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梅毒螺旋体荧光定量PCR检测方法的建立和初步临床应用

徐瑾;张顺

摘要: 目的建立一种利用MGB-Taqman探针的快速、灵敏、特异、准确定量检测梅毒螺旋体的方法.方法选择梅毒螺旋体的基因组的保守区域,设计合成引物和MGB-Taqman探针,构建质粒标准品pMD18-T-TP,优化定量PCR反应体系,并进行方法学评价.结果1)成功构建了重组质粒pMD18-T-TP.2)建立了利用MGB-Taqman探针的荧光定量PCR方法,其线性范围:101~1010copies/μl;灵敏度:10copies/μl;重复性:批内CV为2.02%,批间CV为2.83%,日间CV为4.23%;特异性:100%.3)初步临床应用证明:该方法比血清学检测方法灵敏度更高,假阳性率低.结论利用MGB-Taqman探针定量检测梅毒螺旋体的方法灵敏度高,特异性高,操作简便,适合临床检验诊断的要求.

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