首页 > 文献资料
-
染色体R显带分析、双色荧光原位杂交及实时荧光定量PCR对于急性早幼粒细胞性白血病诊断价值的评价
目的:评价染色体R显带技术(RT)、双色荧光原位杂交(D-FISH)和荧光定量PCR (RT-PCR)对急性早幼粒细胞白血病(APL)的诊断价值.方法:采用三种方法分析340例疑诊为APL患者的细胞遗传学特征或PML/RARa融合基因,以MICM综合诊断作为APL的诊断“标准”,并与三者联合检测比较,评价RT、D-FISH和RT-PCR三者的诊断价值.结果:对于APL的诊断,RT、D-FISH以及RT-PCR三者的敏感度分别为81.3％ (78/96),95.0％ (91/96)和96.9％ (93/96),RT漏检18例,D-FISH的检测结果判断5例假阳性,2例假阴性,RT-PCR的检测结果存在4例假阳性,3例假阴性.三者联合检测的敏感度为99.97％,特异度为100％.结论:三种检测方法单独应用于APL的诊断均存在一定的弊端,三者联合运用有利于提高临床诊断率,同时减少误诊率和漏诊率.
-
实时定量RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病PML-RARa融合基因
本研究旨在建立用实时定量RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病(APL)PML-RARa mRNA的方法,探讨APL PML-RARa融合基因表达水平与疗效的关系.用RT-PCR扩增培养的NB4细胞的PML-RARa融合基因,取1μg NB4细胞的总cDNA进行10倍的梯度稀释,作为标准品,建立荧光定量RT-PCR方法,对方法的灵敏性、稳定性、重复性进行了测定.定量检测4例急性早幼粒细胞白血病(APL)患者治疗前后骨髓内PML-RARa融合基因转录本水平,并对1例经治疗完全缓解后又复发的患者PML-RARa转录本水平(拷贝数)进行动态监测.结果表明:用本研究建立的实时定量RT-PCR方法可检测出10-5μg NB4细胞cDNA中的PML-RARa融合基因,其重复性的CT值,管间、批间变异系数(CV)分别为2.1%、3.8%.4例患者初治骨髓PML-RARa基因转录本水平的分别为1 884、5 533、1 803、4 677拷贝,平均为3 475拷贝.经ATRA+化疗治疗后其PML-RARa基因转录水平下降至40、135、79、229拷贝,平均为121拷贝.还有1例患者治疗前PML-RARa基因转录本水平为8 600拷贝,经过4个月治疗,虽然此时患者处于完全缓解期,但其转录水平拷贝数仍有730.3个月后患者出现复发,转录本水平升至为11 000拷贝.经过ATRA+化疗治疗后转录本水平又逐渐下降至1 200拷贝.结论;建立的实时定量RT-PCR灵敏、重复性好.治疗后APL患者的PML-RARa融合基因转录本水平明显下降,复发时基因转录本水平又升高.融合基因表达水平的改变与临床疾病进展关系一致,这有助于监测白血病微小残留病,评价疗效及判断预后.
-
改进的RT-PCR检测PML/RARα融合基因快速诊断急性早幼粒细胞白血病
在急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞中迅速、准确检出PML/RARα融合基因对于及时应用全反式维甲酸(ATRA)或亚砷酸(As2O3)提高诱导缓解率、减轻出血导致的早期死亡至关重要,但目前临床上采用的嵌套式RT-PCR方法繁琐且费时,亟待改进以满足临床APL快速、准确诊断的需要.本研究采用TRIZOL快速提取高质量的细胞总RNA随机引物反转录,热启动单轮PCR,适当控制MgCl2及引物浓度和Taq醇用量,4条引物,3个体系,相同循环参数,对40例初诊APL患者骨髓标本同时扩增PML/RARα融合基因及内对照RARa.结果显示,40例APL患者标本均扩增出特异条带,非APL标本无特异扩增产物;阳性扩增片段清晰易辩、断裂点类型易于确定,检测可在6 小时内完成.结论:此改进的RT-PCR检测PML/RARa融合基因快速、特异、简便,完全满足临床对初诊APL诊断的需要.
关键词： 急性早幼粒细胞白血病 PML/RARa融合基因 RT-PCR -
老年人急性早幼粒细胞白血病28例临床分析
急性早幼粒细胞白血病(APL)是具有独特生物学和临床特征的急性髓细胞白血病(AML),具有特征性的t(15;17)染色体异位及PML/RARa融合基因,有严重的出血倾向,对全反式维甲酸(ATRA)治疗敏感.
