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平肝潜阳方治疗前后高血压病肝阳上亢证大鼠肾上腺组织蛋白表达变化的蛋白质组学研究

张莺;陈泽奇;钟广伟

摘要: 目的:从蛋白质组学水平探讨大鼠高血压肝阳上亢证发生机制及平肝潜阳方治疗肝阳上亢证的分子机制,为治疗高血压肝阳上亢证寻找新的药物标志蛋白提供理论和实验依据.方法:以自发性高血压大鼠(spontaneous hypertensive rat,SHR)加灌服附子汤法制备高血压肝阳上亢证大鼠模型,二维凝胶电泳分离大鼠肾上腺蛋白质,获得差异表达蛋白质;利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和数据库分析鉴定差异表达蛋白质.结果:高血压肝阳上亢证大鼠模型复制成功,平肝潜阳法治疗后易激惹程度和结膜充血减轻,收缩压下降(P<0.05,P<0.01).通过点检测后,发现12个具有明显表达差异的蛋白质斑点,经鉴定可以确认的蛋白质点有8个,其中2个蛋白点为同一蛋白.其中异柠檬酸脱氢酶、类固醇合成急性调节蛋白在模型组表达较正常组上调,在治疗组重新下调至前水平;铁轻链蛋白、Tu翻译延长因子、鸟苷酸解离抑制因子、黄素还原酶、Basic转录因子3在模型组表达较正常组下调,在治疗组重新上调至前水平.结论:成功鉴定了高血压肝阳上亢证大鼠平肝潜阳方治疗前后肾上腺组织差异表达蛋白,为深入研究高血压病肝阳上亢证的病理机制及平肝潜阳方治疗的分子机制奠定了基础.

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    作者:李建生;李亚;李素云;王元元;邓丽;田燕歌;姜素丽;王英

    目的:评价调补肺肾(补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾)三法对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)稳定期大鼠全身和肺脏局部炎症反应的影响及远期效应.方法:将大鼠随机分为6组:对照组、模型组、补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组和氨茶碱组.除对照组外,采用香烟熏吸联合细菌感染法制备COPD稳定期大鼠模型.于第9周分别以补肺健脾方、补肺益肾方、益气滋肾方和氨茶碱灌胃至第20周,于20、32周分批取材,观察外周血白细胞计数和中性粒细胞比率及血清、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)和肺组织白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、IL-10、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、可溶性TNF受体Ⅱ(soluble tumor necrosis factor receptorⅡ,sTNFR2)的水平.结果:各组外周血白细胞计数和中性粒细胞比率比较,差异无统计学意义(P>0.05).20周时模型组BALF中白细胞计数较对照组明显升高(P<0.01),3个中药组及氨茶碱组均较模型组显著降低(P<0.01),其中补肺健脾组白细胞计数明显低于氨茶碱组(P<0.05);第32周,3个中药组的BALF中白细胞计数较氨茶碱组明显降低(P<0.05,P<0.01),而3个中药组间比较,差异无统计学意义(P>0.05).第20和32周,模型组血清和肺组织IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、sTNFR2含量,BALF中IL-8、IL-10、TNF-α水平均较对照组显著升高(P<0.05,P<0.01);3个中药组上述因子均较模型组明显降低(P<0.05,P<0.01),其中3个中药组血清、BALF和肺组织中细胞因子水平较氨茶碱组降低,而以血清和BALF改变明显(P<0.05,P<0.01).第32周外周血清和BALF、肺组织炎症因子表达与20周时比较,差异无统计学意义.结论:补肺健脾、补肺益肾和益气滋肾中药可显著降低COPD稳定期大鼠全身和肺脏局部的炎症反应,且具有良好的远期效应.

