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巨噬细胞吞噬贫铀颗粒后可溶性铀测定
贫铀(depleted uranium,DU)即天然铀加工浓缩后,U235含量低于0.714％的副产品,其中U238占99.75％以上.在海湾战争中北约军队大规模地使用了贫铀弹,其在穿甲过程中形成高浓度颗粒,吸入颗粒后大部分沉积在肺部或转入机体其他系统引起损伤,长期滞留放射毒性和化学毒性可能导致肺部肿瘤形成[1],引发对贫铀的一系列研究[2-4].研究表明,铀矿尘在诱导大鼠肺组织纤维化过程中铀矿尘浓度与肺组织纤维化程度具有一致性[5].本研究拟通过观察巨噬细胞吞噬贫铀颗粒后产生的活性氧、一氧化氮及谷胱甘肽变化,及巨噬细胞吞噬贫铀颗粒后上清中可溶性铀含量变化,为从细胞水平上寻找贫铀促排措施提供依据.结果报告如下.
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人软骨细胞培养上清诱导脐血间充质干细胞向软骨细胞分化
背景：人脐血间充质干细胞作为软骨缺损修复的种子细胞日益受到关注，现有常用诱导方法无论是应用诱导培养基还是诱导因子，因其价格昂贵、用量大等因素限制了实际应用。
目的：验证人软骨细胞培养上清诱导人脐血间充质干细胞向软骨细胞分化的可行性。
方法：利用密度梯度离心法和贴壁培养法分离新生儿脐血，获取并培养人脐血间充质干细胞，流式细胞仪鉴定细胞表面抗原。切取股骨头置换或全髋关节置换患者透明软骨组织，体外分离培养软骨细胞，利用其培养上清培养人脐血间充质干细胞，培养2周后观察细胞表型外观变化，免疫组化染色检测Ⅱ型胶原表达结果。
结果与结论：密度梯度离心法与贴壁培养法可以分离获取人脐血间充质干细胞，流式细胞仪鉴定表面标记CD90，CD105高表达，不表达CD34，CD45。软骨细胞培养上清诱导2周后，人脐血间充质干细胞向多角形、圆形转变，Ⅱ型胶原免疫组化检测表达阳性。提示软骨细胞培养上清可诱导人脐血间充质干细胞表达Ⅱ型胶原，向软骨细胞分化。 -
骨髓基质培养上清作用下脐血造血细胞体外生长与表面标志的关系
目的探讨骨髓基质细胞培养上清(SN)协细胞因子对人脐血造血细胞体外生长的影响.方法使用rIL-3,rI-1β,rIL-6,和SCF等细胞因子或SN或者两者联用长期培养人脐血造血细胞,进行细胞增殖和表面标志测定.结果培养7 d细胞已开始增殖,14 d达高峰,细胞总数在细胞因子组(1)增加了134.5倍和SN组(3)增加81.5倍,两者联用(2)增加了171.3倍,21 d开始下降,(3)组下降明显,35 d时细胞总数为培养前的(3)组26.65倍,(1)组54.15倍,(2)仍组有92.25倍.CD34+细胞第7天已升高,14 d达高峰,(1)、(3)组和(2)组分别比培养前增加了68.43%、69.77%和82.47%,21 d开始减少,分别比培养前增加56.16%、12.33%和71.72%; CD33+细胞7天时均显著增加,14 d达高峰, 分别比培养前增加了80.67%、82.14%和69.69%,21 d时维持在14 d水平; CD38+细胞7 d时均有显著增加,分别比培养前增加了66.65%、70.42%和73.8%,14～21 d均在该水平维持,三组间无显著性差异.结论骨髓基质细胞培养上清可促进脐血造血细胞的增殖,但比细胞因子作用弱,两者联用时作用明显强于两者分别使用,提示骨髓基质细胞还可产生其它物质刺激造血细胞增殖.
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成纤维细胞上清提取物对表皮细胞增殖迁移的影响
目的:在人皮肤成纤维细胞培养上清液中寻找有效的生长因子样活性组分.方法:收集超滤成纤维细胞的培养上清液,采用MTT法、划痕试验检测对人皮肤表皮细胞增殖和诱导迁移的影响.结果:上清液中分子量5～10 KD组和5～30 KD组的试验组对表皮细胞有明显促增殖趋势,而5～30 KD组有较强的促进单层细胞伤口愈合的能力,二者与对照组比较有显著性差异(P＜0.01).结论:人成纤维细胞培养上清液的提取物中含有促进表皮细胞增殖及迁移能力的活性物质,可以尝试用其替代部分条件培养基进行对组织工程皮肤种子细胞的实验研究.
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C6胶质瘤细胞培养上清诱导神经干细胞迁移的初步研究
背景与目的:研究发现胶质瘤细胞中存在着诱导神经干细胞迁移的物质,本实验旨在观察体外培养的胶质瘤细胞在体外能否引起神经干细胞的迁移,从而为研究胶质瘤细胞中存在促进神经干细胞迁移的物质打下基础;并进一步分离、纯化该物质.方法:分别培养神经干细胞、星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞.以星形胶质细胞为对照,做细胞迁移实验,观察其结果;将C6胶质瘤细胞、星形胶质细胞的无血清培养上清分别浓缩,并行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,观察其结果;转膜,测序,初步测定这种能诱导神经干细胞迁移的信号物质.结果:(1)C6胶质瘤细胞的培养上清引起神经干细胞迁移的数目明显多于星形胶质细胞的培养上清和新鲜无血清培养基(P＜0.05).(2)将无血清培养的等浓度的C6胶质瘤细胞、星形胶质细胞的上清浓缩蛋白进行SDS-PAGE,可见二者蛋白条带存在明显差异.结论:(1)从新生大鼠大脑皮层组织可以培养出神经干细胞和星形胶质细胞.(2)C6胶质瘤细胞无血清培养的上清中存在着能够诱导神经干细胞迁移的物质.