-
荧光实时定量逆转录PCR监测急性早幼粒细胞白血病患者的分子学反应
背景与目的:临床及实验研究结果表明,残留白血病细胞与急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytie leukemia,APL)患者的治疗及复发显著相关.实时定量逆转录PCR(real-time quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,RQ-RT-PCR)可更敏感地检测患者体内的白血病细胞,有利于微小残留病(minimal residual disease,MRD)的监测.本研究应用RQ-RT-PCR方法联合对数级下降分析评估了APL患者的分子学反应,以探讨该方法在MRD监测中的作用.方法:100例初诊APL患者,以全反式维甲酸和复方黄黛片或亚砷酸联合化疗诱导缓解,用RQ-RT-PCR方法特异性扩增和检测PML/RARá融合基因两种异构体的表达量,结果以ABL内参基因标化处理(normalized quotient,NQ).动态观察其中33例患者融合基因转录本的表达水平,对数级下降分析法监测分子学反应,后以SAS8.0软件进行统计学处理.结果:100例初诊APL患者中位NQ为0.58.其中L型转录本NQ为0.52,S型转录本NQ为0.74,两者比较差异无统计学意义.动态观察发现33例患者在初诊、诱导达完全血液学缓解时、巩固化疗后及维持期,NQ分别从0.62下降到0.25,再降到0.0003,终降至0.联合对数级下降分析法,患者治疗后各期的分子反应率从次要分子学反应的63.64%,到部分分子学反应的96.97%,再到主要分子学反应的100%,,结论:RQ-RT-PCR联合对数下降分析法可用于APL患者的MRD监测,结果直观、可靠,并且与临床患者的分子学反应密切相关.
关键词： 白血病 RQ-RT-PCR PML/RARa融合基因 对数级下降分析法 MRD -
三氧化二砷及全反式维甲酸对白血病NB4细胞PML/RARA融合基因的影响
目的 探讨在NB4细胞增殖过程中PML/RARA融合基因表达的情况,并用三氧化二砷(As2O3)和/或全反式维甲酸(All trans retinoic acid,ATRA)干扰后观察目的基因的变化.方法 用As2O3(1×106 mol/L)或/和ATRA(1×106 mol/L)干扰体外培养成熟的NB4细胞,后用real/Time PCR检测PML/RARA融合基因的相对表达量.结果 ATRA及As2O3均使PML/RARA融合基因表达抑制,但双药联用无明显协同作用(P＜0.05).As2O3对PML/RARA融合基因表达抑制较同剂量ATRA强.结论 ATRA及As2O3均能下调PML/RARA融合基因.As2O3对PML/RARA融合基因的下调作用及对NB4细胞的增殖抑制均比同剂量的ATRA强.双药联用与单药干预,无叠加效应.
关键词： 三氧化二砷 全反式维甲酸 NB4细胞 PML/RARa融合基因 -
急性早幼粒细胞白血病染色体易位联合R显带和间期荧光原位杂交技术分析
目的 探讨荧光原位杂交(FISH)及常规细胞遗传学染色体核型分析技术对急性早幼粒细胞白血病(APL)患者PML/RARa融合基因检测的灵敏度和特异度及其在临床中应用价值.方法 选取51例APL患者,应用常规细胞遗传学染色体核型分析方法及FISH技术检测患者PML/RARa融合基因的表达情况.结果 在进行常规染色体核型分析的51例患者中41例(80.4%)为t(15;17)(q22;q21)易位的核型异常,其中38例(74.5%)为单纯t(15;17)(q22;q21)易位的核型异常,3例(5.9%)为伴t(15;17)(q22;q21)易位的复杂核型异常;10例(19.6%)无t(15;17)(q22;q21)易位的核型异常中1例(2.0%)为不伴t(15;17)(q22;q21)易位的复杂核型异常,1例(2.0%)为t(11;17)(q13;q21) 易位的核型异常,3例(5.9%)为正常核型,5例(9.8%)未见分裂相.在进行FISH检测的51例患者标本中48例(94.1%)有PML/RARa融合基因异常,同时进行常规染色体核型分析和FISH检测的41例患者同时存在t(15;17)(q22;q21)易位的核型异常和PML/RARa融合基因异常,两者符合率为100%;在15例正常骨髓标本的FISH检测中15例标本结果均未发现有PML/RARa融合基因,提示FISH检测技术具有较高的敏感度和特异性.结论 对于初发的APL患者,常规染色体核型分析和间期荧光杂交技术结合分析APL患者细胞遗传学特征是诊断该病的有力工具,FISH技术操作更为简单,省时直观.
