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临床大肠埃希氏菌耐药性检测及超广谱β-内酰胺酶流行病学调查
目的 了解广州地区临床大肠埃希氏菌耐药及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的流行情况.方法 对临床分离鉴定的57株大肠埃希氏菌进行5大类15种抗菌药物的耐药性检测.通过表型确认试验筛选出产ESBLs菌株,采用PCR法检测15种临床重要且常见的耐药基因.结果 57株大肠埃希氏菌对15种抗菌药物产生了不同程度的耐药性.其中有23株产ESBLs,ESBLs产生率为40.4％;24株产TEM,13株产CTX-M(其中,8株产CTX-M-55、4株产CTX-M-14、1株产CTX-M-27),2株产OXA-1.结论 广州地区大肠埃希氏菌耐药情况依然严峻.同时,ESBLs流行趋势发生了变化:以前以流行CTX-M-9型为主,现在以CTX-M-1型和CTX-M-9型同时流行为主要特征.
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233株大肠埃希氏菌药敏实验结果分析
目的:对大肠埃希氏菌的耐药情况进行检测分析,为临床医师合理应用抗生素提供实验依据.方法:采用纸片琼脂扩散法(K-B法)进行药敏实验,使用CLSI新制定的的药敏试验标准.结果:233株大肠埃希氏菌对15种常用抗生素表现出不同程度的耐药性,并且产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希氏菌的检出率达到45.9%.结论:大肠埃希氏菌的检出率比较高,耐药状况日益严重,应当增强药敏检测,合理使用抗生素.
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大肠埃希氏菌在葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎恢复中的作用
目的:随着对炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD) 发病机制的深入研究,肠道正常菌群与肠道炎症的密切关系日益受到重视.本研究旨在评价肠道大肠埃希氏菌(E.coli)对葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS) 诱导的小鼠结肠炎肠道黏膜的保护作用及其可能机制.方法:BALB/c 小鼠饮用含 3.5%DSS的饮用水 5 d,诱导小鼠急性结肠炎,模拟人类溃疡性结肠炎.空白对照组饮用未添加 DSS的饮用水.饮用DSS的小鼠随机分为 3组,分别给予不同的处理:(1) 单纯DSS 处理组; (2) 细菌耗竭小鼠(bacteria-depleted mice,BD小鼠)单纯DSS处理组; (3) 细菌耗竭小鼠大肠埃希氏菌处理组.从 4方面评价各组的处理反应:(1) 一般情况:包括体重、疾病活动度(disease activity index,DAI)评分、结肠长度和重量; (2) 组织病理评分;(3) 化学比色法检测病变组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO) 活性; (4) 免疫组织化学方法检测活化的核转录因子-κΒ(nuclear factor kappa B,NF-κB).结果:无E.coli处理的细菌耗竭小鼠难以从DSS诱导的肠炎中恢复.E.coli处理组和无E.coli处理组比较,大体评分、组织病理评分和MPO活性明显改善(P<0.05).E.coli处理组NF-κB活性显著高于无E.coli处理组 (均P<0.05).结论:肠道正常菌群是肠道炎症恢复的必需条件.大肠埃希氏菌能够促进小鼠DSS结肠炎的恢复;该作用与促进NF-κB的活化有关.
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抗多种致病菌的特异性卵黄免疫球蛋白的制备研究
目的：探讨一种新的获得 IgY 多克隆抗体的方法和效果。方法：用三种常见的细菌病原体金黄色葡萄球菌（SA）、大肠埃希氏菌（EC）、铜绿假单胞菌（PA）制备复合抗原，并经过灭活后免疫来亨蛋鸡产生 IgY 多克隆抗体。从免疫后的蛋中提取出IgY多克隆抗体，ELISA法测IgY抗体特异性及浓度滴度。SA、EC、PA三种标准菌株体外抑制实验检测IgY抗体抑菌效果。结果：用SA、EC、PA 复合抗原成功地免疫来亨蛋鸡产生 IgY 多克隆抗体，ELISA 法检测抗体浓度滴度为100，000；IgY抗体明显抑制SA、EC、PA 三种标准菌株的生长。结论：SA、EC、PA 三种细菌复合抗原可以刺激来亨蛋鸡产生高浓度滴度抗体 IgY ，该抗体能明显抑制 SA、EC、PA 三种标准菌株的生长。
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ANCA、ASCA血清学检测与炎症性肠病
炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是指原因不明的一组非特异性肠道炎症,包括溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn's disease,CD).目前,对IBD的诊断是在综合临床表现、实验室和放射学检查、内镜及病理学检查,并在排除各种其他原因引起的肠道炎症基础上做出的.由于机体免疫系统在IBD的发病机制中发挥重要作用,近年来关于血清免疫特异性抗体标记物的研究较多,这些抗体包括核周型抗中性粒细胞抗体(pANCA)、抗酿酒酵母抗体(ASCA)、抗胰外分泌腺抗体、大肠埃希氏菌外膜孔道蛋白C、I2抗体等.这些抗体的检测可能在IBD的诊断、活动度、分层以及对治疗的反应方面都有作用.
