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热休克蛋白70促进猪瘟病毒囊膜糖蛋白E0的小鼠免疫效果
为了初步探索热休克蛋白70(Hsp70)作为分子佐剂增强猪瘟病毒亚单位疫苗的免疫效果,本研究根据猪瘟病毒兔化弱毒株囊膜糖蛋白E0的基因序列,设计一对特异性引物,RT-PCR扩增得到完整的E0基因,将其分别插入到原核表达质粒pColdI和含有副猪嗜血杆菌Hsp70的pColdI-Hsp70中,构建了pColdI-E0和pColdI-E0-Hsp70重组质粒,经IPTG诱导表达后,获得了E0、Hsp70和E0-Hsp70融合蛋白.将以上三种蛋白纯化后分组免疫Balb/c小鼠,通过ELISA和流式细胞术测定了小鼠针对E0蛋白的体液免疫和细胞免疫效果.结果显示:E0-Hsp70融合蛋白和E0+Hsp70混合物免疫后均能显著提高抗E0的抗体效价、CD4+和CD8+T细胞水平,并促进IFN-ν的释放.研究结果表明Hsp70能显著增强猪瘟病毒囊膜糖蛋白E0在小鼠上的免疫效果,为在猪体上的进一步应用奠定了基础.
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HSP70/CD80嵌合DNA疫苗对哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性的作用
目的 研究HSP70/CD80嵌合DNA质粒对哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性的作用,为安全可靠的新型免疫调节性疫苗奠定基础.方法 将40只雌性健康BALB/c小鼠随机分为4组:对照组、哮喘组、pcDNA3.1载体组、HSP70/CD80嵌合DNA疫苗组,每组10只.用HSP70/CD80嵌合疫苗免疫小鼠后,建立鸡卵清蛋白致敏的小鼠哮喘模型,观察其气道阻力变化,支气管肺泡灌洗液中IL-13、IFN-γ含量的变化.取肺组织进行病理组织学分析,观察肺内炎症情况.结果 HSP70/CD80嵌合DNA疫苗免疫小鼠后,能有效减轻气道炎症(P＜0.05),降低气道阻力(P＜0.05),肺泡灌洗液中IFNl的分泌增加(P＜0.05),IL-13降低.结论 HSP70/CD80嵌合DNA疫苗可促进免疫反应向Th1偏移并增加IFN-γ的生成,减轻气道炎症,降低气道阻力,这为过敏性哮喘新型免疫调节性疫苗的机制及应用研究提供了实验资料.
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pcDNA3.1/MAGE-3-HSP70融合蛋白诱导特异性抗肿瘤免疫应答的研究
目的构建重组表达质粒pcDNA3.1/MAGE-3-HSP70,观察其诱导免疫应答的能力和抗肿瘤免疫治疗的作用.方法通过RT-PCR扩增MAGE-3和HSP70 cDNA,以pcDNA3.1为载体,构建pcDNA3.1/MAGE-3-HSP70重组质粒,肌肉注射接种小鼠,间隔7 d,共3次,以pcDNA3.1/MAGE-3、pcD-NA3.1/HSP70、pcDNA3.1和PBS为对照,检测脾淋巴细胞CTL杀伤活性、脾细胞培养上清IL-2、IFN-γ浓度、外周血淋巴细胞亚群变化及鼠血清中抗MAGE-3抗体水平.pcDNA3.1/MAGE-3-HSP70重组质粒免疫已负荷B16/MAGE-3的小鼠,观察小鼠成瘤时间、生存时间.结果pcDNA3.1/MAGE-3-HSP70质粒免疫的小鼠,其脾淋巴细胞对MAGE-3阳性靶细胞表现出明显的杀伤活性,与各对照组相比,P＜0.01,差异有统计学意义;外周血中CD4+、CD8+T细胞和脾细胞培养上清中TH1类细胞因子IFN-γ、IL-2水平明显升高.pcDNA3.1/MAGE-3-HSP70重组质粒免疫已负荷B16/MAGE-3的小鼠后,小鼠成瘤时间明显延迟,生存期明显延长.结论pcDNA3.1/MAGE-3-HSP70 DNA疫苗在体内能诱导出显著的MAGE-3特异性抗肿瘤免疫应答,且能抑制体内已经存在的少量肿瘤细胞的成瘤.
