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STI571耐药机制及其对策的研究进展
STI571是BCR-ABL酪氨酸激酶靶向抑制剂,是一种新型的抗肿瘤制剂,已成功应用于白血病的治疗.尽管该药可以有效的抑制BCR-ABL酪氨酸激酶活性,但仍有相当一部分白血病患者对其产生耐药性.本文就近年来STI571的耐药机制及其对策的研究进展作一综述.
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酪氨酸激酶抑制剂STI571与P21WAF基因克隆治疗慢性粒细胞白血病的实验研究
本研究探讨酪氨酸激酶抑制剂STI571和P21WAF基因克隆对慢性粒细胞白血病急变K562细胞株的细胞增殖、细胞周期及凋亡等的治疗作用.RT-PCR扩增P21WAF基因,胶纯化回收后连接到T载体测序,序列正确后构建P21-pcDNA3.1载体,将P21-pcDNA3.1与空载体分别以脂质体转染入P21蛋白表达缺如的K562细胞,经筛选得到G418抗性的K562细胞株,Western blot证实转染后有P21蛋白表达,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡.结果表明:表达外源性P21蛋白的P21-pcDNA3.1-K562细胞株生长速度明显慢于对照K562细胞株,流式细胞仪显示G0/G1期细胞增多,MTT法显示P21-pcDNA3.1-K562细胞与STI571联合应用后,与单用STI571作用的K562细胞相比,凋亡细胞比例轻度减少,细胞存活率下降较慢.结论:表达外源P21蛋白能抑制K562细胞增殖,同时对STI571的促凋亡作用有轻度抑制,并降低K562细胞对STI571的敏感性.
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STI571治疗Ph染色体阳性急性髓性白血病
本研究目的探讨用酪氨酸激酶抑制剂STI571治疗Ph染色体阳性急性髓性白血病.2例Ph染色体阳性急性髓性白血病患者中1例经常规化疗未获缓解后口服STI571治疗,另1例仅接受常规化疗.2例在缓解后均进行了异基因造血干细胞移植.结果表明,1例病人经常规化疗达到血液学缓解,另1例经常规联合化疗未缓解但经STI571治疗后达到血液学和遗传学缓解.2例病人分别于异基因造血干细胞移植后18天和11天骨髓恢复造血,均未出现严重的移植物抗宿主病.1例病人在移植后8个月死于间质性肺炎,另1例现在仍无病存活5月.结论:Ph染色体阳性急性髓性白血病预后较差,STI571可用于治疗此类疾病,根治仍须进行造血干细胞移植.
关键词： STI571 Ph染色体 急性髓性白血病 异基因造血干细胞移植 -
酪氨酸激酶抑制剂逆转黏附诱导的骨髓瘤细胞的耐药性
为了探讨酪氨酸激酶抑制剂STI571对RPMI8226细胞黏附、黏附诱导耐药以及靶细胞Rac1 mRNA表达的影响,本研究采用结晶紫染色法分析了RPMI8226细胞与纤连蛋白(fibronectin,FN)的黏附率,用MIT法检测瘤细胞的增殖性,并用半定量RT-PCR研究Rac1 mRNA水平的变化.结果显示:RPMI8226细胞与FN黏附1、6、12小时,其黏附率分别为(43.71±2.18)%、(55.63±1.56)%、(63.42±2.46)%;用20 μmol/L STI571处理1、6、12小时后黏附率分别降为(15.12±1.04)%、(17.58±1.32)%、(17.24±1.59)%;组间差异显著(P＜0.05);阿霉素作用后,FN黏附组细胞IC50值[(1.46±0.04)μmol/L]显著高于BSA组[(0.78±0.03)μmol/L](P＜0.05);FN联合ST1571组IC50值[(0.81±0.05)μmol/L]与BSA联合STI571组[(0.74±0.02)μmol/L]相比无显著性差异(P＞0.05),但却低于FN组(P＜0.05);半定量RT-PCR显示,Rac1 mRNA水平在20μmol/L STI571处理14小时后明显下降.结论:STI571能降低RPMI8226细胞与FN的黏附率、逆转黏附介导的阿霉素耐药,并且可以下调其Rac1 mRNA水平.