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血液病区抗菌药物用量与大肠埃希氏菌耐药的相关性分析
目的 探讨2005～2007年血液病区抗菌药物使用量与大肠埃希氏菌耐药水平变化之间的关系.方法 计算7种抗菌药物平均每日每百张床位所消耗的DDDs及同期大肠埃希氏菌的耐药率,并对抗菌药物用量与耐药率进行相关性分析.结果 哌拉西林-他唑巴坦的使用量与大肠埃希氏菌对头孢他啶和头孢吡肟的耐药率呈显著负相关性;头孢曲松的使用量与大肠埃希氏菌对阿米卡星的耐药率呈显著相关性;而左氧氟沙星的使用量又与大肠埃希氏菌对头孢曲松的耐药率呈显著相关性.结论 血液病区适当增加哌拉西林-他唑巴坦的使用,可以减少大肠埃希菌对第三代头孢菌素的耐药率.
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产超广谱β-内酰胺酶细菌的检测及耐药特性
目的：了解超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌在医院检出率及分布情况。方法：采用纸片扩散初筛法和双纸片增效确认法。结果：共检出ESBLs细菌58株，大肠埃希氏菌、肺炎克雷白氏菌的检出率分别为37.1%，44.9%。脑科及ICU病房检出率高46.6%(27/58)，其次为神经内分泌科15.5%(9/58)，烧伤科、呼吸科均为12.1%(7/58)，其他病房10.3%(6/58)，门诊3.4%(2/58)；产ESBLs菌对亚安培南全部敏感。结论：脑科和ICU病房是产ESBLs菌的主要来源；对产ESBLs菌的治疗以碳青霉烯类(亚安培南及美诺培南)佳。
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137株肺炎克雷伯氏菌与44株大肠埃希氏菌耐药性分析
目的 了解肺炎克雷伯氏菌和大肠埃希氏菌临床分离株的耐药性和产超广谱β-内酰胺酶(EBLs)情况.方法 根据美国临床实验室标准化委员会(NCCIS)的标准,分析181株细菌的耐药性和产ESSBLs情况,药敏判断和ESBLs表型确证按美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)1999年推荐的标准.结果 肺炎克雷伯氏菌137株,其中产ESBLs46株,阳性率为33.6%.大肠埃希氏菌44株,产ESBLs 22株,阳性率为50.0%.不同样本中以气管分泌物分离的细菌产ESBLs阳性率高.不同科室间以脑外科分离的样本产ESBLs阳性率高.产ESBLs株对氨苄西林、氨曲南、头孢唑啉等均表现为耐药.结论 研究显示本院条件致病菌肺炎克雷伯氏菌和大肠埃希氏菌产ESBLq较高,产ESBLs菌对第一、二代头孢菌素耐药,对碳青霉烯类抗生素(如亚胺培南)全部敏感,对β-内酰胺酶抑制剂耐药性较低,后两种药物是治疗产ESBLs菌引起感染的首选药物.
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临床分离常见致病菌的耐药分析
目的了解2003年1月～2005年12月临床住院患者送检的各类标本分离出的大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌,金黄色葡萄球菌的耐药性及变化趋势.方法采用Kirby-Bauer纸片扩散法进行药敏试验,按照美国临床实验室标准化委员(NCCLS)标准判断.结果大肠埃希氏菌敏感的抗生素为丁胺卡那总耐药率为10.5%.铜绿假单胞菌敏感的抗生素为氟哌酸总耐药率为13.7%.金黄色葡萄球菌敏感的抗生素为先锋V号总耐药率为25.1%.3种菌株均有对抗菌素的耐药性呈逐年上升的变化趋势.结论坚持对细菌耐药监测,采取合理选用抗菌药物.