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白癜风患者血清抗黑素细胞抗体检测及相关抗原的鉴定
目的：检测白癜风患者血清抗黑素细胞胞质和胞膜蛋白质抗体，并鉴定高识别率的胞膜抗原；检测白癜风患者血清抗酪氨酸酶相关蛋白1（ TRP-1）抗体与热休克蛋白70（ HSP70），并探讨二者的关系。方法体外培养高纯度正常人黑素细胞，间接免疫荧光法检测抗黑素细胞抗体并对相关抗原定位，裂解黑素细胞并抽提蛋白质，免疫印迹法检测50例白癜风患者血清（4例HBsAg阳性），并用蛋白质谱分析技术鉴定相关胞膜抗原；ELISA法检测70例白癜风患者血清（10例HBsAg阳性）抗TRP-1抗体和HSP70。结果间接免疫荧光法显示白癜风相关抗原位于黑素细胞胞质及胞膜上。免疫印迹法检测显示，膜抗原阳性率为80％，相应膜抗原相对分子质量（ Mr ）大约为86×103、75×103、60×103、52×103、44×103，各条带阳性率分别为36％、58％、22％、2％、2％；胞质抗原阳性率为30％，其M r约为110×103、90×103、75×103、50×103、40×103，各条带的阳性率分别为12％、4％、12％、10％、2％。20例对照血清胞膜抗原和胞质抗原阳性率分别为15％和5％。白癜风组均明显高于对照组。蛋白质谱鉴定显示：Mr为86×103和75×103的膜抗原为Lamin A／C，Mr 为60×103的膜抗原为Vimentin X1。在合并乙型肝炎的白癜风患者血清中存在高水平的抗TRP-1抗体与HSP70，并且二者浓度呈显著正相关性（ r＝0．927，P＜0．01）。结论通过蛋白质谱鉴定，发现了一种新的白癜风相关黑素细胞膜抗原，对白癜风自身免疫机制的研究有重要意义。通过检测血清抗TRP-1抗体和HSP70，初步探讨了HBV感染与白癜风发病的关系。
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早期丙氨酰谷氨酰胺强化肠外营养对危重病患者热休克蛋白70、白介素-6及D-乳酸的影响
危重病患者因外科大手术、严重复合创伤、严重感染等应激因素导致体内谷氨酰胺(Glutamine,Cln)消耗急剧增加[1].研究表明危重病患者血Gln水平明显下降,显著低于健康人空腹血浓度(500～700 μmol/L)[2-3].而危重病患者由于各种应激因素导致胃肠功能紊乱甚至衰竭,早期无法通过胃肠道途径补充Gln.本研究旨在评估危重病患者早期肠外补充Gln对体内热休克蛋白70(heat shock proteins70,HSP70)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、D-乳酸水平的影响,以进一步探讨Gln对危重病患者的保护作用及机制.
