-1)对TRAIL诱导鼻咽癌细胞CNE-2凋亡的影响;Western blot检测2-DG(5 mmol·L-1)处理鼻咽癌细胞CNE-2不同时间(0、6、16、24 h)葡萄糖调节蛋白(glucose-regulated protein 78,GRP-78)以及联合TRAIL处理后Caspase-3的表达;实验中检测了2-DG及TRAIL合用对集落克隆形成的影响.结果 5 mmol·L-1 2-DG作用于鼻咽癌细胞CNE-2 24、48、72 h细胞存活率分别为76.96%、70.83%、69.39%,而诱导CNE-2 24 h细胞凋亡率仅为7.7%.5 mmol·L-1 2-DG与TRAIL联合作用于鼻咽癌细胞CNE-2 24 h的凋亡率为78.9%,高于TRAIL单用诱导凋亡率38.2%,并且2-DG可增强TRAIL抑制鼻咽癌细胞CNE-2的集落克隆形成的作用.2-DG能上调GRP-78的活性并且增强Caspase-3的激活.结论 2-DG能增强TRAIL诱导鼻咽癌细胞的凋亡,其机制可能通过引起过度的内质网应激反应以及增强Caspase-3的激活.
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2-脱氧-D-葡萄糖增强紫杉醇抗小鼠乳腺癌移植瘤的作用
目的：观察2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG）联合紫杉醇（Taxol）对C3H小鼠乳腺癌移植瘤的抑制作用及其机制。方法建立肿瘤模型，待肿瘤体积达到100~300 mm3后，随机分为4组：对照组，2-DG组，Taxol组及2-DG和Taxol联用组。腹腔注射给药治疗18 d并观察记录肿瘤体积，每3 d 1次，绘制肿瘤生长曲线。接种后第19天处死动物，称量肿瘤质量，使用原位凋亡检测法(TUNEL)检测2-DG联合Taxol对肿瘤细胞凋亡的影响，免疫组化法检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果2-DG和Taxol联用组可明显抑制肿瘤生长（P<0.05），单用Taxol组抑瘤率为36.97%，联用组为66.06%。TUNEL结果显示2-DG和Taxol联用组肿瘤组织中出现大量蓝黑色凋亡细胞，明显多于对照组，2-DG组与Taxol组，且VEGF的表达明显降低。结论2-DG联合Taxol对C3H小鼠移植性乳腺癌生长具有明显的抑制作用，这可能与诱导肿瘤细胞凋亡及抑制VEGF表达有关。
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二甲双胍联合2-脱氧葡萄糖诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡与AKT信号通路相关性的研究
目的：研究二甲双胍联合2-脱氧葡萄糖(2-Deoxyglucose,2-DG)对人宫颈癌细胞株Hela的杀伤作用及相关机制。方法以二甲双胍、2-DG或二者联合处理Hela细胞株,分别于24和48h后利用流式细胞仪检测细胞凋亡率。为了探讨联合用药作用机理,还用western blot技术检测内源性AKT及其磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达水平；分别瞬时转染固有活化型AKT和负显性突变型AKT及其空载表达载体,再用联合药物处理转染细胞,检测细胞凋亡。结果2-DG能够增强二甲双胍对Hela细胞诱导凋亡的作用,二者联合处理的Hela细胞凋亡率(57.8+0.5)%明显高于单用二甲双胍的凋亡率(4.9+0.4)%,差异具有统计学意义(﹤0.05)；2-DG能够促进二甲双胍对AKT和p-AKT蛋白表达的抑制作用；表达固有活化型AKT可以部分逆转上述诱导凋亡作用,细胞凋亡率从59.4+13.3%(空载质粒组)降低到31.7+9.4%(活化型AKT组),差异具有统计学意义(﹤0.01)。结论2-DG能够增强人宫颈癌细胞Hela对二甲双胍药物的敏感性,其作用机理与二甲双胍联合2-DG显著抑制AKT信号通路有关。
关键词： 宫颈癌Hela细胞株 二甲双胍 2-DG Akt信号通路 细胞凋亡
