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盐霉素增强长春新碱诱导急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡研究
目的:本文旨在研究长春新碱(vincristine,VCR)与盐霉素(salinomycin,Sal)联合作用对急性T淋巴细胞白血病iurkat细胞株增殖、凋亡的影响及其可能的机制.方法:CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测各实验组细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白BCL-2、caspase-3和caspase-8表达水平.结果:VCR、Sal单独及联合处理Jurkat细胞株均显示出明显的增殖抑制作用,两药联合使用的增殖抑制作用更显著(P＜0.05),具有协同作用.联合用药组BCL-2蛋白水平较VCR和Sal单独处理组明显减少,而caspase-3和caspase-8水平明显增高;VCR和Sal联合用药组细胞凋亡率较VCR和Sal单独处理组明显提高(P＜0.05).结论:长春新碱联合盐霉素作用于Jurkat细胞具有协同抑制增殖及诱导凋亡的作用.
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去甲斑蟊素诱导T淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡作用及其机制
目的 研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)在体外对急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞凋亡的作用及其机制.方法 取对数生长期的Jurkat细胞分别加入不同浓度的NCTD和(或)10 mg/L的长春新碱(VCR),倒置显微镜下观察不同时间Jurkat细胞形态、密度及结构的变化;采用MTT比色法测定NCTD及VCR两种药物作用于细胞72 h后对细胞增殖抑制作用的影响;实时荧光定量RT-PCR法对p53及survivin基因表达量进行检测.结果 NCTD及VCR作用组细胞形态出现不规则,胀大、变形现象明显,分布稀疏,大量细胞死亡,两者在相同时间点上对细胞的影响无明显差别.MTT法检测结果表明:NCTD增殖抑制作用呈现时间-浓度依赖关系,佳浓度及时间在20 mg/L,作用72 h时.NCTD与VCR两者对Jurkat细胞均有抑制作用(P＜0.05),两者的抑制率相比无显著性差异(P＞0.05),且两者联合可增加细胞增殖抑制率(P＜0.05).应用实时荧光定量RT-PCR技术定量表达p53及survivin基因,结果显示NCTD组p53基因表达较对照组细胞株明显上升(P ＜0.001),相反survivin基因较对照组明显下降(P＜0.01).结论 (1) NCTD抑制Jurkat细胞株的增殖抑制作用具有时间-浓度依赖关系;(2)NCTD与VCR对细胞增殖均有抑制作用,两者的影响无显著性差异,且两者联合可增强对细胞的增殖抑制作用;(3)NCTD促进Jurkat细胞株细胞凋亡、抑制增殖的机制可能与上调p53基因表达量及下调survivin基因表达量有关.
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Jurkat细胞增殖过程中S期激酶相关蛋白2与p27kip1的表达变化及意义
目的 探讨S期激酶相关蛋白2(Skp2)与p27kip1在淋巴瘤细胞株Jurkat细胞增殖过程中的表达变化及意义.方法 采用免疫沉淀法检测Jurkat细胞中p27kip1与Skp2的结合情况;采用血清饥饿合并释放法同步化处理Jurkat细胞,再分别用Western blot技术、免疫荧光双标技术及核浆分离法检测p27kip1和Skp2在Jurkat细胞中的表达变化及亚细胞定位.结果 p27kip1与Skp2能够相互结合.在Jurkat细胞增殖过程中,p27kip1蛋白表达减少,其中在细胞核内的减少更明显;Skp2蛋白表达增加,其中在细胞浆中的增加更明显.结论 在Jurkat细胞增殖过程中,Skp2在细胞浆中的合成增加,并可能通过加快p27kip1的泛素化降解使细胞核内p27kip1显著减少,从而推动细胞周期的进程.