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甘草酸二铵上调急性肺损伤大鼠热休克蛋白70的表达
急性肺损伤(acute lung injury，ALI)为全身性炎症反应失控在肺部的具体表现。热休克蛋白(heat shock protein,HSP)又称应激蛋白，是机体细胞在高温或应激情况下产生的一种蛋白质，它能保护细胞免遭有害刺激所造成的损伤[1]。研究发现甘草酸二铵（diammonium glycyrrhizinate，DG）对ALI大鼠早期炎症失控有一定调节作用[2]，但其抗炎作用是否与HSP70相关？目前尚缺乏相关证据。本研究拟采用脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导建立大鼠ALI模型，观察DG对肺组织HSP70及血清TNF-α，IL-10表达的影响，以探讨DG对ALI的可能作用机制。
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HSP70的表达在不同预处理下星形孢菌素诱导的大鼠神经细胞毒性应激损伤模型中的意义
目的评估不同预处理对抑制星形孢菌素（STS）诱导的神经细胞毒性应激损伤的作用。方法选取 SD大鼠乳鼠120只，分为对照组（n =20）、STS 模型组（n =20）、姜黄素组（n =20）、槲皮素+ STS 模型组（n =20）、姜黄素+STS 预处理组（n =20）、姜黄素+槲皮素+ STS 处理组（n =20）6个组。取乳鼠海马神经细胞，利用 STS 诱导建立神经细胞毒性应激损伤模型。对照组研究期间不作任何特殊处理，STS 模型组、槲皮素+ STS 模型组、姜黄素+ STS 预处理组、姜黄素+槲皮素+ STS 处理组、姜黄素组分别加入终浓度为20μmol/ L 的 STS、终浓度为10μmol/ L 槲皮素+20μmol/ L ；STS、终浓度为20μmol/ L 的姜黄素和槲皮素、终浓度为10μmol/ L 的槲皮素+20μmol/ L 的姜黄素和槲皮素、终浓度为20μmol/ L 的姜黄素。利用噻唑蓝（MTT）法、乳酸脱氢酶（LDH）释放率和 WesternBlot 法分别测定各组细胞存活率、细胞毒性损伤程度和 HSP70表达量。结果姜黄素+ STS 预处理组、姜黄素组细胞存活率明显高于 STS 模型组，差异具有统计学意义（ P ＜0.01）；姜黄素+ STS 预处理组和姜黄素组神经细胞毒性率明显低于 STS 模型组，差异有统计学意义（ P ＜0.01）；姜黄素+ STS 预处理组 HSP70表达量高于 STS 模型组和姜黄素组，差异有统计学意义（ P ＜0.01）；姜黄素+ STS 模型组神经元存活率高于槲皮素+ STS 预处理组、姜黄素+槲皮素+ STS 预处理组和 STS 模型组，差异具有统计学意义（ P ＜0.05）。结论姜黄素能增强 HSP70的表达并抑制 STS 诱导的 SD 乳鼠神经元细胞毒性损伤，而槲皮素通过阻断 HSP70表达使姜黄素的抑制作用被抵消。
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探讨胃癌中HP、HSP70、NF-κB表达的相互关系及临床意义
目的：探究胃癌中幽门螺杆菌（Hp）感染和HSP70、NF-kappa B的表达及三者之间的相关性和与胃癌发生的关系。方法选择2010年7月至2013年5月临汾市中心医院消化科行胃镜检查的80例患者，其中胃黏膜正常者45例，胃癌及其相应5 cm以外的癌旁组织者35例，采用免疫组化法对两组HSP 70、NF-κB的表达情况进行检测，采用快速脲素酶试验和改良Gimesa法检测Hp。结果两者在胃癌组织的阳性表达率明显高于癌旁组织和正常胃组织(P<0.05)；Hp阳性的HSP70、NF-κB阳性表达率明显高于Hp阴性，差异有统计学意义（P<0.05）。胃癌组织中HSP70、NF-κB的表达呈正相关，认为HSP70、NF-κB在胃癌中高表达，NF-κB通过对HSP70的转录调控，在胃癌的发生中发挥重要的作用。结论 Hp感染可以增强HSP70和NF-κB的表达，它们之间的联合表达可以作为胃癌发生发展、判断预后的参考指标。
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检测P21、P53、HSP70在食道癌及癌前病变中的表达及意义
目的 分析P21、P53、HSP70检测在食道癌及癌前病变中的表达,积极探讨临床意义和价值.方法 选取我院2012年1月-2013年1月收治的60例食道癌、40例食道良性增生性疾病及20例正常食管组织者,分别取患者病理切片进行HE染色,病理切片中P21、P53、HSP70采用免疫组化法进行检测.结果 HSP70在食道癌组织中表达量低于癌前病变组织,癌前病变组织表达量较正常组织更低,P53和P21在食道癌组织中表达量高于癌前病变组织,癌前组织组织又高于正常组织沪＜0 05);食道癌分化程度越高,P21和P53表达水平越高,HSP70表达水平越低,差异显著(P＜0.05).结论 检测P21、P53、HSP70等指标的表达,与食道癌的发生密切相关,为食道癌临床诊断、治疗及预后评估提供参考依据.