  • G蛋白偶联受体激酶6参与天芪平颤颗粒预防帕金森病异动症的发生

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    目的:研究天芪平颤颗粒对左旋多巴诱发的异动症大鼠行为学及G蛋白偶联受体激酶6(G protein-coupled receptor kinase 6,GRK6)表达的影响.方法:通过6-羟基多巴(6-hydroxydopa,6-OHDA)立体定向注射至大鼠前脑内侧束的方法成功建立帕金森病(Parkinson disease,PD)模型.25只模型大鼠随机分为5组,每组各5只.PD组:腹腔注射0.2%维生素C溶液;左旋多巴组:腹腔注射左旋多巴甲酯和苄丝肼;小、中、大剂量天芪平颤颗粒组:在给予左旋多巴甲酯和苄丝肼基础上分别加用相应剂量的天芪平颤颗粒.另设假手术组(n=5)为对照.连续给药29 d后,评估不同剂量天芪平颤颗粒对PD模型大鼠行为学的影响,并用免疫组织化学法和蛋白质印迹法检测大鼠纹状体区GRK6蛋白的表达情况.结果:左旋多巴等长期使用后,PD模型大鼠出现异常不自主运动(abnormal involuntary movement,AIM),且AIM评分随治疗时间的延长逐渐增加;损伤侧纹状体区GRK6蛋白表达减少.天芪平颤颗粒能改善PD模型大鼠的AIM评分,增加GRK6蛋白的表达.免疫组织化学法结果显示,高、中剂量天芪平颤颗粒组的GRK6蛋白的表达较左旋多巴组增加(P<0.05);蛋白质印迹法结果显示,中剂量天芪平颤颗粒组的GRK6蛋白的表达较左旋多巴组增加(P<0.01).结论:天芪平颤颗粒可能通过增加纹状体区GRK6的表达,改善PD模型大鼠的AIM评分,减少PD大鼠异动症的发生.

  • 从白屈菜乙醇提取物中分离出的白屈菜碱通过p38-p53和PI3K/AKT信号转导通路促进HeLa细胞凋亡

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    作者:陈婵;陈长勋;吴喜民;王瑞;李医明

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  • 玫瑰茄提取物对Wistar大鼠肾Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶活性的影响

    作者:Lawrence A.Olatunji;Taofeek O.Usman;Joseph O.Adebayo;Victoria A.Olatunji

    目的:研究口服玫瑰茄水提取物对大鼠肾Na+-K+-ATP酶和Ca2+- Mg2+-ATP酶活性的影响.方法:连续28 d分别给予实验大鼠口服25和50 mg/kg的玫瑰茄水提物,同时给予对照组大鼠灌胃适当剂量的蒸馏水.用光谱测定法分析大鼠肾脏中Na+-K+-ATP酶和Ca2+ -Mg2+-ATP酶的活性.结果:口服25和50 mg/kg的玫瑰茄提取物后,实验组大鼠肾Ca2+-Mg2+-ATP酶活性显著降低(P<0.05),然而肾Na+ -K+ -ATP酶的活性却未受到任何影响.实验组大鼠体质量、肾脏质量,血浆白蛋白和总蛋白浓度,碱性磷酸酶、天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶活性以及血浆钠、钾、钙离子的浓度与对照组大鼠相比无明显变化;但大鼠的肌酐以及尿素水平均在服用50 mg/kg的玫瑰茄提取物后明显降低(P<0.05).结论:尽管口服玫瑰茄提取物会引起肾Ca2+-Mg2+-ATP酶活性的减弱,但同时可以起到保护肾脏功能的作用.

