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化疗药物与STI571联合应用对bcr-abl和mdrl共同阳性白血病细胞的抑制作用
目的:研究治疗bcr-abl和mdr1共同阳性的白血病的新方法.方法:采用MTT法检测酪氨酸激酶抑制剂STI571(1μmol/L)分别与浓度为10-4、10-5、10-6、10-7、10-8mo/L的长春新碱(VCR)、柔红霉素(DNR)、高三尖杉酯碱(HHT)及DNR+阿糖胞苷(Ara-C)(浓度为1 mmol/L)联合应用对bcr-abl和mdr1共同阳性的裸鼠高致瘤性人白血病细胞系K562-n/VCR的作用.结果:不同浓度的VCR单独应用及与STI571联合应用IC50分别为127.28μmol/L、1.37μmol/L,协同倍数为93.04倍;不同浓度的DNR单独应用及与STI571联合应用IC50分别为6.96μmol/L、0.30μmol/L,协同倍数为23.25倍;不同浓度的HHT单独应用及与STI571联合应用IC50分别为156.70μmol/L、7.916μmol/L,协同倍数为19.80倍;不同浓度的DNR+Ara-C单独应用及与STI571联合应用IC50分别为0.10μmol/L、0.015μmol/L,协同倍数为464倍,化疗药物与STI571联合应用细胞毒作用明显增强.结论:化疗药物VCR、DNR、DNR+Ara-C与STI571等联合应用对于bcr-abl与mdrl共同阳性的白血病细胞较单独应用有更强的抑制作用.
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STI 571增强非小细胞肺癌对顺铂的敏感性
目的:比较STI 571单药及联合顺铂(DDP)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞株A549及其DDP耐药株(A549/DDP)的增殖、细胞周期和凋亡的影响以及STI 571相关受体在NSCLC组织中的表达.方法:体外培养A549和A549/DDP细胞,应用MTT法测定STI 571和(或)DDP对细胞的增殖作用;通过FCM法分析细胞周期和凋亡;应用免疫细胞化学和免疫组织化学染色分别测定A549细胞株和NSCLC组织中STI 571相关受体的表达.根据Kaplan-Meier生存曲线,比较血小板衍化生长因子受体(platelet-derived growth factor receptor,PDGFR)-α和-β的表达与NSCLC患者总体生存的关系.结果:STI 571单药对A549/DDP细胞有增殖抑制作用,能增强细胞对DDP的敏感性,增加A549/DDP细胞的G2/M期和S期的细胞数,诱导其凋亡.STI 571在<10 μmol/L时,对A549细胞增殖无明显影响.A549细胞和A549/DDP细胞均表达PDGFR-α和-β,后者还表达c-KIT蛋白.在肺腺癌中,PDGFR-α和PDGFR-β的表达率分别为65.5%和69.0%,与肺鳞癌的70.4%和74.1%相似,仅1例肺鳞癌表达c-KIT(3.7%).表达PDGFR-α和-β的患者3年生存率和总体生存与不表达患者相似.结论:STI 571可以抑制DDP耐药的NSCLC细胞株的增殖,诱导其凋亡,并能增加DDP耐药细胞对DDP的敏感性.在NSCLC患者中,PDGFR-α和-β的表达水平与预后无关.
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STI571联合非清髓性外周血干细胞移植治疗高危慢粒
慢性粒细胞性白血病(慢粒)是一种起源于多能干细胞的肿瘤增生性疾病,异基因干细胞移植是有希望的疗法.因移植后复发率较高,加速期(AP)、急变期或第二次慢性期(CP2)的患者被认为是高危患者.2002年4月～2002年7月,2例高危慢粒患者在我院接受了非清髓性异基因外周血干细胞移植和STI571的联合治疗.特报告如下:
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三氧化二砷增强STI571对K562细胞的细胞毒作用
目的探讨STI571联合三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对慢性粒细胞白血病(CML)细胞增殖和凋亡的影响.方法通过细胞增殖和活力检测、形态学观察、细胞凋亡率和细胞周期检测等方法观察STI571和ATO对CML细胞系K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡效应.结果 STI571和ATO均可抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,并使细胞阻滞于G2/M期;当两药物联合运用时,明显增强对K562细胞增殖的抑制作用,细胞凋亡率也较两药单用组明显增高.结论 ATO能增强STI571对K562细胞的细胞毒效应和诱导凋亡作用.