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NMP238,HSP70在宫颈鳞癌中的表达及意义
目的 探讨NMP238和HSP70在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达及意义.方法 收集60例病理确诊的宫颈鳞癌标本为试验组,取同时期因子宫肌瘤手术切除的正常宫颈组织30例作为对照.应用免疫组化S-p法检测癌组织及对照组中NMP238,HSP70的表达.统计分析方法采用x2检验和pearson相关分析.结果 NMP238,HSP70在宫颈鳞癌组的阳性表达率分别为85%,71.7%;正常组织分别为43.3%和33.3%.两者在鳞癌组与对照组中的表达差异有显著性(P＜0.05);宫颈鳞癌组织中NMP238和HSP70的阳性表达在不同病理分级、临床分期中差异均无显著性(P＞0.05),在鳞癌组中,NMP238,HSP70的表达呈显著正相关(P＜0.05).结论 宫颈鳞癌中存在NMP238,HSP70的异常表达,表明宫颈鳞状细胞癌的发生发展与NMP238,HSP70的异常表达有关.且两者在宫颈鳞癌组织中表达呈显著正相关(P＜0.05),提示二者对宫颈鳞癌的发生、发展可能有协同作用.
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热休克蛋白70对应激性胃溃疡黏膜的保护作用
目的:探讨热休克蛋白70(HSP70)表达是否随应激性胃渍疡病程的进展而变化.方法:收集30例应激性胃溃疡出血患者及10例术前患者的胃液及外周血,采用TRIzol一步法提取胃液脱落细胞及外周血白细胞总RNA,采用半定量RT-PCR检测HSP70的表达;同时,采用免疫组化技术检测外周血白细胞HSP70的表达.结果:RT-PCR检测结果提示应激性溃疡各期的HSP70表达明显高于对照组的表达(血标本:1期0.6289±0.1839,2期1.1322±0.3683,3期0.6855±0.1923,对照组0.3868±0.2071;胃液标本:1期0.7741±0.2442,2期1.2385±0.4558,3期0.8790±0.2722,对照组0.4626±0.2416:均P＜0.05),应激性溃疡2期HSP70表达显著高于1期和3期(P＜0.05),而1期和3期之间无统计学差异(P＞0.05).免疫组化结果为应激性溃疡患者外周血白细胞HSP70的表达水平在不同病期有所不同(1期40%,2期80%,3期30%,对照组10%,χ2=10.8383,P＜0.05),以2期表达水平高,对照组表达低.结论:应激性溃疡时患者外周血细胞和胃液脱落细胞均可检测到HSP70的表达,应激状态可诱导HSP70的表达,HSP70对胃黏膜具有保护作用,并可能促进应激性溃疡的愈合.
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热负荷对兔慢性心力衰竭血浆HSP70与血流动力学的实验研究
目的:观察热负荷(heat stress,HS)对兔慢性心力衰竭(CHF)状血浆HSP70与血流动力学的影响.方法:10只新西兰兔作冠状动脉结扎(CAL),另外5只仅作开胸,不作结扎.冠状动脉结扎8周后,10只兔随机分为对照组(n=5)和热负荷组(n=5),并测定血流动力学、抽血测血浆HSP70.然后将心力衰竭(HF)动物放置在环境温度42℃,待肛温达到42℃,维持15～20 min,热负荷结束后,将动物移置到常温环境下,分别测定HS终止后的2 h、4 h、8 h、24 h的血流动力学及血浆HSP70.结果:1.所有手术组动物血流动力学与开胸组血流动力学相比较,统计学检验P＜0.01;2. HS组24 h后心率(HR)、左心室舒张末期压(LVEDP)比对照组和开胸组有改善,P＜0.01,±dp/dtmax与对照组相比差异有显著性,P＜0.01;3.结扎HF组血浆HSP70高于开胸组,P＜0.01;4.HS CHF 24 h后血浆HSP70比对照组、HS前显著升高,P＜0.01.结论:HS对CHF的心肌有保护作用,改善血流动力学,这主要与血浆HSP70水平升高有关.
