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双功能螯合剂与鼠IgG1 Fab′片段的点特异性交联方法改进
同完整IgG分子相比,单价抗体片段在免疫组织化学及核医学免疫显像中有明显优点.由胃蛋白酶消化制备的F(ab′)2抗体片段经温和还原可生成单价含活性基团-SH的Fab′片段.此片段的优点之一是可利用其铰链区的-SH基团与其它分子行点特异性交联.
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单克隆抗体A在液体制剂中铰链区裂解位点的鉴定
目的:对治疗性单克隆抗体A在液体制剂储存中发生裂解的位点进行鉴定.方法:单克隆抗体A在pH5.9以及pH6.5条件下,40℃保存1个月后,利用分子排阻色谱法(SEC)对产生的碎片进行分离收集,并用电喷雾-四级杆-飞行时间质谱进行分析,确定其裂解位点.结果:未经还原处理时,利用SEC法收集到的碎片相对分子质量为100 565.30,100 726.27和100 886.57 Da,经还原处理后,测得的相对分子质量为23 500.80,26 623.75,26 785.96,26 943.65,50 448.09,50 609.62和50 766.90 Da.上述结果显示,发生裂解的位点为重链铰链区224位赖氨酸以及225位苏氨酸.结论:单克隆抗体A在溶液中发生裂解的位点是铰链区赖氨酸以及苏氨酸之间,该降解现象可通过降低贮存溶液的pH值得到控制.
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基质金属蛋白酶及其抑制物与肿瘤转移研究进展
基质金属蛋白酶是一个大家族,因其需要Ca2+、Zn2+等金属离子作为辅助因子而得名,其家族成员具有相似的结构,一般由5个功能不同的结构域组成:①疏水信号肽序列;②前肽区,主要作用是保持酶原的稳定.当该区域被外源性酶切断后,MMPs酶原被激活;③催化活性区,有锌离子结合位点,对酶催化作用的发挥至关重要;④富含脯氨酸的铰链区;⑤羧基末端区,与酶的底物特异性有关.其中酶催化活性区和前肽区具有高度保守性.金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)是基质金属蛋白酶的天然抑制物.
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人系膜细胞IgA1受体及IgA1分子铰链区糖基化改变的研究进展
IgA肾病是常见的肾小球疾病,发病率占原发性肾小球肾炎的25%~33%.既往认为本病预后良好,但10~20年长期随访证实,其中约1/3的患者终发展为终末期肾衰竭[1].IgA肾病的病理特点是肾小球系膜细胞(MC)增殖及系膜区基质增加,并在系膜区和(或)肾小球毛细血管袢出现以多聚IgA1(pIgA1)为主的免疫球蛋白及补体成分的沉积[2].
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IgG4表达调控因素及在疾病发生与治疗中的作用
人类免疫球蛋白G4(Immunoglobulin G4,IgG4)是IgGs的亚型. IgGs在初次免疫应答中被较迟分泌,在二次免疫应答中被记忆 B 细胞大量分泌.IgGs依据重链序列、铰链区长度及链间二硫键连接位置和数目的差异,被分为 IgG1、IgG2、IgG3 和IgG4[1]. 健康个体 IgG4 血浆浓度仅为0.08 ~1.4 mg/ml,IgG4/IgG比值为0.8%~11.7%.
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IgG4相关性胆管炎的研究进展
免疫球蛋白有4个亚型,即 IgG1、IgG2、IgG3、IgG4,IgG4是其中少见的一个亚型[1,2],它在正常人血清中约占3.0%~6.0%。目前所知,IgG4不能激活补体[3],且对靶抗原亲和力较低。现有研究表明,IgG4的产生是在 T h2的辅助下完成的,这一点与Ig E的产生十分类似,故诱导Ig E 产生的过敏原也可诱导产生IgG4的产生。IgG4铰链区的结构特点对其与抗原结合和效应器作用方面起着重要作用。既往的观点认为IgG4是一种非致病性的抗体[4],然而当前研究发现,IgG4与两类非过敏性疾病关系密切,其一为天疱疮,有报道发现天疱疮患者体内存在抗桥粒芯蛋白的IgG4而导致棘层松懈,大疱形成;其二为IgG4升高为主的多灶性纤维硬化性疾病。此外,在寄生虫疾病中,Ig G4可作为保护性抗体阻止由变应原诱导、IgE介导的效应细胞的启动[5]。近年来,随着对 IgG4研究的不断深入,其在IgG4相关性胆管炎(IAC )中的作用越来越受到学者们的关注,现就IAC的新研究进展综述如下。
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治疗银屑病新药alefacept
1商品名Amevive2 结构特点本品是一种免疫抑制性二聚融合蛋白,由连接于人lgG1的Fc(铰链区,CH2和CH3域)部分的人白细胞功能性抗原3(LFA-3)的胞外CD2+结合蛋白组成.本品是通过重组DNA技术利用中国仓鼠卵巢(CHO)哺乳动物细胞表达系统制得的.分子量为91.4kD.