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人胃肠道间质瘤细胞系的建立及其永生化
目的:建立体外培养的永生化胃肠道间质瘤细胞系,并测定其对STI571的药物敏感性.方法:用中性蛋白酶消化法从胃肠道间质瘤新鲜标本中分离出间质瘤细胞,以含端粒酶逆转录酶(hTERT)和猿猴病毒40大T抗原(SV40LT)的重组逆转录病毒感染对其进行永生化;然后,用MTT法测定STI571对该细胞系的药物敏感性.结果:永生化的胃肠道间质瘤细胞,呈短梭形或不规则形状,单层生长.Western blot 检测表明该细胞系表达c-kit 、c-abl、hTERT、SV40LT蛋白.MTT结果显示STI571对此细胞有较显著的抑制作用.结论:建立的细胞系具有胃肠道间质瘤细胞的特征,可作为体外研究胃肠道间质瘤发病和耐药机制的重要手段之一.
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STI571诱导Jurkat细胞表达Th1细胞因子及HLA-DR、CD-25
目的 应用流式微珠阵列法检测Th1/Th2细胞因子表达及探讨STI571对Jurkat细胞的作用.方法 以不同浓度STI571诱导培养Jurkat细胞,流式微珠阵列法检测培养上清液中IL-2、,IL-6、TNF-α,和IFN-γ表达,流式细胞术检测IL-2膜上受体(CD-25)和HLA-DR表达;结果 STI571诱导Jurkat细胞IL-2、TNF-α表达且表达量呈浓度依赖形式升高,未检测到IL-6表达,CD-25和HLA-DR表达明显升高.结论 STI571能诱导Jurkat细胞高表达Th1细胞因子和CD-25、HLA-DR,流式微珠阵列法能准确监测Th1/Th2细胞因子表达的动态变化.
关键词： 流式微珠阵列 Th1/Th2细胞因子 STI571 Jurkat细胞 -
STI571诱导Jurkat细胞表达HLA-DR、CD25的实验研究
目的 研究观察STI571(商品名格列卫)诱导Jurkat细胞株表达HLA-DR、CD-25分子的作用.方法 不同浓度的STI571分别处理Jurkat细胞24h和48 h后,用流式细胞仪检测细胞表达HLA-DR、CD-25的百分率.结果 与空白对照相比,STI571在0.2～1.2μmol/L浓度下明显促进Jurkat细胞表达HLA-DR、CD-25分子,且诱导效应与时间相关;STI571处理48h比处理24h有更强的诱导效果.结论 STI571可显著提高Jurkat细胞HLA-DR、CD-25分子表达率.
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姜黄素与 STI571对慢性粒细胞白血病细胞株K562作用的体外研究
目的 研究姜黄素(Cur)、STI571以及二者联合应用对慢性粒细胞白血病细胞株K562的影响,探索两药的不同效果及联合应用机制.方法 锥虫蓝排染法计算K562细胞增殖抑制率;Western blot方法检测Cur、STI571以及二者联合应用对K562细胞P210bcr/abl蛋白含量及其下游信号蛋白激酶C(PKC)的影响;用金氏公式评价两药的协同效果.结果 Cur和STI571联合应用对K562细胞呈剂量依赖性的抑制作用,协同指数Q值均＞0.85;Western blot显示,Cur和STI571联合应用对P210bcr/abl及PKC的下调呈明显增强作用.结论 Cur与低剂量(0.1,0.15μmol/L)的STI571联合应用对抑制K562细胞增殖呈单独相加;而较大剂量则可明显协同下调P210bcr/abl和PKC的表达水平.