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热休克蛋白60与冠状动脉病变的联系及经皮冠状动脉介入治疗前后的变化
热休克蛋白(heat shock protein,HSP)又称应激蛋白(stressprotein),是一组具有重要生理功能、进化上高度保守的蛋白质分子家族,根据分子量大小和同源程度可分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、小分子HSP和泛素等.
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Survivin反义RNA与HSP70构建双基因表达载体治疗膀胱癌的理论基础
膀胱癌是泌尿系统常见的肿瘤之一,随着人们生活节奏的加快和生活方式的转变,膀胱癌的发病率呈逐年上升趋势,以往的治疗方式主要为开放式手术或经尿道膀胱肿瘤电切术,这些治疗方式不但创伤较大,而且还无法克服膀胱癌易复发的特性.进入21世纪以来随着分子生物学技术的飞速发展,对膀胱癌的诊疗已进入分子时代,Survivin基因的发现、热休克蛋白分子在肿瘤免疫学中的新认识及RNA干扰技术的进步,为膀胱肿瘤的早期诊断、治疗开辟了全新的领域.本文就Survivin基因促进肿瘤形成的原理、其反义RNA的功效,以及HSP70分子在肿瘤免疫方面的作用展开论述,旨在探讨Survivin反义RNA与HSP70构建的双基因表达载体治疗膀胱癌的可行性.
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热休克蛋白70与心肌保护
热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs),也称应激蛋白,是生物体或离体培养细胞在应激状态下产生的一类内源性保护蛋白,根据同源程度及相对分子质量大小可分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、小分子HSPs等几个家族.
关键词： HSP70 心肌缺血/再灌注损伤 心肌保护 -
模拟失重对大鼠肝脏Hsp70及其基因表达的影响
目的 探讨模拟失重环境中大鼠肝脏组织Hsp70及Hsp70mRNA表达变化.方法 成年Wistar大鼠48只,体重(300±20)g).随机分为6组,按模拟失重时相分别为6、12、24、48、96、0 h组(地面对照组).采用尾悬吊法建立模拟失重动物模型.应用RT-PCR和Western blot技术分别检测各组大鼠肝组织Hsp70蛋白和mRNA的表达.结果 不同时相模拟失重环境下大鼠肝脏Hsp70mRNA水平均显著高于对照组(P<0.05),模拟失重6 h组肝脏Hsp70mRNA表达显著升高,12 h组达高峰,24 h和48 h略有下降,但仍然显著高于对照组(P<0.05).Hsp70蛋白表达水平在6 h组形成高峰,随模拟失重时间的延长,则呈明显下降趋势.96 h组降低到对照组水平.结论 模拟失重使大鼠肝脏组织中Hsp70蛋白和基因表达发生明显变化,提示肝脏Hsp70表达变化与失重应激反应和失重耐受有密切关系.
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高强度聚焦超声联合赛来昔布治疗胰腺癌裸鼠移植瘤的实验研究
目的 研究高强度聚焦超声(HIFU)联合选择性环氧合酶-2抑制剂赛来昔布对胰腺癌裸鼠移植瘤生长的影响.方法 40只裸鼠建立胰腺癌裸鼠移植瘤模型,随机分对照组、HIFU组、赛来昔布组及联合组共观察40 d,研究各处理因素对移植瘤生长的影响.观察4组移植瘤组织病理学变化,RT-PCR检测bcl-2、bax及HSP70的表达,免疫组化检测HSP70的表达.结果 联合组移植瘤平均体积小,赛来昔布组、HIFU组、联合组抑瘤率分别为81.3%、93%、99.7%.病理示HIFU组和联合组中见大片凝固性坏死,HIFU组可见残留癌细胞小岛而联合组未见.PT-PCR示bcl-2在各组中均表达极弱;bax在HIFU组、赛来昔布组及联合组中表达均上调;HSP70以联合组表达上调明显.免疫组化示HIFU组、联合组HSP70呈强阳性表达.结论 HIFU与赛来昔布联合对胰腺癌裸鼠移植瘤的治疗可起到协同作用.HIFU不仅可以直接杀灭肿瘤细胞,而且可以通过上调bax的表达诱导肿瘤细胞凋亡;通过上调HSP70的表达激发机体的免疫反应进一步抑制肿瘤生长.