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左旋门冬酰胺酶对jurkat细胞株增殖凋亡影响的研究
目的：研究左旋门冬酰胺酶对急性T淋巴细胞白血病jurkat细胞株生长的影响。方法：在倒置相差显微镜下观察jurkat细胞经左旋门冬酰胺酶处理前后的生长状态，Gimsa染色观察L-Asp处理前后jurkat细胞的形态变化。通过琼脂糖凝胶电泳检测经不同浓度左旋门冬酰胺酶处理后的jurkat细胞的DNA片段。用流式细胞术检测jurkat细胞经不同浓度门冬酰胺酶处理48小时后的凋亡率及死亡率。结果：终浓度为1IU/ml、2.5IU/ml、5IU/ml、10IU/ml L-Asp均可诱导jurkat细胞发生凋亡和死亡，L-Asp终浓度为2.5IU/ml时jurkat细胞凋亡率高，死亡率随L-Asp浓度增高而升高；凋亡细胞基因组DNA片段化断裂，凝胶电泳可见梯状条带。结论：左旋门冬酰胺酶可以诱导jurkat细胞发生凋亡，其凋亡细胞DNA发生片段化断裂，凋亡率与左旋门冬酰胺酶浓度有关。
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去甲斑蝥素对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞survivin及p53mRNA表达的影响
目的 研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)作用于体外急性淋巴细胞白血病细胞株Jurkat后survivin及p53 mRNA表达的变化,进一步明确NCTD抗白血病机制.方法 采用悬浮培养对数生长期细胞,研究Jurkat细胞株在NTCD作用下的体外机制:实验分成两组:①对照组,培养液中不添加任何药物;②NCTD组,配制20 mg/L浓度的NTCD作用于Jurkat细胞系.两组细胞共同培养72 h.运用Re-al-time PCR技术分别对NTCD作用前后的Jurkat细胞株中的p53及survivin mRNA表达进行定量检测.应用t检验进行统计分析.结果 NCTD组p53 mRNA表达较对照组细胞株上升3％,相反survivin mRNA较对照组下降20％,应用统计学方法每两组进行比较均有统计学意义(P＜0.01).结论 去甲斑蝥素上调抑癌基因p53 mRNA,下调癌基因survivin mRNA途径可能是NCTD抗白血病的主要机制之一.
关键词： Jurkat细胞株 去甲斑蝥素 p53基因 Survivin基因 -
华蟾素对Jurkat细胞株的体外作用和动物实验研究
目的:通过体外实验和动物实验,探索华蟾素对白血病细胞株的作用.方法:通过四氮唑蓝(MTT)比色法、Hoechst荧光染色法、原位末端标记(TUNEL)法、DNA凝胶电泳及流式细胞术(FCM)观察华蟾素对人白血病细胞株Jurkat的增殖、细胞凋亡、bcl-2表达的影响;在DBA/2小鼠的腹腔中注射L1210细胞,比较治疗组和对照组小鼠的生存期,评价药物疗效.结果:与对照组相比,1:100～1:25浓度的华蟾素能明显抑制Jurkat细胞生长,Hoechst荧光染色可见典型的凋亡形态学改变,TUNEL可见深棕色凋亡细胞,DNA电泳出现凋亡特有的"梯子"式条带,Annexin V/PI双染色的FCM也证实凋亡的存在.在经1:100、1:50、1:25浓度的华蟾素处理2 d后,细胞凋亡率分别为18.78%、24.40%和40.29%.凋亡细胞的bcl-2表达由44.07%下调至16.30%.动物实验中,L1210白血病腹水瘤小鼠经华蟾素治疗后,生存期延长35.90%.结论:华蟾素能抑制Jurkat细胞生长并诱导凋亡,可能是通过下调bcl-2的表达来实现.动物实验证实,华蟾素能延长L1210白血病腹水瘤小鼠的生存期.