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异基因造血干细胞移植治疗Rh阴性急性再生障碍性贫血1例
32岁患者，2008年9月突发寒战、发热、疲乏，诊断“痔疮、肛屡”，切开引流后高热不退，查全血细胞减少，l0月25日转我院，血常规：WBC 0．25×109／L、淋巴占90％，Hb 65 g／L、PLT 4×109／L，确诊：再生障碍性贫血，极重度；阑尾周围脓肿；肛屡；同胞间HLA配型有完全相合供者，供者Rh 阳性O 型血，受者Rh阴性O型血。抗感染等治疗同时11月2-8日 ATG （抗胸腺细胞球蛋白）300 mg／d ×5 d、Flu （氟达拉滨）50 mg ×5 d、Cy （环磷酰胺）40 mg／kg ×1 d 预处理，8日持续高热39～40℃，生命体征不稳定，11月9日、l0日行外周血干细胞移植术，移植 MNC 3．05×108个／kg，CD34＋细胞7．56×106个／kg ，予泰能、利奈唑胺、卡泊芬净抗感染。 l0日晨病情加重，高热40℃、抽搐，呼吸40～50次／min ，血氧饱和度75％～80％、意识模糊、大小便失禁，血培养为 ESBL＋大肠埃希氏菌，确诊：（1）移植后骨髓空虚；（2）大肠埃希氏菌脓毒血症，感染性休克；（3）肺部感染、呼衰Ⅰ型。继续上述抗感染及改善循环支持对症治疗，短暂停环孢素，予甲强龙500 mg ×3 d 冲击治疗，患者并发血糖、血压升高，间断意识模糊、烦躁等多种症状，积极联系予 Rh 阴性成分血及细胞因子、丙球、胰岛素等积极治疗，＋10 d 中性粒细胞＞0．5×109／L ，＋14 d 白细胞恢复正常，患者病情渐稳定、意识恢复，仍反复寒战、发热，多次血培养同前，泰能、舒普深敏感，卡泊芬净于＋18 d改为伏立康唑片维持3周，＋19 d转出移植病房。患者卧床，白细胞正常，HGB 50～60 g／L，血小板4～12×109／L，胸部 CT：肺部感染，右肺大片实变影。痰培养细菌与血培养一致，移植后3周 CSA 改为口服，渐出现左下肢肿胀、疼痛，考虑软组织感染，加抗 G＋球菌抗生素后好转，继续泰能、舒普深等交替抗感染。12月15日上午出现腹痛、血便，量约200 mL ，于17：20、18：40及19：20反复鲜血便200～400 mL ，予输血、抑酸、止血等治疗，20时急行肠镜检查明确阑尾口血管破裂出血，局部止血，出血渐停止。12月17日高热反复、胸闷、气短，体温40．1℃，CT 提示右下肺炎症较前略吸收，又予万古霉素、特治星治疗，23～28日再予泰能治疗体温恢复正常，2009年1月12日血象恢复，检查供体细胞完全植入出院。后诊断：（1）vSAA （very severe aplastic anaemia）；（2）HLA全相合异基因造血干细胞移植术后；（3）脓毒血症；（4）肺部感染，I 型呼衰；（5）消化道出血；（6）阑尾周围脓肿；（7）肛屡；（8）类固醇型糖尿病；（9）继发性高血压。随访至今患者痊愈，血型O ，型Rh＋，正常生活。
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儿童泌尿系感染的病原学分析
目的:了解近 3年来广州市儿童医院泌尿系统感染患儿的病原菌分布及耐药性,为正确诊断和治疗提供实验室依据.方法:取中段晨尿进行病原菌分离培养,采用 API鉴定系统鉴定细菌 ,并用 Kirby-Bauer纸片扩散法做药敏试验,对大肠埃希氏菌和克雷伯菌进行 ESBLs的检测;分析病原菌的分布及耐药情况.结果: 279株病原菌中,革兰氏阳性球菌 68株,占 24.4%;革兰氏阴性杆菌 211株,占 75.6%,其中大肠埃希氏菌 102株,占 36.6%.葡萄球菌对青霉素、氨苄西林、红霉素的耐药率均高于 75%,耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)发生率达 68%,对万古霉素、替考拉宁敏感;肠杆菌科细菌对氨基糖苷类、喹诺酮类及第 3代头孢菌素有不同程度的耐药, ESBLs产生率为 11.5%,对亚胺培南敏感;非发酵菌对头孢菌素耐药率较高(高于 30%)而对氨基糖苷类、喹诺酮类耐药率较低(低于 20%).结论:儿童泌尿系感染以革兰氏阴性杆菌为主,大肠埃希氏菌是首位病原菌;革兰氏阳性球菌的感染有上升的倾向;病原菌对常用抗生素耐药率高且有逐渐加剧的趋势,多重耐药株大量出现.泌尿系感染宜根据不同病原菌参照体外药敏试验结果选用敏感抗生素治疗 ,合理用药是抗感染治疗及控制细菌耐药性产生和蔓延的有力措施.