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血清热休克蛋白70在早发型重度子痫前期中的价值探讨
早发型重度子痫前期 (指孕32 周以前发生), 其发病早, 病情重, 并发症多,对母婴危害极大.本研究通过检测早发型重度子痫前期患者血清热休克蛋白70(HSP70)含量,并与同孕龄正常妊娠对照组和140例＞32孕周子痫前期患者进行比较分析,旨在探讨血清热休克蛋白70在早发型重度子痫前期疾病中的价值.
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促红细胞生成素对婴幼儿先天性心脏病围术期心肌保护的作用及机制
目的 探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)预处理对婴幼儿先天性心脏病围术期心肌的保护作用及其可能的机制.方法 选取中国医科大学附属盛京医院心脏外科2014年4月至2017年1月进行体外循环心内直视手术的80例非紫绀型先天性心脏病患儿.采用区组随机的方法将患儿分为A、B、C三组.A组患儿术前12 h皮下注射EPO 150 IU/kg,B组患儿术前12 h皮下注射EPO 300 IU/kg,C组(对照组)不注射EPO,其他处理同A、B两组.所有患儿分别于入院后及手术后24 h、48 h、72 h检测心肌酶学指标.手术结束后取右心耳组织,分别用Real-time PCR和Western blot方法检测HSP70和ERK1/2 mRNA及蛋白水平的表达变化.结果 A组和B组在手术结束后各时间点,心肌酶学指标明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);A组水平较B组低(P<0.05).Real-time PCR及Western blot检测结果显示,与对照组相比,A组、B组HSP70、ERK1/2 mRNA及蛋白表达量均显著升高(P<0.05);A组HSP70、ERK1/2 mRNA及蛋白显著高于B组(P<0.05).结论 EPO预处理对于体外循环术中的心肌具有一定的保护作用.EPO可能通过上调HSP70及ERK1/2的表达诱导心肌的内源性保护作用,并且150 IU/kg EPO对心肌保护的作用效果更显著.
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鼻咽癌患者血清sICAM-1和SAA1及HSP70检测临床意义分析
目的:探讨可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、血清淀粉样蛋白A1 (SAA1)和热休克蛋白70 (HSP70)在鼻咽癌患者血清中的表达水平及其诊断价值.方法:用酶联免疫吸附法(ELISA)对30例鼻咽癌转移患者,27例鼻咽癌未转移患者和30名正常人的血清sICAM-1、SAA1和HSP70进行检测.结果:血清sICAM-1、SAA1和HSP70含量在鼻咽癌组与正常对照组、鼻咽癌淋巴结转移组与无淋巴结转移组之间差异均有统计学意义,P值均＜0.01.血清sICAM-1和HSP70水平在不同TNM分期中差异有统计学意义,随着TNM分期的提高,其血清水平逐步提高,P＜0.01.而且这3种蛋白质在鼻咽癌患者血清中均具有相关性,即在鼻咽癌患者血清中,这3种蛋白质中的某一种蛋白质含量升高,则另外2种蛋白质的含量也会上升,P＜0.01.结论:经双向电泳和质谱鉴定出的蛋白质在3组标本中确实具有差异,且有一定意义.sICAM-1和HSP70的表达随着鼻咽癌的发展逐渐增强,可能反映鼻咽癌的进展.动态检测鼻咽癌患者血清sICAM-1、SAA1和HSP70的水平,可作为鼻咽癌诊断的一个重要指标,有一定的临床价值.