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IL-12逆转顺铂对人NK细胞免疫功能的抑制及其机制
目的:探讨IL-12逆转化疗药物对NK细胞免疫功能的抑制及其机制.方法:纯化的NK细胞在PMA和Ionomycin刺激条件下、加或不加化疗药物顺铂(cisplatin,DDP)和IL-12,用ELISA法检测培养上清中IFN-γ和TNF-α的分泌水平,流式细胞术检测IFN-γ和TNF-α、肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)和转录因子(T-bet和p-STAT-4)的表达百分率;纯化NK细胞加或不加化疗药物和IL-12预处理48 h,流式细胞术检测其对白血病Jurkat细胞株的杀伤效应.结果:化疗药物明显抑制NK细胞分泌IFN-γ、TNF-α以及TRAIL的表达,IL-12可以明显逆转DDP对NK细胞分泌IFN-γ、TNF-α和TRAIL的抑制(P＜0.05或P＜0.01).DDP抑制IFN-γ和TNF-α的转录因子p-STAT-4的表达,而IL-12通过上调磷酸化STAT-4恢复了NK细胞的IFN-γ和TNF-0α的分泌功能(P＜0.01).杀伤实验显示,DDP抑制NK细胞对白血病细胞Jurkat的杀伤,而IL-12通过上调TRAIL恢复NK细胞的杀伤功能(P＜0.05或P＜0.01).结论:化疗药物DDP抑制NK细胞的杀伤功能以及细胞因子(IFN-γ和TNF-α)的分泌,IL-12通过上调TRAIL和转录因子STAT-4的磷酸化恢复NK细胞的免疫功能,为临床应用IL-12重建肿瘤化疗患者的免疫功能提供实验依据.
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γ-干扰素诱导Jurkat细胞表达B7.1/CD80、 B7.2/CD86分子
目的研究观察γ-干扰素(γ-IFN)诱导Jurkat细胞株表达B7.1、B7.2分子的作用.方法不同浓度的γ-IFN体外孵育Jurkat细胞48 h后,流式细胞仪检测细胞表达B7.1、B7.2的百分率.结果与对照组相比,γ-IFN在312.5～10 000 u/ml浓度下有轻微提高Jurkat淋巴白血病细胞表达B7.1、B7.2分子的作用.在2 500 u/ml浓度时达到高峰,B7.1的表达比对照组提高3.47%,B7.2表达提高2.39%,B7.1与B7.2双表达提高1.85%.结论γ-IFN可轻度诱导Jurkat细胞表达B7.1、B7.2分子.
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血清亲环素A水平与SLE活动相关机制的初步探讨
目的 检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清亲环素A(CyPA)水平,探讨CyPA参与SLE活动的病因机制.方法 应用ELISA检测57例SLE患者和30例正常人血清CyPA水平;应用重组人CyPA(rhCyPA)和/或植物血凝素(PHA)刺激培养Jurkat细胞株,24 h后收集细胞上清,再用ELISA检测上清中干扰素γ(IFN-γ)的含量.结果 SLE活动期患者血清CyPA水平明显高于稳定期患者及正常人(P<0.05);Jurkat细胞株仪在rhCyPA和PHA共刺激下,IFN-γ的分泌才明显增加(P<0.05).结论 rhCyPA和PHA能协同刺激Jurkat细胞株分泌IFN-γ;SLE患者外周血CyPA异常升高可能参与刺激T细胞分泌IFN-γ,促进SLE活动,可作为评价SLE活动的参考指标.
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环磷酰胺诱导白血病细胞株凋亡及FasL、FADD基因蛋白表达
目的研究环磷酰胺(CP)诱导白血病细胞株(Jurkat)凋亡的机制,进一步探讨FasL和FADD在CP诱导白血病细胞凋亡中的作用.方法 CP刺激人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat,分别培养12、24、48 h,在相应的时间点收获细胞,碘化丙啶(PI)染色细胞DNA,流式细胞术(FCM)检测DNA片段的亚二倍体峰(subG1)阳性的凋亡细胞;并用Western Blot技术测定FasL和FADD的表达.结果 CP 3 mg/L刺激Jurkat白血病细胞12 h几乎未见细胞凋亡(P＞0.05),在24 h也只有26.40%的细胞出现凋亡;但随着时间的延长,CP诱导细胞凋亡明显增加,到48 h则有74.95%的细胞发生凋亡(P＜0.01).CP也上调FasL和FADD的表达,并随CP刺激细胞时间的延长其表达量也逐渐增加.结论CP诱导白血病细胞株Jurkat凋亡的起效时间较晚,诱导细胞DNA片段形成,上调FasL和FADD的表达,表明CP诱导白血病细胞凋亡依赖于Fas/FasL通路.
