首页 > 文献资料
-
梅毒螺旋体荧光定量PCR检测方法的建立
目的 建立梅毒螺旋体的荧光定量PCR检测方法.方法 依据梅毒螺旋体(Treponema pallidum,Tp)DNA多聚酶Ⅰ(polA)基因序列,设计MGB-Taqman探针和PCR引物,对TPPA法检测到的不同国家和人种梅毒螺旋体抗体阳性患者和阴性人员血液样本进行检测,验证该PCR方法的灵敏度和特异性,以及2种检测方法的一致性.结果 PCR产物测序证实新建的荧光PCR方法可以扩增到梅毒螺旋体polA基因区200 bp长DNA片段.该方法特异性强、灵敏度高,可检出每微升血液中10拷贝梅毒DNA.在31例TPPA法检测结果为阳性的样本中,有21例为PCR阳性.证明其中10例TPPA法阳性为非现行感染,可能不具有传染性.统计分析表明该荧光PCR方法与TPPA方法对不同国家和种族人群检测结果未出现显著差异.结论 新建的荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,可排除TPPA法阳性梅毒患者中非现行感染的旅行者,是适用于不同地区和种族的旅行者进行梅毒检测的新方法.
-
梅毒螺旋体荧光定量PCR检测方法的建立和初步临床应用
目的建立一种利用MGB-Taqman探针的快速、灵敏、特异、准确定量检测梅毒螺旋体的方法.方法选择梅毒螺旋体的基因组的保守区域,设计合成引物和MGB-Taqman探针,构建质粒标准品pMD18-T-TP,优化定量PCR反应体系,并进行方法学评价.结果1)成功构建了重组质粒pMD18-T-TP.2)建立了利用MGB-Taqman探针的荧光定量PCR方法,其线性范围:101～1010copies/μl;灵敏度:10copies/μl;重复性:批内CV为2.02%,批间CV为2.83%,日间CV为4.23%;特异性:100%.3)初步临床应用证明:该方法比血清学检测方法灵敏度更高,假阳性率低.结论利用MGB-Taqman探针定量检测梅毒螺旋体的方法灵敏度高,特异性高,操作简便,适合临床检验诊断的要求.
关键词： 梅毒螺旋体 荧光定量PCR MGB-Taqman探针
