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强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞踝蛋白1表达的研究
目的：探讨强直性脊柱炎（AS）患者、类风湿关节炎（RA）患者及健康志愿者（HV）外周血单个核细胞（PBMC）中踝蛋白1的表达水平及其差异。方法采集 AS、RA 患者及HV 外周血样本各30例，流式细胞术分析 CD3＋ T 细胞及 CD14＋单核细胞中踝蛋白1蛋白平均荧光强度（MFI），逆转录 PCR （RT-PCR）检测 PBMC 中踝蛋白1 mRNA 表达水平，比较组间踝蛋白1在蛋白及 mRNA 表达的差异。结果在 CD3＋ T 细胞及 CD14＋单核细胞中，AS 患者的踝蛋白1 MFI 水平均高于 HV 和 RA 患者（P 均＜0．05），而 HV 与 RA 患者比较差异无统计学意义（P ＞0．05）。RT-PCR 提示 AS 患者、HV 及 RA 患者踝蛋白1 mRNA 相对表达水平分别为1．37±0．22、0．26±0．05、0．27±0．06，AS 患者的踝蛋白1 mRNA 相对表达水平均高于 HV 和 RA 患者（P 均＜0．05）。结论AS 患者 PBMC 中踝蛋白1表达水平明显高于 HV 及 RA 患者，提示踝蛋白1可能在 AS 发病机制中发挥作用。
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佛波脂对体外培养Th细胞表面CD4分子表达的影响
目的探索佛波脂(PMA)对Th细胞表面CD4分子表达的影响.方法用荧光标记的抗CD3/4/8抗体同经10、15、20、25ng/mL的PMA和1μg/mL的Ionomycin刺激培养2、3、4 h的正常人外周全血细胞中的Th细胞上的CD4分子结合,溶血后用流式细胞仪检测CD4通道的荧光强度(MFI).结果CD4通道的MFI随PMA质量浓度的升高和刺激时间的延长而降低.结论Th细胞表面CD4分子在刺激培养过程中随PMA质量浓度的升高和刺激时间的延长而减少.
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流式免疫微球技术定量检测人血清胰岛素方法学研究和评价
目的 建立流式免疫微球定量检测人血清胰岛素的方法并对其重复性实验和线性实验以及低检测限进行评价.方法 将兔抗人胰岛素单克隆抗体标记在微球表面制备免疫诊断微球,与血清中胰岛素结合后,加入荧光标记的鼠抗人胰岛素单克隆抗体,使微球表面呈现荧光,并通过流式细胞仪检测其平均荧光强度(mean fluorescent intensity,MFI)并记录.结果 微球表面MFI与人血清胰岛素浓度呈正比,流式免疫微球技术检测同一标本的重复性实验变异系数以及低检测限均低于酶联免疫吸附试验,流式免疫微球技术线性范围大于酶联免疫吸附实验.结论 流式免疫诊断微球技术可用于人血清胰岛素定量检测,其测定重复性,线性范围和灵敏度均优于酶联免疫吸附试验.
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量子点流式微球技术检测抗胰岛素抗体方法学建立
目的 将量子点荧光探针应用于流式微球技术,创建出量子点流式微球技术检测人抗胰岛素抗体的方法并对其偶联率、精密度、线性范围、灵敏度进行初步评价.方法 将胰岛素与羧基化微球偶联制备免疫诊断微球,与血清或标准品中人抗胰岛素抗体结合后,加入兔抗人IgG抗体,后加入生物素化的羊抗兔IgG抗体和链霉亲和素化的量子点,使微球表面呈现荧光,并通过流式细胞仪检测平均荧光强度(mean fluorescent intensity,MFI)并记录.结果 羧基化微球偶联胰岛素的性能显著强于空白微球,偶联0.5～3 h为佳偶联反应时间,偶联成功的免疫诊断微球放置4℃冰箱至少可稳定50 d.微球偶联微球表面所携带荧光MFI与所测抗胰岛素抗体浓度成正比,量子点流式微球技术检测同一标本的灵敏度(3.74 pg/ml)、精密度(8.24％)、线性范围(3.74～5 000 pg/ml)都优于酶联免疫吸附试验所测得灵敏度(24.53 pg/ml)、精密度(12.31％)、线性范围(24.53～2 500 pg/ml).结论 本实验创建的量子点流式微球技术可用于人血清抗胰岛素抗体测定,其检测性能良好.
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蛋白酶抑制剂联合激素治疗对致敏的肾移植术前等待患者人类白细胞抗原抗体的影响
来自法国的一项单中心前瞻性研究旨在观察肾上腺皮质激素联合硼替佐米方案降低肾移植术前患者抗人类白细胞抗原（HLA）抗体的作用。方法：23例抗HLA免疫稳定的肾移植术前等待患者纳入观察，分别于第1、3、8、10天静脉注射硼替佐米（1.3 mg/m2）及地塞米松40 mg，并于第0天（D0）、1个月、3个月和6个月时采用单抗原磁珠法检测Ⅰ类及Ⅱ类抗HLA抗体。结果：共检测到96个Ⅰ类抗HLA抗体和76个Ⅱ类抗HLA抗体。D0时间点患者平均测得（49±21）个抗HLA抗体，其中31个为Ⅰ类抗HLA抗体，17个为Ⅱ类。D0时间点Ⅰ类抗HLA抗体高平均荧光强度（hAb）的中位数为10734（1096～18513），Ⅱ类HLA抗体hAb的中位数为11189（1276～19176）。3个月时41%患者Ⅰ类hAb下降超过25%，6个月时则有60%患者下降超过25%。3个月时33%患者Ⅱ类hAb下降超过25%，6个月时则有42%患者下降超过25%。6个月时54%的抗HLA抗体下降超过25%，36%的抗体下降超过50%。全部患者无严重不良事件发生。此后，其中11例患者成功接受了肾移植手术且随访18个月未发生急性排斥反应。结论：硼替佐米联合激素治疗可有效降低Ⅰ类和Ⅱ类抗HLA抗体。