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抗肿瘤新药STI571研究新进展
STI571是近年开发的用于治疗慢性髓细胞性白血病(CML)的酪氨酸激酶抑制剂，对bcr-abl激酶有高度特异性的抑制作用。由于该药物是在理解疾病分子机制的基础上，针对CML特异的分子异常进行的一种靶向治疗，因而与传统化疗药物有很大的不同，从而引起了人们的普遍关注。现介绍其作用机制、体内外抗瘤作用、临床试验结果及耐药性等的新进展。
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STI571诱导K562细胞耐药前后基因差异表达的研究
目的 研究STI571诱导K562细胞耐药前后基因差异表达情况,探讨其耐药机制.方法 用药物浓度逐步递增的方法诱导野生型K562细胞(K562-W)对STI571产生耐药,用台盼蓝染色、MTT法对耐药K562细胞(K562-R)进行特性鉴定.应用DNA芯片技术对STI571耐药前后的K562细胞的基因差异表达进行检测.结果 诱导出K562-R的耐药浓度为0.5 μmol/L,活细胞比例为98.5%.芯片结果发现662个基因出现差异表达,其中335个基因表达上调,327个基因表达下调.结论 利用DNA芯片技术挑选与耐药可能相关的基因,可为STI571耐药机制的研究提供新的切入点.
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慢性髓系白血病STI571耐药与Bcr-Abl基因点突变的关系
目的 通过Bcr-Abl激酶ATP结合区测序分析,探讨慢性髓系白血病(CML)STI571耐药与Bcr-Abl基因点突变的关系.方法 将CML患者分为对STI571耐药和非耐药两组,细胞系分为STI571耐药细胞系K562/G01、野生型K562/W细胞,进行骨髓单个核细胞或细胞系细胞Abl基因ATP结合区双向测序分析,了解Abl酪氨酸激酶ATP结合区点突变情况.PCR产物的序列长度为344bp,其中的180bp(98～277 bp)为ABL激酶的第906～1 085 bpDNA序列片段,涵盖了Abl激酶的ATP结合区序列.结果 K562/G01耐药细胞ABL激酶ATP结合区DNA测序与K562/W相同,与ABL激酶原序列相比,有两个同义点突变.在STI571耐药急变的CML患者骨髓单个核细胞Abl激酶ATP结合区测序结果发现:在8例耐药急变的患者中2例患者第944位核苷酸C→T单个碱基出现点突变,使苏氨酸(Thr)突变为异亮氨酸(Ile).1例CML-CP的患者第1 070碱基A→G替换,导致357位赖氨酸(Lys)→精氨酸(Arg).结论 Bcr/Abl融合基因ATP结合区的点突变是CML中STI571耐药的重要原因之一,对指导临床用药具有重要价值.
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慢性髓系白血病STI571耐药与蛋白酪氨酸磷酸酶活性关系
目的 探索蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)家族部分成员参与慢性髓系白血病(CML)STI571的耐药机制.方法 利用cDNA表达谱芯片技术初步筛选耐药细胞K562/G01与K562/W差异表达基因,应用半定量RT-PCR技术验证芯片结果;进一步检测耐药细胞系K562/G01及STI571耐药的CML患者单个核细胞胞浆蛋白PTP活性,了解PTP与耐药的相关性.结果 耐药细胞K562/G01基因表达谱芯片分析发现:其中1个PTP成员出现表达下调[PTPRF(PPFIA4)基因,Ratio 0.413,Genbank ID:NM-015053],1个PTK成员表达升高(PTK9基因Ratio 2.004,Genebank ID:NM-198974).胞浆蛋白PTP活性检测:K562/G01细胞胞浆蛋白PTP活性(126.45pmol/min·μg)较K562/W活性(137.32 pmol/min·μg)降低;CML耐药组患者骨髓单个核细胞胞浆蛋白PTP活性为(124.83±12.14)pmol/min·μg较非耐药组患者(138.75±13.29)pmol/min·μg也降低(P=0.04).结论 PTP家族部分成员参与了STI571的耐药机制,PTP活性降低提示患者临床出现STI571耐药倾向.
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STI571治疗BCR/ABL融合基因阳性白血病观察
目的:观察酪氨酸激酶抑制剂STI571在BCR/ABL融合基因阳性表达白血病的治疗效果和副作用.方法:已确诊BCR/ABL+的8例慢性粒细胞性白血病(CML)和1例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者采用STI571+Ara-C治疗.结果:2例CML-慢性期患者均CR至今,6例CML-急粒变患者有2例CR,其中1例CR至今已37周,1例ALL在第三次血液学CR后经治疗维持CR28周后复发.结论:STI571可诱导BCR/ABL+白血病患者完全缓解,降低骨髓BCR/ABL+白血病细胞,延长CR期,药物副作用轻微易耐受,药物作用的个体差异性较大.