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酪氨酸激酶抑制剂通过下调Mcl-1和Bcl-xl诱导K562细胞凋亡
本研究观察酪氨酸激酶抑制剂STI571对CML细胞增殖和凋亡以及抗凋亡蛋白Mcl-1表达的影响,探讨Mcl-1在BCR/ABL抗凋亡信号传导中的作用.应用STI571处理慢性髓系白血病K562细胞株,采用台盼蓝拒染法和MTT法检测STI571对K562细胞增殖的影响,用Annexin Ⅴ和碘化丙锭双染法及流式细胞术检测K562细胞凋亡情况,蛋白印迹法检测STI571对细胞内蛋白酪氨酸磷酸化水平和凋亡相关蛋白表达的影响.结果发现:STI571可有效地抑制K562细胞增殖并诱导K562细胞凋亡,这种作用呈剂量和时间依赖性,同时降低细胞内蛋白酪氨酸磷酸化水平和下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-xl的表达.STI571抑制K562细胞增殖和诱导凋亡与抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-xl的表达下调一致.结论:STI571通过阻断CML细胞内信号传导途径,下调Mcl-1和Bcl-xl的表达,抑制K562细胞增殖并诱导凋亡,表明Mcl-1和Bcl-xl一起在CML抗凋亡过程中发挥重要作用.
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mdr1及bcr-abl阳性白血病细胞对酪氨酸激酶抑制剂STI571耐药的逆转
为了探索bcr-abl和mdr1阳性的白血病细胞对酪氨酸激酶抑制剂ST1571是否有交叉耐药及其逆转方法,采用MTT法检测ST1571对K562-n/VCR细胞的抑制作用,采用多药耐药逆转剂环孢菌素A(CsA)、他莫西芬(TAM)、α-干扰素(IFN-α)单用及CsA与IFN-α联合应用研究对ST1571耐药的逆转作用.结果表明:K562-n/VCR细胞对STI571有交叉耐药性.CsA,IFN-a,TAM 3种逆转剂对其均有不同程度的逆转作用,逆转倍数分别为5.18倍、1.67倍及1.82倍.而半量CsA+IFN-α对K562-n/VCR细胞STI571的逆转倍数为34.87倍.结论:多药耐药基因mdrl的扩增可以导致bcr-abl阳性白血病细胞对STI571的耐药.多药耐药逆转剂CsA,TAM和IFN-α对STI571耐药有明显的逆转作用,CsA与IFN-α半量联合对K562-n/VCR细胞的杀伤作用显著超过全量CsA或IFN-α的逆转耐药作用.本研究结果提示对STI571发生耐药的患者加用CsA和IFN-a,可能会提高其疗效.
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STI571体外对急性非淋巴细胞白血病患者骨髓细胞c-kit表达的影响
为了探讨STI571体外对急性非淋巴细胞白血病患者骨髓细胞c-kit表达的影响,采用逆转录-聚合酶链反应及流式细胞术分别测定不同浓度STI571处理前后骨髓细胞c-kit mRNA及CD117的表达.结果表明:c-kitmRNA及CD117的表达于STI571作用后呈浓度依赖性下降,培养后各药物浓度组与培养前及对照组之间都存在显著性差异(P＜0.05),且0.1xmol/L组的表达明显高于10μmol/L组,而空白对照组与培养前差异不显著.结论:STI571在体外对急性非淋巴细胞白血病患者骨髓细胞c-kit mRNA及CD117抗原的表达有明显的抑制作用,且具药物浓度依赖性.
