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逆转录病毒介导的对原代培养成年大鼠成肌细胞基因转染的研究

周菲;秦永文;荆清;马丽萍;陈少萍

摘要: 目的探索成年大鼠成肌细胞的原代培养方法以及逆转录病毒对其的基因转染.方法取成年SD大鼠的胸大肌,利用组织块法进行培养,并对培养细胞进行形态学研究和免疫细胞化学鉴定.以逆转录病毒为载体,将绿色荧光蛋白基因导入成年大鼠成肌细胞,利用倒置荧光显微镜及流式细胞仪对转染细胞进行观察.结果采用组织块培养法,2周后成肌细胞的密度可达107/ml, 免疫细胞化学分析显示90%以上的细胞呈骨骼肌特异的myogenin抗体染色阳性.荧光显微镜和流式细胞仪检测发现eGFP基因可在成年大鼠成肌细胞中有效地表达,其转染效率约为12.82%.结论利用组织块法成功培养成年大鼠原代成肌细胞,该方法实用性强,所得成肌细胞纯度高;逆转录病毒可介导成肌细胞的基因转导,为深入研究心肌梗死瘢痕中转基因成肌细胞自体移植奠定了基础.

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