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酪氨酸激酶抑制剂STI571对K562细胞生长和凋亡的影响
目的:探讨酪氨酸激酶(TPK)抑制剂STI571对K562细胞生长和凋亡的影响. 方法:取对数生长期K562细胞,分4组培养.Ⅰ组不加任何药物,Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组分别加0.5 μmol/L、1 μmol/L和2 μmol/L 的STI571,继续培养5 d.每d行细胞计数,台盼蓝拒染法检测细胞活力,连测5 d.培养36 h时,取细胞,双缩脲法检测细胞蛋白含量,采取蛋白免疫印迹法进行Procaspase-3及Bcl-xL检测.结果:Ⅱ组、Ⅲ组细胞数低于同-时间段Ⅰ组细胞数(P＜0.05),但高于Ⅳ组细胞数(P＜0.05).与Ⅰ组比较,Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组Procaspase-3和Bcl-xL蛋白表达降低(P＜0.01);与Ⅱ组和Ⅲ组比,Ⅳ组2者表达量更低(P＜0.01).结论:STI571通过下调Bcl-xL,激活Procaspase-3,诱导K562细胞凋亡,从而抑制K562细胞的生长.
关键词： STI571 K562细胞株 Bcl-xl procaspase-3 -
亲缘异基因造血干细胞移植与STI571治疗慢性粒细胞白血病的临床对比研究
目的:评价对比亲缘异基因造血干细胞移植与酪氨酸激酶抑制剂ST571治疗慢性粒细胞白血病的有效性及安全性.方法:90例慢性粒细胞白血病慢性期患者,分为2组,其中亲缘异基因造血干细胞移植组23例,均采用经典或改良BuCy2方案预处理,短程甲氨蝶呤联合环孢素A(MTX+CsA)方案预防移植物抗宿主病(GVHD).STI571组67例,每天应用STI571 400 mg,每周复查血常规,每3个月进行骨髓象及细胞遗传学检查,根据血象和骨髓象调整剂量.结果:观察截止时,移植组和STI571组获得细胞遗传学完全缓解率分别为100%和60%(P＜0.01),但移植组和STI571组的2年生存率分别为77.03%和83.33%,2组患者生存率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:与异基因造血干细胞移植相比,STI571治疗慢性粒细胞白血病患者治疗相关并发症较少较轻,但获得细胞遗传学完全缓解率较低.
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格列卫治疗进展期慢粒白血病的临床观察
目的:评价甲磺酸伊马替尼(格列卫)治疗Ph阳性慢性髓细胞白血病(CML)进展期(即加速期、急变期)的临床疗效.方法:18例对α干扰素(IFN-α)耐药或不能耐受的CML进展期患者设为实验组,予以格列卫口服,持续3～14个月.同期在我院行传统化疗的患者为对照组.结果:实验组血液学总有效率为44.4%,主要遗传学缓解率为16.7%;而对照组总有效率为16.7%.血液学不良反应是主要的不良反应,并与疗效相关.非血液学不良反应较轻且易耐受.结论:与传统化疗相比,格列卫对慢性粒细胞白血病进展期患者有较好的疗效,副作用亦较轻.
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姜黄素联合STI571对K562细胞的作用及其对组蛋白去乙酰化酶8的影响
目的 研究姜黄素单用及联合STI571对K562细胞增殖与凋亡的影响,及其对组蛋白去乙酰化酶8(histone deacetylase 8,HDAC8)的作用,探讨其克服STI571耐药的可能机制.方法 四唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖活性;Annexin-Ⅴ FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡;SABC法检测细胞HDAC8的表达.结果 ①姜黄素和STI571分别以时间和浓度依赖的方式抑制K562细胞增殖,其36 h的IC50分别为(22.23±2.15)μmol/L和(0.21±0.03)μmol/L,而联用后对K562细胞增殖的抑制作用更为显著.STI571 0.2 μmol/L与姜黄素15、30μmol/L联用36 h后的增殖抑制率分别为(72.59±2.81)%和(88.93±1.58)%.②联用姜黄素与STI571能显著增强其诱导K562细胞凋亡的能力.STI571 0.2 μmol/L与姜黄素10、30μmol/L联合作用18 h后的凋亡率分别为(15.44±2.92)%和(28.16±3.22)%.③姜黄素能明显抑制K562细胞HDAC8的表达.结论 姜黄素与STI571联合能明显增强其抑制K562细胞增殖、诱导凋亡的能力;抑制HDAC8的活性可能是其机制之一.