关键词： 酪氨酸激酶抑制剂 STI571 急性非淋巴细胞白血病 骨髓细胞 C-kit -
慢性粒细胞性白血病患者骨髓源bcr/abl融合基因阳性Flk1+CD31-CD34-干细胞体外抗STI571机制的初步研究
为进一步了解STI571对慢性粒细胞性白血病(CML)患者体内bcr/abl融合基因阳性的原始及定向白血病干/祖细胞分化及增殖的影响,更深入阐明部分CML患者在经历一段血液学甚至是细胞遗传学水平上的完全缓解后复发及对STI571的耐药机制,利用从CML患者骨髓分离到的具有血管母细胞特性、bcr/abl融合基因阳性、免疫表型为Flk1+CD31-CD34-细胞,体外检测了STI571对其在造血集落培养基中的分化及处于分化阶段时的增殖抑制作用.结果显示:浓度为5 μmol/L STI571,维持作用96小时(病人体内维持96小时的STI571浓度只可能达到1-2 μmol/L),即可有效抑制定向造血祖细胞的增殖.没有充分的证据显示,相对原始的bcr/abl融合基因阳性、免疫表型为Flk1+CD31-CD34-细胞的分化及增殖受到明显的抑制作用.结论:CML患者体内的原始白血病干/祖细胞对STI571具有一定的抗性,临床上所观察到的CML患者在运用STI571一段时间后出现正常的造血恢复现象,可能仅仅是因为STI571杀死或抑制了定向恶性白血病祖细胞的增殖,但随着时间的推移,在经历了短暂的血液学甚至是细胞遗传学水平上的缓解后,对STI571耐药的原始白血病干/祖细胞终究会再次导致CML的复发.
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STI571诱导慢性髓系白血病K562细胞凋亡信号通路的研究
本研究应用基因芯片探讨酪氨酸激酶抑制剂(STI571)对K562细胞生长、增殖的影响,研究STI571诱导细胞凋亡过程中基因表达的变化及STI571诱导K562细胞凋亡的机制.用RD-PCR技术制备基因芯片探针,然后制成K562细胞表达谱芯片;用相差显微镜观察K562细胞在STI571处理前后的形态变化;用MTF法检测K562细胞的凋亡,用制备的K562细胞表达谱芯片分析基因表达水平.结果表明,在体外培养条件下用1.0 μmol/L的STI571处理K562细胞达到一定时间(24小时)后,K562细胞生长明显变缓,出现凋亡细胞的特征.用自制的K562细胞基因表达谱芯片检测显示,STI571诱导K562细胞凋亡前后的基因表达有差异.杂交检测后发现,经STI571诱导后基因表达下调的基因有9个,表达上调的基因有4个.这些表达变化的基因主要包括细胞周期相关基因、细胞代谢通路相关基因、信号转导和转录调节相关基因及抗凋亡基因.结论:STI571能有效抑制K562细胞生长,诱导K562细胞凋亡;筛选获得的靶基因在K562细胞恶性转化过程中发挥了重要作用,这为药物靶基因的筛选提供了理论基础.