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哇巴因对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株的作用及机制的初步探讨
目的：哇巴因是强心甾体类药物的一种，可诱导众多肿瘤细胞凋亡。观察哇巴因对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡、hTERT、c-myc mRNA及蛋白表达的影响，探讨哇巴因抗肿瘤的作用机制。方法采用不同浓度和时间的哇巴因处理Jurkat细胞株，以加入等体积的1×PBS组作为对照组，分组为：对照组、哇巴因50 nmol/L 24 h组、100 nmol/L 24 h组及50 nmol/L 48 h组、100 nmol/L 48 h组，以流式细胞术检测凋亡率；RT-PCR法检测hTERT、c-myc mRNA水平；Western blot检测hTERT、c-myc蛋白的表达。结果药物作用于Jurkat细胞株24、48 h后，对照组、50 nmol/L 24 h组、100 nmol/L 24 h组及50 nmol/L 48 h组、100 nmol/L 48 h组的细胞凋亡率分别为（4．23±1．01）％、（5．67±3．71）％、（9．63±4．83）％、（19．67±4．55）％、（37．60±11．89）％，哇巴因50 nmol/L 48 h 组、100 nmol/L 48 h 组的凋亡率与对照组相比差异有统计学意义（P﹤0．05）；Jurkat细胞的hTERT 、c-myc的mRNA水平较对照组显著下降了200％，其 hTERT蛋白表达也较对照组下降了224％，c-myc蛋白表达较对照组下降400％（P﹤0．05），且hTERT与c-myc mRNA及蛋白表达的降低呈正相关（P﹤0．05）。结论哇巴因可诱导T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株凋亡。哇巴因也可引起hTERT、c-myc mRNA及蛋白表达的下调，这可能是哇巴因可诱导Jurkat细胞株凋亡的机理之一。
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STI571诱导Jurkat细胞表达HLA-DR、CD25的实验研究
目的 研究观察STI571(商品名格列卫)诱导Jurkat细胞株表达HLA-DR、CD-25分子的作用.方法 不同浓度的STI571分别处理Jurkat细胞24h和48 h后,用流式细胞仪检测细胞表达HLA-DR、CD-25的百分率.结果 与空白对照相比,STI571在0.2～1.2μmol/L浓度下明显促进Jurkat细胞表达HLA-DR、CD-25分子,且诱导效应与时间相关;STI571处理48h比处理24h有更强的诱导效果.结论 STI571可显著提高Jurkat细胞HLA-DR、CD-25分子表达率.
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膜受体介导的细胞凋亡与细胞周期的关系
背景与目的:线粒体介导的细胞凋亡大部分与细胞周期相关,但膜受体介导的细胞凋亡是否与细胞周期有关尚不清楚.本研究旨在观察膜受体介导的人类细胞凋亡与细胞周期特异性,阐明膜受体介导的细胞凋亡与细胞周期的关系.方法:用肿瘤坏死因子-α、抗Fas抗体分别处理指数生长期的Molt-4、Jurkat以及健康人外周血淋巴细胞;应用Annexin V/PI和API等方法,通过流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期特异性.结果:处于静止期的外周血淋巴细胞对凋亡诱导剂不敏感,凋亡率是6%～8%.Molt-4、Jurkat细胞以及加入植物血凝素刺激的外周血淋巴细胞经肿瘤坏死因子-α、抗Fas抗体诱导后出现了明显的细胞凋亡,凋亡率是15%～28%.膜受体介导的细胞凋亡主要发生在细胞周期的早G1期.结论:膜受体介导的细胞凋亡与细胞周期相关,具有细胞周期特异性.