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转基因IgA肾病小鼠模型的建立与鉴定
目的 利用转基因方法构建一种新的自发性IgA肾病小鼠模型,模拟人体IgA1分子铰链区结构的改变在IgA肾病发病过程中的作用.方法 利用转基因方法将野生型(转基因A组)及糖基化位点突变(转基因B组)的人IgA1铰链区序列转入C57BL/6J小鼠体内,置换小鼠原有的铰链区序列.依据遗传学规则进行繁殖,所有小鼠均经过PCR检测筛选出基因型阳性.阳性亲代鼠于24周龄,阳性F1代小鼠于8周龄采集尿样进行性状观察、尿沉渣镜检和尿蛋白/肌酐检测,取肾脏组织进行IgA免疫荧光染色和H-E染色以评估IgA沉积情况和肾脏组织学变化;心脏采血分离血清,检测IgA、IgG水平.结果 转基因A组和B组分别得到阳性亲代鼠3只和8只,分别获得阳性F1代小鼠17只和52只.2个转基因组的阳性亲代鼠和F1代小鼠肾脏IgA免疫荧光染色显示,IgA在肾小球系膜区沉积;H-E染色显示肾小球系膜细胞增生,系膜基质增多,间质有炎症细胞浸润;新鲜尿沉渣镜检均未见红细胞.尿蛋白/肌酐、血清IgA和IgG水平均显著高于同周龄野生型小鼠.结论 采用转入人IgA1铰链区的方法可以构建出IgA肾病小鼠模型,IgA1铰链区结构的改变在IgA肾病发生中具有重要的作用.
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低糖基化IgA1在IgA肾病中的作用
IgA肾病是常见的一种原发性肾小球肾炎,在我国是导致终末期肾衰竭的重要原因之一.IgA肾病是以多聚体IgA1(polymeride IgA1, pIgA1)为主,包括其他免疫球蛋白和补体沉积于肾小球系膜区,并引起肾小球损伤为特点的肾小球肾炎.IgA1是IgA的一个亚群,其结构特点是具有高度的糖基化,表现在铰链区同时存在N-连接和O-连接糖链.目前,对于IgA肾病的病因及发病机制仍然不明确,近年来,IgA1分子的异常糖基化结构在IgA肾病中的作用引起广泛关注,故本文就异常糖基化IgA1在IgA肾病中的发病机制进行综述.
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抗前列腺特异抗原/抗CD3双特异性单链抗体四聚体的制备
本实验旨在构建人IgG3上游铰链区/p53四价功能域融合基因和抗前列腺特异抗原/抗CD3双特异性单链抗体的基础之上[1],进一步制备该双特异性单链抗体的四聚体.
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二步夹心ELISA分析中"HD-HOOK"效应的抗体铰链区变构假说
二步夹心ELISA分析是将待测抗原与固相包被抗体反应,洗涤去除未结合成分,然后加入标记抗体与被捕捉的抗原结合,其反应信号通常正比于抗原浓度,当抗原超过一定量时,使固相包被抗体呈饱和结合状态,其剂量反应曲线呈平台状延伸.1974年Miles等[1]在二步夹心ELISA法测定铁蛋白的实验中发现,当抗原浓度达到或超过某一高值时,反应信号呈现降低态势,即二步夹心ELISA分析中"HD-HOOK"效应.
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人 IgG3上游铰链区 /p53四价功能域融合基因的构建及空间构象分析
目的构建人 IgG3上游铰链区 /p53四价功能域融合基因,并进行空间构象的分析。方法利用递归 PCR法,扩增人 IgG3上游铰链区 /p53四价功能域融合基因,并在融合基因 5′端和 3′端引入 Sal I与 Hind Ⅲ酶切位点。将融合基因克隆入 pUC19载体中,经酶切鉴定及序列测定证实后,利用计算机软件进行空间构象分析。结果人 IgG3上游铰链区 /p53四价功能域融合基因,经酶切鉴定及测序证实,其大小及核苷酸序列正确,与设计完全一致。计算机软件分析显示,融合基因表达产物可自动装配成四聚体,并具有 4条柔性好的长多肽,可确保与其融合的其他基因片段空间构象的独立性。结论人 IgG3上游铰链区 /p53四价功能域融合基因的成功构建,为进一步研制多价抗体奠定了基础。