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格列卫联合亚砷酸对骨髓瘤细胞作用机制的研究
目的：研究亚砷酸（As2O3）、STI571联用对多发性骨髓瘤（MM）细胞周期及其调节蛋白表达的影响，为As2O3和STI571联合应用于临床提供理论依据。方法用MTT法检测细胞生长抑制率；Western blot方法检测二者对细胞周期负性调控因子P16蛋白的表达情况；用流式细胞仪对干预72 h的SP2/0细胞进一步进行细胞周期分析，以明确该蛋白所影响的细胞周期调控点。结果在As2O3和（或）STI571作用下SP2/0细胞生长受抑伴随活力下降，Western blot方法检测出P16蛋白表达呈时间剂量依赖关系，流式细胞仪DNA含量分析发现As2O3、STI571使SP2/0细胞主要阻滞于G1期，未出现凋亡峰。结论 As2O3和STI571均有抑制SP2/0细胞增殖和上调细胞周期抑制蛋白P16的表达，两药联用效果更佳。
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STI571对慢性髓细胞白血病树突状细胞发育的影响
目的 研究STI571对慢性髓细胞白血病(CML)树突状细胞(DC)发育的影响.方法 分离CML患者及正常人的骨髓单个核细胞,将实验分为CML实验组、CML对照组及正常对照组.CML对照组及正常对照组:在培养体系中加入重组人粒单核细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和重组人白细胞介素4(rhIL-4)培养;CML实验组:在对照组的基础上,再加入药物STI571培养.于实验第8天,各组加入重组人肿瘤坏死因子α(rhTNF-α)进一步刺激成熟.Wright染色观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表型,荧光原位杂交(FISH)进行细胞遗传学分析,混合淋巴细胞反应(MLR)检测抗原递呈功能;ELISA法检测培养上清中血管内皮生长因子(VEGF)的浓度.结果 各组均呈现典型的树突状细胞形态;CML实验组CD80、CD86、CD83和HLA-DR的表达均显著高于CML对照组(P＜0.05),经FISH证实,CML DC来源于白血病细胞;各组DC均具有刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力,CML实验组刺激淋巴细胞增殖的能力显著高于CML对照组(P＜0.05),而与正常对照组相似(P＞0.05);CML实验组VEGF的浓度较CML对照组显著降低(P＜0.05).结论 STI571可促进CML骨髓来源DC的活化,可能与其抑制了CML细胞VEGF的过度分泌,从而解除了VEGF对CML DC的分化抑制有关.
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肿瘤生物治疗的新热点——细胞、分子靶向性药物的发展
随着分子生物技术的高速发展和对发病机制从细胞、分子水平的进一步认识,肿瘤生物治疗已进入了一个全新的时代.本文重点介绍了肿瘤治疗领域中近年来发展的信号转导抑制剂--阻断人类表皮生长因子受体-2(HER-2)的Herceptin,阻断HER-1的ZD1839,OSI-774和C225.同时也介绍了分子靶向性药物STI571在白血病和胃肠间质肿瘤中的突破性进展.
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耐STI571的K562细胞株的建立及生物学特性考察
目的：建立1株耐STI571的K562细胞，并对其生物学特性进行研究分析，探讨耐药机理。方法：通过递增STI571药物浓度的方法，成功建立1株耐STI571人白血病细胞株K562/R，并采用RT-PCR、Western-blot、免疫组化、基因测序等生物学手段对其进行耐药机理进行分析。结果：K562/R细胞株在STI571浓度高达1μmol/L水平，仍能稳定生长，繁殖旺盛。K562/R细胞株耐STI57程度较亲代K562细胞多达235倍，该耐药细胞株对HHT﹑VCR﹑DNR具有不同程度的交叉耐药性，与亲代K562细胞比较差异有统计学意义（P<0.05）。与亲代敏感株K562细胞相比，其BCR-ABL基因表达上调，BCR-ABL蛋白及其激酶过度表达。结论：成功建立耐STI571人白血病细胞株K562/R，并对其生物学特性的研究，为STI571耐药机制的进一步深入研究和抗耐药抑制剂的筛选提供了有效的平台。
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甲磺酸伊马替尼对慢性髓细胞白血病树突状细胞发育的影响及机制探讨
目的 研究甲磺酸伊马替尼(Imatinib,STI571)对慢性髓细胞白血病(CML)树突状细胞(DC)发育的影响及探讨其可能作用机制.方法 分离CML骨髓单个核细胞,在培养体系中加入重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素4(rhIL-4)培养(对照组)和在此基础上再加入STI571培养(实验组),于第8天加入重组人肿瘤坏死因子d(rhTNF-α)进一步刺激成熟.观察培养后细胞形态、表型、混合淋巴细胞反应等指标,检测培养上清血管内皮生长因子(VEGF)浓度、细胞核因子κB(NF-κB)活性.结果 2组均呈现典型的树突状细胞形态,实验组CD80、CD86、CD83和人类白细胞抗原DR(HLA-DR)的表达、刺激淋巴细胞增殖的能力显著高于对照组(均P＜0.05);实验组VEGF浓度显著低于对照组(P＜0.05),而NF-κB活性显著高于对照组(P＜0.05).结论 STI571可促进CML骨髓来源DC的活化,这可能与其解除了CML来源VEGF对DCNF-κB活性的抑制有关.
