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单核细胞在脂多糖刺激下发生基因转录并分泌炎症因子(IL-6)的实验研究

江志雄;金益人;洪文澜;尚世强;孙眉月

摘要: 目的新生儿感染导致机体严重病理变化的原因与内毒素有关,而内毒素的化学本质是脂多糖(LPS),通过观察LPS对新生儿脐血单核细胞(MNC)分泌IL-6及表达IL-6 mRNA基因的影响,探讨严重细菌感染时新生儿机体的防御反应机制.方法取肝素抗凝脐血,用密度离心分离法分离MNC,以RPMI 1640培养液调整细胞浓度为1×106/ml,将细胞悬液铺于24孔培养板上,依次加入不同浓度脂多糖(LPS)培养36 h或同一浓度LPS(1 μg/ml)培养不同时间,收集培养上清液及细胞,分别用ELISA和RT-PCR方法测定IL-6及IL-6 mRNA表达情况.结果 (1)脐血MNC在LPS刺激3,6,12,18,24,36 h后IL-6分泌水平逐步增高,6 h以后增加尤为明显,与其他各时间点比较有非常显著差异(P<0.001).LPS刺激组与无LPS对照组相同时间点比较,6 h内IL-6变化水平无差异,6 h以上各点有显著差异(P<0.01).RT-PCR方法检测显示LPS刺激后3 h即可见IL-6 mRNA基因表达.(2)脐血MNC受不同浓度LPS刺激时,IL-6分泌水平随LPS浓度递增.(3)全部脐血MNC均检测到IL-6 mRNA基因表达.结论 LPS能诱导新生儿脐血MNC IL-6 mRNA基因转录,从而促使IL-6合成、分泌,该作用呈时间、剂量依赖性变化.

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