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促性腺激素释放激素激动剂对卵巢黄素化颗粒细胞甾体激素合成急性调节蛋白表达的影响
自上世纪90年代开始,促性腺激素释放激素激动剂(gonadotropin-releasing hormone agonist,GnRH-a)被广泛用于辅助生育技术领域控制性超排卵治疗中.近年来,人们逐渐认识到GnRH-a在提高获卵数量和妊娠率的同时,存在着对垂体和卵巢黄体的过度抑制作用.
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体外培养人卵巢黄素化颗粒细胞的鉴定及其分泌功能变化
人卵巢黄素化颗粒细胞(颗粒细胞)是卵泡内主要的体细胞成分,它介导促性腺激素对卵母细胞成熟的调节,通过自分泌或旁分泌作用,维持有利于卵母细胞成熟的微环境.因此,研究颗粒细胞的功能和调控,对于了解卵母细胞的成熟规律有重要意义.本研究的目的是探讨颗粒细胞的分泌功能,及其与胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)及表皮生长因子(EGF)的关系.
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多囊卵巢综合征患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物1、2表达及其酪氨酸磷酸化
目的 检测多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢黄素化颗粒细胞胰岛素受体底物(IRS)-1、IRS-2蛋白表达及其酪氨酸磷酸化水平,探讨卵巢局部胰岛素抵抗的分子机制.方法 收集行体外受精-胚胎移植治疗的11例PCOS患者(PCOS组)和15例排卵正常的输卵管性不孕患者(对照组)促排卵后卵巢黄素化颗粒细胞,采用放射免疫法检测血清LH、FSH、睾酮及空腹胰岛素(FINS)水平;采用葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖(FPG)水平;利用稳态模型(HOMA)计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用RT-PCR、Western印迹及免疫沉淀法分别检测两组卵巢黄素化颗粒细胞IRS-1和IRS-2 mRNA、蛋白的表达及其酪氨酸磷酸化程度.结果 (1)PCOS患者血清LH、LH/FSH、睾酮、FINS及HOMA-IR均明显高于对照组(均P＜0.05);(2)与对照组比较,PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞IRS-1 mRNA、蛋白的表达显著增加(均P＜0.05),IRS-2 mRNA、蛋白的表达显著降低(均P＜0.05);(3)PCOS患者卵巢黄素化颗粒细胞IRS-1和IRS-2酪氨酸磷酸化程度均较对照组明显降低(均P＜0.05).结论 PCOS患者卵巢局部存在胰岛素抵抗,其原因可能与IRS-1和IRS-2蛋白表达及其酪氨酸磷酸化异常有关.
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顺铂对人卵巢黄素化颗粒细胞的毒性及凋亡的影响
目的 研究顺铂(cisplatin,CDDP)对人卵巢黄素化颗粒细胞的毒性及凋亡的影响.方法收集体外受精-胚胎移植(IVF-ET) 时的人黄素化颗粒细胞进行体外培养,采用MTT法检测不同浓度的CDDP(0、0.5、1、2.5、5 mg·L-1)对人黄素化颗粒细胞生长的抑制作用;采用Hochest 33258荧光染色检测细胞凋亡,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检 测bcl-2和bax基因蛋白的表达.结果 CDDP浓度≥1 mg·L-1可抑制颗粒细胞的生长;1、2.5、5 mg·L-1CDPP处理人黄素化颗粒细胞24h后,荧光染色可观察到明显的核浓缩、核碎裂形态.FCM检测bcl-2蛋白表达逐渐减少(P<0.05),各组间比较差别有统计学意义;bax蛋白表达逐渐增加(P<0.05),各组间比较差别有统计学意义.结论 CDDP可抑制人黄素化颗粒细胞生长,促进凋亡,其作用机制可能是通过上调bax和下调bcl-2基因表达实现的.
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丙戊酸钠对人卵巢黄素化颗粒细胞激素分泌及相关甾体合成酶mRNA影响
目的丙戊酸钠(VPA)为抗癫痫的有效药物,长期应用可引起类似于多囊卵巢综合征(PCOS)生殖内分泌功能紊乱,本研究通过人黄素化卵巢颗粒细胞原代培养体系,研究VPA对黄素化颗粒细胞的激素生成及类固醇激素生成急性调节蛋白(StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)和芳香化酶(P450arom)的mRNA影响.方法收集体外受精-胚胎移植(IVF-ET)时的人黄素化颗粒细胞进行体外培养,适时给于不同浓度的VPA(0、100、250 mg·L-1)处理,2 d后收集培养液、细胞,采用放射免疫方法测定颗粒细胞分泌孕酮及雌二醇的量,并以细胞蛋白浓度校正激素含量.采用荧光实时RT-PCR(TaqMan assay)方法检测颗粒细胞中StAR、P450scc和P450arom mRNA表达.结果 VPA刺激人黄素化颗粒细胞的孕酮(P<0.05)和雌二醇(P<0.01)的分泌,且StAR mRNA (P<0.01)、P450scc(P<0.05)和 P450arom(P<0.01)表达增加.结论 VPA可直接作用于黄素化颗粒细胞,通过改变StAR、P450scc和P450arom mRNA的表达,而引起孕酮和雌二醇的分泌变化,而临床上长期服用VPA的癫痫妇女出现类似于PCOS患者的生殖内分泌功能紊乱可能与该药物本身作用有密切联系,同时提示了非遗传因素即环境因素在PCOS发病中也发挥一定作用.
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瘦素对多囊卵巢综合征患者卵巢黄素化颗粒细胞雌激素分泌的影响
目的 探讨不同浓度瘦素在促卵泡激素(FSH)的参与下对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢黄素化颗粒细胞雌二醇(E2)的影响.方法 20例行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的不孕症患者,分成PCOS组和对照组各10例.采用卵泡刺激长方案促排卵,体外培养得黄素化颗粒细胞,然后在不同浓度瘦素(0 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml、100 ng/ml、1 000 ng/ml)、卵泡刺激素(FSH)(5 mIU/ml)及雄烯二酮(1 μmol/ml)联合作用下继续进行培养24 h,收集培养液,用放射免疫法测定颗粒细胞产生E2的浓度.结果 加入不同浓度瘦素(10 ng/ml、20 ng/ml、100 ng/ml、1 000 ng/ml)后PCOS组和对照组卵巢颗粒细胞E2的分泌均受到明显抑制;随瘦素浓度的增加E2水平逐渐降低(P＜0.05).结论 瘦素能抑制PCOS卵巢黄素化颗粒细胞雌激素的分泌,其抑制作用随瘦素浓度的增加而增强.
