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c-FLIP反义寡核苷酸对肺癌A549细胞抑制作用
目的 探讨细胞型自杀相关因子(Fas)相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白(c-FLIP)反义寡核苷酸(ASODN)对肺癌细胞系A549生长、凋亡的作用.方法 设计合成c-FLIP ASODN,按不同浓度转染肺癌A549细胞.另设置空白对照组、脂质体转染组、无义寡核苷酸(NSODN)转染组,采用台盼蓝拒染法计数活细胞绘制细胞生长曲线,免疫组化链霉素抗生素过氧化物酶(SP)法检测细胞c-FLIP蛋白和Ki-67抗原表达、噻唑蓝法测定细胞增殖抑制率、流式细胞仪分析细胞凋亡情况.结果 c-FLIPASODN转染A549细胞后,各ASODN组A549细胞生长受到抑制,随着ASODN浓度的增加,细胞增殖抑制率逐渐升高、c-FLIP蛋白和Ki-67抗原表达逐渐下降,而细胞凋亡率逐渐升高,与其他各组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).而其余各组之间上述指标比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 c-FLIP ASODN能有效地干扰肺癌A549细胞c-FLIP基因表达,并可抑制癌细胞生长增殖,促进其凋亡.并且存在量效关系,有望成为治疗肺癌的基因药物.
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c-FLIP反义寡核苷酸对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤抑制作用
目的 研究细胞型Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白反义寡核苷酸(c-FLIP-ASODN)对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的抑制作用.方法 采用肺癌A549细胞株建立裸鼠移植瘤模型,将其分为ASODN组及空白对照组、脂质体转染组、无义寡核苷酸(SODN)组,通过移植瘤生长曲线、终末瘤重免疫组化法检测c-FLIP蛋白表达、增殖指数,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测移植瘤c-FLIP mRNA变化,TUNEL检测凋亡指数.结果 ASODN干预后移植瘤生长缓慢,22 d时瘤体积达到大,此后呈缩小趋势,终末瘤体积及瘤重分别为(376.9±45.8)mm3、(512.4±33.6)mg,明显低于其他各组(P＜0.01),抑瘤率为64.31%;ASODN组移植瘤组织增殖指数为(25.71±5.42),c-FLIP mRNA表达量为(0.30±O.05),c-FL.IP蛋白表达阳性率为(19.54±6.36),均明显低于各对照组;凋亡指数为(39.68±6.28),明显高于其他各组(P＜0.01).结论 c-FLIP-ASODN对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长有抑制作用,其机制与降低c-FLIP mRNA和蛋白表达、抑制移植瘤细胞的增殖活性和促进肿瘤细胞凋亡有关.
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Bcl-2反义核酸对人胆管癌QBC939细胞增殖的影响
目的研究Bcl-2反义核酸(ASODN)对人胆管癌QBC939细胞增殖的影响.方法将Bcl-2ASODN与QBC939细胞共同孵育,采用台盼蓝拒染实验检测细胞存活率,采用克隆形成实验检测克隆形成率.结果台盼蓝拒染实验和克隆形成实验检均显示Bcl-2ASODN可以部分抑制QBC939细胞增殖,经ASODN作用细胞的存活率和克隆形成率均显著低于对照组(P<0.05).结论 Bcl-2反义核酸对人胆管癌QBC939细胞增殖有抑制作用.
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胃癌组织中E26转录因子-1表达与血管生成的相关性研究
目的:研究胃癌组织中E26转录因子-1(Ets-1)表达与血管生成的关系.方法:应用免疫组织化学方法(SP法)检测86例胃癌标本中Ets-1的表达及微血管密度(MVD);建立裸鼠胃癌皮下种植瘤模型,分别应用Ets-1反义,正义寡核苷酸与PBS行瘤内注射,应用逆转录聚合酶链式反应检测瘤组织Ets-1mRNA的变化,并检测瘤组织Ets-1蛋白及微血管密度的差异.结果:胃癌组织中Ets-1标记指数(LI)和MVD呈正相关(γ=0.495,P＜0.05);经Ets-1反义寡核苷酸治疗后,裸鼠瘤组织Ets-1mRNA及Ets-1蛋白表达降低,反义组MVD显著低于正义组与PBS组(10.4±3.1 VS 24.5±8.4,20.6±7.5,P＜0.01).结论:胃癌组织中Ets-1在促进血管生成中起重要作用.
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c-FLIP反义寡核苷酸对食管癌EC109细胞裸鼠移植瘤抑制作用的实验研究
目的 研究细胞型Fas相关死亡域样白介素-1β转换酶抑制蛋白反义寡核苷酸(c-FLIP-ASODN)对食管癌EC109细胞裸鼠移植瘤的作用.方法 采用食管癌EC109细胞株建立裸鼠移植瘤模型,将其分为空白对照组、脂质体转染组、无义寡核苷酸(SODN)组、ASODN组.通过移植瘤生长曲线、终末瘤重,免疫组化法检测c-FLIP蛋白表达、增殖指数,RT-PCR检测移植瘤c-FLIP mRNA变化,TUNEL检测凋亡指数,观察c-FLIP-ASODN对食管癌裸鼠移植瘤的作用.结果 ASODN组治疗后移植瘤生长缓慢,实验结束时ASODN组瘤重及瘤体积明显低于其它各组,抑瘤率为68.19%.ASODN组移植瘤组织c-FLIP mRNA及蛋白、Ki-67抗原表达较其它各组明显减少,而移植瘤细胞凋亡指数明显高于其它各组(P均＜0.01).其余三组上述指标间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 c-FLIP-ASODN对食管癌EC109细胞裸鼠移植瘤生长有抑制作用,其机制与降低的c-FLIP mRNA和蛋白表达、抑制移植瘤细胞的增殖活性及促进肿瘤细胞凋亡有关.
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脂质体包裹TGF-α反义脱氧寡核苷酸抑制人大肠癌细胞的增殖
目的 研究用转化生长因子α (TGF-α)反义脱氧寡核苷酸(ASODN)对人 大肠癌 细胞株HR8348生长增殖的作用，探讨大肠癌治疗的新途径. 方法 采用人 工合成的TGF-α反 义及无关对照ODN经阳离子脂质体包裹后转染人大肠癌HR8348细胞. 采用MTT法，［3H］- TdR掺 入实验，细胞周期分析，裸鼠体内接种等方法测定瘤细胞体内外增殖的变化. 结果 经TGF- α反义ODN处理的HR8348细胞与对照组HR8348细胞相比，体外增殖速度减慢（细胞增殖抑制 率达71%）,DNA合成受抑,裸鼠体内成瘤率下降（25% vs 100%）. 结论 TGF-α反义ODN能有效抑制大肠癌细胞的体内外生长增殖，可用于实验性肿瘤基因治疗 研究.