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一起由致病性大肠埃希氏菌引起食物中毒的调查
2004年3月,南宁市某职业技术学院发生了一起食用变质面包引起的食物中毒,经流行病学调查和实验室检测,证实是由致病性大肠埃希氏菌引起的中毒.
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医院微生物实验室空气污染状况调查
为了解医院微生物实验室空气污染状况,我们对在日常工作中产生的气溶胶污染空气的状况进行了实验观察.现将结果报告如下.1 材料与方法 1.1 材料普通营养琼脂及微量生化鉴定管均购自杭州天和微生物试剂有限公司 ; 试验菌株为金黄色葡萄球菌 ATCC 25923、大肠埃希氏菌 ATCC 25922.
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健康人肠致病性和肠侵袭性大肠埃希氏菌携带情况调查
致腹泻大肠杆菌可引起婴幼儿流行性腹泻和成人旅行者腹泻。为了解病原体的来源，我们对健康人肠致病性和肠侵袭性大肠杆菌携带情况进行了调查,现报告如下。1材料与方法1.1对象宜州市及其周边各县市来本院体检者，共1000例。其中，男性526人，女性474人，年龄在6个月至85岁之间。1.2材料营养琼脂、麦康凯琼脂和SS琼脂均购自杭州天和微生物试剂公司；诊断血清由兰州生物制品所提供，批号20000502；兔血自备。1.3方法采用直肠拭子法采集标本，即将拭子前端用无菌甘油盐水湿润，然后插入肛门约4～5cm(幼儿约2～3cm)处，轻轻旋转，擦取直肠表面粘液后取出，置无菌试管中送检，将标本接种于血平板、麦康凯及SS平板，置35℃培养24小时，挑取可疑菌落作生化及血清学试验。2结果与讨论1000份肛拭子标本共分离出肠致病性大肠杆菌(EPEC)25株，肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)12株，其分布见表1。1000份标本中共检出37份阳性菌株，阳性率为3.7％，携菌者无性别、年龄的差异。这说明，在我们的周围存在着大量的无症状的带菌者，由于致腹泻大肠杆菌不断地随粪便排出体外，污染周围环境、水源及食物，然后通过各种途径感染易感人群，而婴幼儿和老年人由于其生理特点及抵抗力低等原因，极易受到感染而致病，尤其婴幼儿患者具有较高的死亡率[1]。因而我们应对病房及幼儿园等易感人群集中的地方定期进行消毒，对患者可采取隔离与抗菌药物治疗，尽可能地做到控制传染源，切断传播途径，保护易感人群，从而有效地预防和治疗此类感染。
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显色培养基在微生物检验初筛中的应用
目前，国内检查沙门氏菌、变形杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、假单胞菌属等都按照国标方法进行常规的检测，但对一些突发事件的紧急检验，却争取不了时间。我们应用CHROMagarParisFrance显色培养基分离致病菌，并同时与标准菌株、地方株(食物中毒菌株)作对比试验，获得较为满意的效果，现将方法介绍如下。1材料与方法1.1样品来源显色培养基购自郑州博赛科技有限责任公司，由法国进口分装成品；实验用沙门氏菌、大肠埃希氏菌、蜡样芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌购自中国药品生物制品检定所，其余为地方株及盲样考核中的未知菌株。1.2方法与步骤1.2.1显色培养基的配制将购置的干燥培养基成品沙门氏菌显色培养基、定位显色培养基按说明称取一定分量，分别放入盛有100ml无菌蒸馏水或纯净水的灭菌三角烧瓶内，搅拌均匀，然后在电炉上加热至琼脂完全溶解，待冷却至50℃左右，即可倒入直径为9cm无菌平皿内，100ml培养基约倒6～7个平皿，冷却凝固后翻转平板并包好置冰箱备用(避光，于4℃可保存两周)。肉汤等培养基按GB4789.28进行配制。1.2.2菌液制备从各种平板上挑选标本中可疑菌落及标准菌株的菌落、地方菌株菌落均转种到肉汤管中，于36±1℃培养18～24小时备用。1.2.3平板接种将各肉汤培养液，以无菌接种环挑取菌液，每个菌株分别接种沙门氏菌显色平板、定位显色平板，用分区划线法接种，分离出单个菌落，经36±1℃培养24及48小时，分别观察各平板上菌落生长后显色情况，并作详细记录。1.3评价依据将标准菌株、地方菌株、考核菌株(未知菌株)分别接种在两种显色培养基平板上(CHROMagar显色培养基)。在同一条件、同一环境内进行培养，然后以标准菌株为准，对比识别各种菌落在不同培养基上生长后的菌落色彩。2结果按使用说明制作好的显色平板，当天制作，当天使用，当天接种实验菌株，然后于24及48小时观察各种菌落的颜色，结果如表1。