  • 西藏长叶松树皮乙醇提取物的抗惊厥作用

    作者:Dhirender Kaushik;Ajay Kumar;Pawan Kaushik;Avatar C.Rana

    目的:研究西藏长叶松树皮乙醇提取物(alcoholic extract of bark of Pinus roxburghii Sarg.,AEPR)的抗惊厥作用.方法:用大电休克和戊四唑诱发白化Wistar大鼠癫痫.大电休克模型经由大鼠耳电极给予150mA电流刺激0.2s诱发癫痫,以后肢强直性伸展持续时间的变化作为结局指标衡量AEPR的抗惊厥作用,即后肢强直性伸展持续时间减少或停止.戊四唑模型大鼠经腹膜内注射戊四唑诱发肌阵挛性发作和阵发性抽搐,以痉挛发作的延迟衡量AEPR的抗惊厥作用.结果:在大电休克惊厥模型中,AEPR剂量分别为300和500 mg/kg体质量,均显著减轻所有阶段的大鼠惊厥发作(P<0.01);标准对照药物苯妥英钠组用量25 mg/kg,能显著减轻屈曲阶段的发作(P<0.01),并抑制所有阶段的惊厥发作.戊四唑惊厥模型大鼠于注射戊四唑前30min分别给予AEPR 300和500mg/kg,均能显著延迟阵挛性发作(P<0.01).100 mg/kg体质量的AEPR在戊四唑诱发的癫痫模型中没有显著的抗惊厥作用;标准对照药物地西泮4 mg/kg能大幅度延迟阵挛性发作.结论:本研究提示AEPR能有效抑制普遍强直性肌阵挛和部分癫痫发作.因此,AEPR对大电休克及戊四唑诱发的大鼠癫痫有抗惊厥作用.然而需要进一步的研究确认是AEPR中的何种成分对这种抗惊厥作用起主导作用.

  • 基于UPLC/Q-TOF-MS分析附子煎煮过程中化学成分的变化

    作者:周思思;马增春;梁乾德;王宇光;谭洪玲;肖成荣;张伯礼;高月

    目的:利用超高效液相-四级杆-飞行时间串联质谱技术(uhra-performance liquid chromatography/quadrupole time-of-flight mass spectrometry,UPLC/Q-TOF-MS)分析附子随煎煮时间延长其生物碱含量的变化,从中药化学角度为附子炮制、含附子中药复方制备工艺等提供科学依据.方法:基于UPLC/Q-TOF-MS建立附子不同时间点水煎液的化学指纹图谱,通过主成分分析和偏小二乘判别法分析附子随煎煮时间生物碱类成分的含量变化.结果:乌头碱、中乌头碱、次乌头碱等毒性较大的双酯型二萜类生物碱,在煎煮2~10 min后含量较高,而苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰中乌头原碱等毒性较小的单酯型二萜类生物碱的含量在煎煮60 min内是趋干增加的,随后其含量趋于稳定.结论:临床使用附子应根据适应证选择适宜的煎煮时间,避免煎煮不足导致中毒,或煎煮太过影响疗效.以双酯型二萜类生物碱为主要药效成分时,附子制备时间好在30 min内;以单酯型二萜类生物碱为主要药效成分时,附子制备时间好在60 min内.

    关键词: 附子 煎煮 液质联用
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  • 千层纸素A内皮依赖性舒张大鼠离体血管的作用

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    目的:研究对香豆酸,一种食物中含有的酚酸对佐剂性关节炎大鼠的抗过氧化治疗作用.方法:大鼠右后肢脚垫皮内注射0.1 mL弗氏完全佐剂诱发关节炎.于佐剂注射后第11~18天连续给药8d,治疗组用药为对香豆酸(100 mg/kg大鼠体质量,腹腔内给药),阳性对照组药物为吲哚美辛(3 mg/kg大鼠体质量,腹腔内给药).对佐剂性关节炎大鼠的肝脏、脾脏、血浆内脂质过氧化作用水平和抗氧化水平的变化进行测量,同时分析大鼠后肢的影像学改变以衡量对香豆酸的抗氧化作用.结果:佐剂性关节炎大鼠经对香豆酸治疗后,脂质过氧化作用和抗氧化水平恢复近正常值.影像学观察发现,治疗组大鼠的软组织肿胀、骨侵蚀及关节间隙狭窄情况得到缓解.结论:对香豆酸对佐剂性关节炎大鼠有明显的治疗作用,这种治疗作用可能与其抗氧化作用相关.

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