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复合牙龈间充质干细胞的脱细胞真皮基质修复 SD 大鼠皮肤缺损实验
目的：：探讨牙龈间充质干细胞(GMSCs)复合脱细胞真皮基质(ADM)修复皮肤缺损的实验。方法：以纯化3代 GMSCs 作为种子细胞接种于 ADM,构建组织工程化皮肤替代物。实验分组：18只 SD大鼠随机分成3组：GMSCs 复合 ADM 移植组、单纯 ADM 组和空白对照组。将3组相应材料分别移植于 SD 大鼠背部皮肤缺损处,观察比较创面修复效果。结果：GMSCs 复合 ADM 移植组、单纯 ADM 组和空白对照组皮肤缺损创面愈合时间分别为(15.1±1.3)d、(18.5±2.1)d 和(22.6±2.6)d,差异有显著性意义(P <0.05)。组织学观察显示,GMSCs 复合 ADM 移植组成纤维细胞、新生小血管、胶原纤维均较单纯 ADM 移植组和空白对照组明显增多。结论：GMSCs 复合 ADM 移植构建组织工程化皮肤替代物移植后促进了新生血管形成、缩短了皮肤创面的修复。实验显示 GMSCs 作为种子细胞复合 ADM,移植构建组织工程化皮肤替代物可用于皮肤缺损的修复治疗。
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条件培养液诱导牙龈间充质干细胞分化的体外实验研究
目的：建立牙龈间充质干细胞（GMSCs）与根端牙胚条件培养液（APTG-CM）的直接共培养体系，检测其体外分化情况。方法：有限稀释法获得单克隆来源的GMSCs，在体外多向诱导分化，检测ALP活性及基因表达（OCN、BSP、ALP、COL-1、CP23）情况。结果：有限稀释法获得的GMSCs可诱导向成骨、成脂肪方向分化。经APTG-CM诱导后，细胞增殖活性和ALP活性均升高；OCN、BSP、ALP、COL-1、CP23基因表达增高。结论：GMSCs经诱导后具备矿化能力；APTG-CM可诱导GMSCs分化，有利于将GMSCs运用于牙周组织工程的研究。
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炎症作用下Caspase-3/8对人牙龈间充质干细胞凋亡能力影响的研究
目的:探讨炎症作用下Caspase-3/8对人牙龈间充质干细胞凋亡能力影响的研究,为探索牙龈炎的预防和治疗策略提供理论和实验依据.方法:取20～25岁拔除阻生齿牙切除的无炎症龈瓣和正畸过程中增生的牙龈组织,分离培养正常牙龈间充质干细胞(NGMSCs)和炎性牙龈间充质干细胞(IGMSCs).Annexin V-FITC/PI双染检测相同培养条件下NGMSCs与IGMSCs凋亡率;应用PCR,免疫荧光法检测各组间Caspase-3,Caspase-8因子表达差异.结果:Annexin V-FITC/PI双染检测结果显示相同培养条件下IGMSCs凋亡率(10.44％)＞NGMSCs凋亡率(2.76％).PCR结果显示IGMSCs组Caspase-3,Caspase-8表达显著高于NGMSCs组(P＜0.0l).IGMSCs组TNF-α,IL-1β基因表达显著高于NGMSCs组(P＜0.01).结论:Caspase-3/8在牙龈间充质干细胞增殖、凋亡途径中起着重要调控作用.
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人牙龈间充质干细胞与牙周膜干细胞的性能比较
目的:比较人牙龈间充质干细胞(gingival mesenchymal stem cells,GMSCs)和牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)的增殖及分化能力.方法:取同一个体的牙龈组织及牙周膜组织进行干细胞的分离培养和鉴定,并对其干细胞基本性能与增殖、分化能力进行对比分析.结果:GMSCs和PDLSCs均具有良好的间充质干细胞的特性,但其增殖及分化能力存在一定的差异.GMSCs原代细胞培养的成功率较PDLSCs高,增殖能力强,差异具有统计学意义(P＜0.05)；而分化能力检测结果显示,GMSCs成骨能力明显弱于PDLSCs(P＜0.05),成脂能力两组细胞无显著性差异.结论:GMSCs能否代替PDLSCs用于牙周组织再生治疗,尚需要进一步研究.
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牙龈间充质干细胞的特性概述
除骨髓组织外，在脂肪组织、胎盘、脐带血、肌腱等组织中均发现间充质干细胞，其作为种子细胞广泛应用于组织工程及组织再生领域。由于其具有免疫调节作用，在炎性疾病的治疗方面显示出良好的应用前景。近年来有学者从牙龈中分离出间充质干细胞，并对此细胞进行了研究，以探讨牙龈间充质干细胞的特性及应用前景。本文就牙龈间充质干细胞的鉴定、免疫调节能力、与骨髓间充质干细胞的比较及体内应用等研究进展作一综述。
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牙龈间充质干细胞与牙周膜干细胞膜片牙周再生能力的实验研究
目的 对比牙龈间充质干细胞(GMSCs)与牙周膜干细胞(PDLSCs)膜片的牙周再生能力.方法 制备能够稳定表达增强绿色荧光蛋白(eGFP)的GMSCs和PDLSCs膜片及雄性比格犬牙周炎Ⅲ度根分叉病变模型4只(均选择双侧下全面第2、3、4前磨牙作为手术牙位制备模型),分别将GMSCs、PDLSCs膜片移植入模型作为GMSCs组和PDLSCs组,不植入膜片作为空白对照组.8周后处死动物,评价2种膜片对牙周缺损的修复能力.结果 HE染色组织形态学分析、免疫组织化学分析、天狼星红染色结果均显示GMSCs和PDLSCs能够有效促进牙周组织再生,效果明显好于空白对照组(P＜0.05).但2种膜片再生能力对比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 GMSCs与PDLSCs膜片均具备良好的牙周再生能力.