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一株侵袭性大肠埃希氏菌误诊为志贺氏菌的浅析
笔者从餐厅服务人员的健康体检中检出一株侵袭性大肠埃希氏菌,其血清型为O28ac:K73,初以检出鲍氏12-15型志贺氏菌报告结果,造成误诊,现报告如下.
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肠出血性大肠埃希氏菌致病性与检测方法研究进展
肠出血性大肠埃希氏菌(entero-hemorrhagic E.coli,EHEC)因引起出血性肠炎而得名,其血清型除O157:H7外,尚包括O26:H11:O111:H8,O125:NM等.自1982年在美国发生首次由O157:H7大肠杆菌引起的小型爆发以来[1],O157:H7大肠杆菌的散发病例和小型暴发在美、英等国家不断发生.1996年5月至8月在日本发生O157:H2暴发大流行,世界为之震惊.在我国至今未发现有EHEC感染的暴发报道,但在江苏、山东、浙江、福建等地已有感染者,或发现有EHEC菌株,引起国人关注.
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大肠埃希菌临床分离株耐药性变迁
目的 了解大肠埃希菌对抗生素耐药性变迁,为临床治疗提供参考.方法 菌株鉴定和药敏试验采用ATB全自动微生物分析仪进行测定,超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)采用双纸片协同法.结果 从2001～2005年检出的大肠埃希菌对青霉素类药物耐药率高,对亚胺培南耐药率低,氨基糖苷类和第三代头孢菌素药物具有较好的体外抗菌活性,大肠埃希菌超广谱β-内酰氨酶(ESBLs)的发生率呈逐年上升的趋势,分别是8.5%、16.4%、19.3%、25.4%、27.8%.结论 随着抗生素的广泛使用,大肠埃希菌的耐药性逐渐上升,要加强对其的耐药性监测,指导临床合理用药.
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影响细菌药敏统计准确性的相关因素分析
目的 研究影响药敏统计准确性的相关因素,以提高细菌药敏统计和耐药进展评估的准确性、可靠性,指导临床合理应用抗菌药物.方法 以常见院内感染菌大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等;药敏监测结果进行阳性病原菌统计和规范统计两种方法比较,并分析样本送检率与常见病原菌排序关系.结果 送检率的高低影响病原菌的排位次序;两种统计方法比较显示铜绿假单胞菌株对阿米卡星、美罗培南、哌拉西林、哌拉西林+他唑巴坦、舒谱深,金黄色葡萄球菌对克林霉素差异有统计学意义(P<0.05);大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌则差异无统计学意义(P>0.05).结论 规范统计耐药率低于按阳性菌株统计法的耐药率,建议加强细菌培养送检,用规范统计方法代替按阳性病原菌统计方法.
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产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)细菌的药敏检测分析
目的:通过对129株产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)细菌的分析,对临床针对性治疗ESBL耐药菌提出建议.方法:应用双纸片法测定临床分离的可疑产ESBL的大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌.结果:210株大肠埃希氏菌ESBL阳性检出率为36%,77株肺炎克雷伯氏菌ESBL阳性检出率为68%.分离的129株ESBL细菌对青霉素类,一代、二代和三代头孢菌素、氨曲南耐药,对喹诺酮类、氨基糖苷类、复方磺胺耐药率在50%以上.结论:ESBL细菌的监测对指导临床用药具有重要意义.