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慢性粒细胞白血病中西医结合治疗进展
慢性粒细胞白血病(CML)是起源于多能造血干细胞的恶性增殖性疾病,病程发展缓慢,典型临 床表现粒细胞显著增多、脾明显肿大、绝大多数慢性粒细胞白血病具有特异的pH标记染色体 ,常以外周血白细胞异常升高及中性中、晚幼粒及成熟粒细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞增多为其特征.
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甲磺酸伊马替尼:一种潜在的抗纤维化药物
甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate,STI571,格列卫(R))是一种小分子酪氨酸蛋白激酶抑制物.美国食品药品管理局2002年批准上市治疗慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML),2006年批准上市治疗胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST).几年之中,它在抗肿瘤领域取得了显著成就,并被列入抗白血病一线药物之中.甲磺酸伊马替尼的抗纤维化作用即在其治疗CML的过程中被注意到.
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应用亲缘异基因造血干细胞移植与STI571治疗非慢性期慢性粒细胞白血病效果的比较
目的:评价亲缘异基因造血干细胞移植与酪氨酸激酶抑制剂STI571治疗非慢性期慢性粒细胞白血病的有效性及安全性.方法:①对象:所有患者在治疗前均经骨髓细胞学、细胞遗传学和/或分子遗传学检查确诊为加速或急变期慢性粒细胞白血病.实验经医学伦理委员会批准,患者均知情同意.STI571治疗组23例患者,男13例,女10例,平均年龄32岁,2002-04/2006-06陆续开始应用STI571,观察截止时间为2006-10,平均用药17.5个月.造血干细胞移植组7例患者,1999-07/2006-04收治,男6例,女1例,平均年龄35.4岁;健康亲缘性异基因造血干细胞供者7例,均与受者经HLA配型证实为全相合.②STI571治疗:23例患者每日口服STI571 600 mg,此过程未给予其他治疗慢性粒细胞白血病的药物.出现以下任一情况药量增至800 mg:治疗3个月仍未达到血液学完全缓解;达到血液学缓解后复发;达到主要遗传学缓解后复发.出现以下任一情况给予停药或减量:中性粒细胞＜1×109 L-1或血小板＜50×109 L-1;出现≥Ⅱ级非血液学不良反应.每周复查血常规,根据血象和骨髓象凋整剂量,每3个月进行骨髓象及细胞遗传学检查.③干细胞移植的相关干预方案:7例患者均采用经典/改良BuCy2方案进行预处理,再给予短程甲氨蝶呤联合环孢菌素A方案预防移植物抗宿主病,其中部分患者加用抗淋巴细胞球蛋白预防移植物抗宿主病.环孢菌素A于移植前1 d以10 mg/(kg·d)分2次口服,并逐渐调整其血浓度至200～400 μg/L;移植后1 d静脉注射甲氨蝶呤15 mg/m2,移植后3,6,11 d静脉注射甲氨蝶呤10 mg/m2.④有效性评估:包括血液学效应(血液学完全缓解、部分缓解、未缓解)、血液学复发及疾病进展、细胞遗传学反应(根据Ph+细胞所占比例分为完全缓解、大部分缓解、小部分缓解、微缓解、不缓解、主要遗传学反应、遗传学复发).⑤安全性评估:按WHO不良反应分度标准分为0～4度.结果:30例患者均进入结果分析.