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NF-κB通路对牙龈间充质干细胞分泌炎性因子能力影响的研究
目的 探讨炎症作用下NF-κB通路对人牙龈间充质干细胞(GMSCs)分泌炎性因子能力的影响.方法 体外分离纯化培养正常组织来源的GMSCs.在相同培养条件下,GMSCs被分成3组.应用梯度浓度TNF-α(0、10、20 ng/ml)诱导12 h.Annexin V-FITC/PI双染检测3组间GMSCs凋亡率差异.应用Western blot检测NLK、I-κBα、P-IκBα在NF-κB激活通路中的表达,Real-Time PCR检测TNF-α、IL-1β在GMSCs加入抑制剂BAY 1 1-7082后基因表达变化.结果 凋亡检测显示,GMSCs凋亡率与TNF-α浓度呈正相关(P＜0.05);Western blot结果显示,与对照组相比,NLK、I-κBα表达随TNF-α浓度增加而降低(P＜0.05),而P-IκBα表达量呈显著增高趋势(P＜0.01).PCR检测结果显示,随外源性TNF-α浓度升高,10 ng/ml组与20 ng/m组GMSCs的TNF-α与IL-1β基因表达量也显著升高(P＜0.01).TNF-α诱导组加入NF-κB抑制剂BAY 11-7082后检测GMSCs,10 ng/ml组与20 ng/ml组IL-1β与TNF-α基因表达量下降,与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 GMSCs中NLK在炎性环境下表达量降低,炎性因子可以通过NF-κB通路增强牙龈间充质干细胞中TNF-α和IL-1β的表达.
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EMP对人牙龈间充质干细胞增殖和Ⅰ型胶原合成的影响
目的：观察釉基质蛋白(enamel matrix proteins，EMPs)对牙龈间充质干细胞（human gingival mesenchymal stem cells，hGMSCs）增殖和Ⅰ型胶原合成的影响。方法：分离培养人牙龈成纤维细胞，免疫细胞化学方法检测其间充质干细胞特性STRO-1的表达，不同浓度EMPs，25 mg/L（A1组）、50 mg/L（A2组）、100 mg/L（A3组）、200 mg/L（A4组），对照组（A0组）10％FCS的DMEM溶液培养，MTT检测EMPs对细胞增殖活性的影响。免疫细胞化学方法鉴定细胞Ⅰ型胶原合成和图像分析。结果：50～200mg/L表现出促hGMSCs增殖的作用，50 mg/L EMPs即可以显著促进hGMSCs的生长，但以100 mg/L EMPs的促增殖作用强(与其余各组相比P<0.01)，实验组胶原合成明显强于对照组。其中，100mg/L促 I型胶原(collagen typeⅠ，COLⅠ—合成明显，且随时间变化。结论：EMP可促进hGMSCs增殖和Ⅰ型胶原合成。
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碱性成纤维生长因子促进牙龈间充质干细胞增殖作用的研究
目的:体外研究碱性成纤维生长因子(bFGF)促进牙龈间充质干细胞(GMSCs)增殖的作用.方法:酶消化法获得原代GMSCs,克隆化培养后进行干细胞鉴定.取第4代GMSCs,以含有10％胎牛血清的α-MEM作为基础培养基,分别加入0、0.5、1、5、10、20 ng/ml 5种不同浓度bFGF培养1～9 d,用CCK-8法检测细胞增殖.结果:GMSCs可以通过酶消化法获得,具有干细胞特性;0.5～20 ng/ml的bFGF均能促进GMSCs的增殖,在0.5～ 10 ng/ml范围内促增殖作用随浓度增加和培养时间延长而增强.结论:bFGF对GMSCs增殖能力具有浓度依赖性和时间依赖性促进作用.
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碱性成纤维生长因子对牙龈间充质干细胞生物学性能的影响
目的：体外研究碱性成纤维生长因子( bFGF)对牙龈间充质干细胞( GMSCs)生物学特性的影响。方法：酶消化法获得原代人牙龈间充质干细胞( hGMSCs),并采用有限稀释法进行克隆纯化培养。取第3代hGMSCs,观察5~20 ng/mL不同浓度bFGF对hGMSCs增殖的影响；观察10 ng/mL bFGF对hGMSCs克隆形成能力和ALP活性的影响；通过茜素红染色、油红0染色,观察10 ng/mL bFGF对hGMSCs体外成骨、成脂分化能力的影响,并RT-PCR检测各成骨、成脂分化相关基因的表达水平；同时采用流式细胞术检测10 ng/mL bFGF对hGMSCs表面标志物STRO-1表达的影响。结果：10 ng/mL的bFGF对hGMSCs的增殖、干细胞表面标志物STRO-1的表达、hGMSCs克隆形成率、脂滴形成量以及LPL、PPARγ各成脂基因的表达水平均有明显的促进作用(P<0.05)；但对hGMSCs的ALP活性,及其成骨分化过程中矿化结节的形成量、各成骨相关基因(ALP、OCN、BSP)的表达水平均有明显的抑制作用(P<0.05)。结论：在一定的培养条件下,bFGF可增加hGMSCs的干细胞表面标志物的表达、促进hGMSCs的增殖能力；并对hGMSCs的多向分化能力起调节作用。