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胃肠道间质瘤与酪氨酸激酶抑制剂
胃肠道间质瘤(GISTs)是发生于消化道的一种非神经源性、非平滑肌源性的独立疾病.在GISTs中存在不同位点的c-kit功能获得性突变,激活其产物KIT的酪氨酸激酶活性,从而活化多条信号转导通路,诱导细胞增殖与恶变.STI571是人工合成的一种酪氨酸激酶抑制剂,抑制激酶和底物的磷酸化.STI571治疗GISTs的Ⅰ,Ⅱ期临床试验疗效显著,且耐受性较好.
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四硫化四砷STI571和除莠霉素诱导K562细胞凋亡的研究
目的目前慢性粒细胞性白血病(CML)的化疗效果仍不理想,为寻找对CML敏感的药物,该研究探讨四硫化四砷、STI571和除莠霉素对CML细胞株K562的作用.方法通过MTS方法检测三种药物在不同浓度(0.01,0.1,1.0,2.0,5.0,10.0 μmol/L)下对K562细胞活力的影响.采用瑞氏染色、荧光染色和琼脂糖凝胶电泳观察药物处理后细胞形态学的变化和细胞凋亡的发生.用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果用5.0 μmol/L的四硫化四砷、STI571和除莠霉素培养3天,K562细胞活力明显下降,其吸光值分别为0.32±0.04,0.49±0.01,0.69±0.02,其中四硫化四砷和STI571对细胞的抑制作用强于除莠霉素(P<0.01),前两者间无明显差异(P>0.05).1.0,5.0,10.0 μmol/L的四硫化四砷对K562细胞的抑制作用呈时间依赖关系(P<0.01).小于1.0 μmol/L的四硫化四砷对K562细胞活力无明显影响.四硫化四砷培养24至48小时后,K562细胞出现染色质浓缩、核碎片及凋亡小体等典型的凋亡形态学改变.用5.0 μmol/L的四硫化四砷、STI571和除莠霉素培养72小时后,K562细胞的凋亡率分别为68.8%、56.7%和35.5%,2.0与3.0 μmol/L的四硫化四砷诱导K562细胞凋亡率分别为25.7%和45.3%,5.0与10.0 μmol/L的四硫化四砷诱导细胞凋亡的差异不明显.结论 2.0 μmol/L的四硫化四砷能有效地通过诱导凋亡抑制K562细胞生长.
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酪氨酸激酶抑制剂抑制骨髓瘤细胞的增殖及黏附
目的 观察酪氨酸激酶抑制剂STI571对骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞增殖、黏附以及黏附诱导耐药的影响.方法 该试验采用MTT法检测STI571对骨髓瘤细胞增殖的影响;流式细胞仪检测对细胞周期的影响;结晶紫染色法分析RPMI8226细胞与纤连蛋白(fibronectin,FN)的黏附率;MTT法检测STI571对瘤细胞耐药的影响;结果 STI571明显抑制RPMI8226细胞的增殖,24、48和72 h IC50值分别为(34.52±2.31)、(28.46±1.58)和(25.74±2.44)μmol/L.25μmol/L STI571处理24 h,G1期细胞由55.8%增加至72.4%,S期细胞由34.8%减至15.6%.KPMI8226细胞与FN黏附1、6和12 h,其黏附率分别为(43.71%±2.18%)、(55.63%±1.56%)和(63.42%±2.46%);非抑制浓度STI571(20μmol/L)处理1、6和12 h后黏附率分别降为(15.12±1.04)%、(17.58±1.32)%和(17.24±1.59)%;组间差异有显著性(P<0.05);阿霉毒作用后,FN黏附组细胞IC50值[(1.46±0.04)μmol/L]显著高于BSA组[(0.78±0.03)μmol/L](P<0.05);FN联合STI571组IC50值[(0.81±0.05)μmol/L]与BSA联合STI571组[(0.74±0.02)μmol/L]相比差异无显著性(P>0.05),但却低于FN组(P<0.05).结论 STI571能抑制RPMI8226细胞的增殖、并可降低KPMI8226细胞与FN的黏附率及逆转黏附介导的阿霉素耐药.