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CAG治疗方案药物对人Jurkat细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用
目的:探讨CAG治疗方案药物阿糖胞苷(Ara-c)、阿克拉霉素(ACR)及粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对人T细胞性急性淋巴细胞白血病细胞(Jurkat细胞)的生长抑制和诱导凋亡的情况.方法:用CAG治疗方案药物分别处理Jurkat细胞和缺铁性贫血患者骨髓淋巴细胞,CCK-8法检测细胞增殖抑制率, 流式细胞仪检测细胞凋亡率. 结果:CAG治疗方案药物作用Jurkat细胞48 h后增殖抑制率为93.67%,与Jurkat细胞PBS对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);与缺铁性贫血患者骨髓淋巴细胞CAG组比较,差异具有统计学意义(P<0.05). CAG治疗方案药物作用缺铁性贫血患者骨髓淋巴细胞48 h后增殖抑制率为7.16%, 与缺铁性贫血患者骨髓淋巴细胞PBS对照组比较, 差异不具有统计学意义 (P>0.05). CAG治疗方案作用Jurkat细胞株12 h后,细胞早期凋亡率为46.12%,晚期凋亡率为5.79%;作用24 h后,细胞早期凋亡率为55.21%,晚期凋亡率为28.31%,Jurkat细胞PBS对照组细胞凋亡率为0,差异具有统计学意义(P<0.05). 结论:CAG治疗方案对缺铁性贫血患者骨髓淋巴细胞的增殖抑制不明显,对缺铁性贫血患者骨髓淋巴细胞副作用小.CAG治疗方案药物能明显抑制Jurkat细胞的生长并杀伤Jurkat细胞,且能诱导较多细胞发生早期、晚期凋亡,凋亡在Jurkat细胞株死亡中起决定性作用,通过凋亡清除绝大多数细胞.
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MSP扩增中3种DNA提取法的比较
目的 比较标准酚-氯仿、Tripure DNA提取法、强碱法3种DNA提取法,研究哪种方法更简单方便,更适合做DNA甲基化特异性PCR(MSP).方法 分别用标准酚-氯仿、Tripure DNA提取法、强碱法提取Jurkat细胞株中的DNA,并对3种方法提取的DNA含量、纯度及所需时间进行比较.结果 3种方法提取DNA的纯度和完整性都较好,标准酚-氯仿法提取的DNA含量低,且费时;强碱法提取的DNA含量高,并省时.结论 这3种DNA提取法提取的DNA都能够达到做MSP的要求,比较而言,强碱法更具优越性.
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独特型TCR Vα1-pIRES-TCR Vβ8表达载体构建及体外表达
目的:构建Jurkat细胞株独特型TCR Vα1-pIRES-TCR Vβ8表达载体,转染后了解其体外表达情况.方法:根据聚合酶链反应-基因扫描(PCR-Genescan)检测Jurkat细胞株TCR Vα及Vβ亚家族表达情况,分别将其所表达的单克隆性的TCR Vα1及TCR Vβ8亚家族基因片段克隆至质粒pIRES的多克隆位点A(MCS A)和多克隆位点B(MCS B)中.通过限制性酶切分析、序列分析、RT-PCR、间接免疫荧光、流式细胞术(FCM)手段鉴定重组表达载体的正确性以及转染A549和Molt4细胞后基因及蛋白的表达情况.结果:构建了2组TCR Vα1-pIRES-TCR Vβ8表达载体,该表达载体转染A549和Molt4细胞后,在mRNA和蛋白水平检测到了TCR Vα1和TCR Vβ8的表达.结论:成功构建了2种独特型Vα1-pIRES-TCR Vβ8真核表达载体,为利用特异性TCR基因修饰T细胞的研究提供方法学依据.
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人参皂苷诱导人T淋巴细胞白血病细胞株凋亡的研究
目的通过观察人参皂苷(GS)诱导人T淋巴细胞白血病细胞株(Jurkat细胞)凋亡,探讨GS影响T淋巴白血病细胞增生作用的机制.方法选用人T淋巴细胞株(Jurkat细胞)作靶细胞,采用MTT法和半固体集落培养法观察不同浓度的GS对Jurkat细胞增生的抑制效应;用An-nexin V-FITC试验法分析Jurkat细胞的凋亡百分率,并进行DNA片段分析(DNA Ladder).结果 MTT法和半固体集落培养法均显示GS在50μg/mL浓度下能够明显抑制Jurkat细胞增生,并随浓度增加抑制作用增强;流式细胞术显示GS在一定浓度和时间范围内可引起细胞凋亡.结论 GS在一定浓度范围内可抑制Jurkat细胞增生,并能够诱导其凋亡,为临床应用提供理论依据.