①血液学和细胞遗传学效应:STI571治疗组23例患者均可评价血液学和细胞遗传学效应,12例(52.2%)保持血液学完全缓解,5例(21.7%)发生主要遗传学效应,其中4例(17.4%)为遗传学完全缓解.造血干细胞移植组7例患者于移植后3～6个月均可评价血液学和细胞遗传学效应,且获得血液学和细胞遗传学完全缓解,与STI571治疗组比较差异有显著性意义(P＜0.05).②两组患者的生存情况:两组患者的总体存活率行Kaplan-Meier法比较,差异无显著性意义(x2=0.04,P=0.85).③不良事件与副反应:STI571治疗组在治疗期间,没有患者因药物不良副作用而停药、死亡,7例(30.4%)患者发生Ⅲ/Ⅳ级白细胞和/或血小板减少.造血干细胞移植组2例(28.6%)发生Ⅲ～Ⅳ度急性移植物抗宿主病,3例(42.9%)发生慢性移植物抗宿主病,给予相应治疗后3例无效死亡;移植60 d内发生细菌或真菌感染4例,监测出巨细胞病毒血症2例,经治疗后均得到控制;2例患者发生出血性膀胱炎,经治疗后病情缓解.结论:亲缘异基因造血干细胞移植后血液学完全缓解率、细胞遗传学完全缓解率显著优于STI571治疗,但两种方法终的患者生存率基本相似.
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格列卫毒副反应的观察及辨证施护
格列卫(STI571)是近年来研究的基因靶向治疗药物.2002年5月通过FDA批准用于临床.其治疗慢性髓系CML白血病的机制是通过阻断酪氨酸激酶的磷酸化过程,抑制bcr/abl融合基因蛋白的生成,抑制细胞生物信号的传导,促进细胞凋亡[1].我科用STI571联合小剂量HA治疗Ph染色体和bcr/abl融合基因阳性白血病患者27例,患者在治疗过程中均伴有多种程度不一的毒副反应.为了保证治疗的顺利进行,本组病例实施了中医辨证施护,收到了较好的效果,现介绍如下.
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酪氨酸激酶抑制剂STI57 1对K562细胞周期及相关基因表达的研究
为了探讨不同浓度STI571对K562细胞ATM(ataxia telangiectasia mutated)/ATR(ATM-Rad3-Related)基因表达的影响及相应的细胞周期变化和细胞凋亡机制.以不同剂量的STI571作用于K562细胞株,通过联苯胺、吉姆萨2瑞氏染色和流式细胞术证实其分化方向,RT-PCR半定量检测ATM/ATR基因表达,流式细胞术检测BCL-2、Annexin-V和细胞周期.结果随药物浓度升高,K562细胞向红系分化明显,ATM基因表达量增强而ATR基因表达量降低,Bcl-2水平下降,细胞凋亡显著,亚二倍体和G1期细胞数增多,S期和G2/M期细胞减少.不加入药物的K562细胞ATM和ATR几乎不表达.ATM和ATR基因表达水平的变化呈现STI571浓度依赖形式,并与细胞周期改变、细胞凋亡和红系分化相关.
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STI 571治疗慢性粒细胞白血病患者的护理
慢性粒细胞性白血病(chronic granulocytic leukemia,CML)是4种常见白血病的类型之一,95%CML患者体内的第9号和第22号染色体发生易位,形成所谓Ph染色体.两个癌基因融合后形成bcr-abl基因,该基因具有酪氨酸激酶的活性,从而刺激粒细胞异常增生,导致慢性粒细胞白血病的发生.STI 571(商品名:格列卫)是一种分子水平的基因靶向性抗肿瘤药物,是一种信号传导抑制剂,能特异性作用于由Ph染色体产生的异常蛋白P210,诱导白血病细胞凋亡,对正常造血细胞几乎无抑制作用.我科从2001年10月至2002 年2月采用STI 571治疗Ph染色体阳性CML 21例,现将护理总结如下:
