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  • 大豆异黄酮对膳食诱导胰岛素抵抗大鼠脂联素基因表达的影响

    作者:陈世伟;张红敏;张立实;冯晓凡;彭晓莉

    目的探讨大豆异黄酮(SIF)改善高脂高糖膳食诱导大鼠胰岛素抵抗(IR)状态的作用及可能机制.方法选用高脂高糖饲料诱导的IR雄性SD大鼠,根据胰岛素抵抗指数(IRI)随机分为模型对照组和3个SIF剂量组(50、150及450mg/kg bw).各组给予相应受试物1月后,试纸法检测各组大鼠血糖、放免法检测血胰岛素、酶免法检测血脂联素含量,实时定量RT-PCR法检测肾周脂肪组织脂联素基因的mRNA水平.结果与模型对照组比较,450mg/kg bw组能明显降低大鼠体重及内脏脂肪含量、提高脂肪组织脂联素基因mRNA的表达、促进脂联素的分泌.150mg/kg bw和450mg/kg bw组能显著降低血胰岛素水平及IRI.3个SIF剂量组的血糖与模型对照组比较无明显差异.IRI与血清脂联素水平存在着明显的负相关.结论SIF具有减少大鼠脂肪沉积、促进脂联素的分泌、提高胰岛素敏感性的作用.

  • 脑源性神经营养因子在体外诱导SH-SY5Y细胞分化过程中的作用

    作者:李学礼;吕立夏;张红娟;高景霞;李静琪;徐磊

    目的 探讨不同浓度的脑源性神经营养因子(BDNF)在体外诱导SH-SY5Y细胞分化时,对G2期及其前后细胞周期相关蛋白mRNA表达的影响.方法 采用全反式维甲酸(RA)和低(1μg/L)、中(10μg/L)、高(100μg/L)3种不同浓度BDNF在无血清培养液中相继诱导SH-SY5Y细胞分化,形成均一的具有神经元形态的细胞.以一步法实时定量RT-PCR检测其G2期细胞周期相关蛋白mRNA的表达,荧光激活细胞分类术(FACS)检测各组细胞时相.结果 在各浓度BDNF组中周期蛋白B1(cyclin B1)的mRNA含量与对照组及RA组比较均明显降低(P<0.05);仅高浓度组cyclin B2和周期蛋白依赖性激酶1(Cdk1)的mRNA含量显著降低(P<0.05),;低浓度和中浓度BDNF组Cdk5 mRNA含量均高于RA组(P<0.05).BDNF各浓度组处于G1期的细胞百分率均显著高于RA和对照组(P<0.01),而处于S期的细胞百分率均显著低于对照组(P<0.01),且低浓度及高浓度组同时低于对照组(P<0.01).结论 提示BDNF在有效促进SH-SY5Y细胞进一步分化的同时,没有引起G2期及其前后细胞周期相关蛋白mRNA表达的异常升高,BDNF无诱导细胞凋亡的危险,可能有减缓AD进程的作用,并且呈剂量依赖性.

  • 实时定量RT-PCR监测造血干细胞移植前后CML28 mRNA表达

    作者:张东华;戴敏;周红升;汪涯雅;张路;张丽;王斌;曹文静

    本研究的目的在于建立检测CML28 mRNA的SYBR Green Ⅰ实时定量PCR(RQ-PCR)的方法,并探讨CML28表达水平与异基因造血干细胞移植(Allo-HSCT)后白血病复发之间的相关性,为此构建了pcDNA3.1 HisA-CML28质粒作为定量模板,选择14例白血病患者进行研究.14例患者包括:10例慢性髓系白血病(CML),3例急性髓系白血病(AML),1例Ph阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL).应用Roche Light Cycler PCR仪动态监测患者移植前后不同时间段的50份骨髓单个核细胞中CML28表达水平.研究结果表明:RQ-PCR的灵敏度为10-4(0.05 ng)水平,标准品日间差及日内差均小于10%,重复性好.初治组中AML和CML加速期(CML-AP)与急变期(CML-BC)患者CML28呈高表达(6.58±2.34)×10-2,预处理前组CML28水平为(2.19±0.32)×10-2,移植后1月组CML28水平为(1.35±1.28)×10-2,移植后3月及以后组(以下简称移植后3月组)CML28水平为(4.57±6.39)×10-3.定期随访表明,3例CML-AP或BC患者与1例CML慢性期(CML-CP)患者,在Allo-HSCT 3个月后检测仍呈阳性,其中2例CML28 mRNA的水平<2×10-2,获无病生存;2例CML28水平>2×10-2者,一年内均出现复发,其中1例死亡,另1例行第2次Allo-HSCT后CML28水平虽然迅速下降,但仍>2×10-2,2个月后再次复发.结论:CML28水平与疾病的演变过程存在良好的相关性,对于造血干细胞移植受者,动态监测CML28水平比单一的结果价值更大,实时定量检测移植后CML28水平对预测白血病复发有一定的意义.

  • 实时定量RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病PML-RARa融合基因

    作者:郎丽;李惠民;刘华;王义民;张学美

    本研究旨在建立用实时定量RT-PCR检测急性早幼粒细胞白血病(APL)PML-RARa mRNA的方法,探讨APL PML-RARa融合基因表达水平与疗效的关系.用RT-PCR扩增培养的NB4细胞的PML-RARa融合基因,取1μg NB4细胞的总cDNA进行10倍的梯度稀释,作为标准品,建立荧光定量RT-PCR方法,对方法的灵敏性、稳定性、重复性进行了测定.定量检测4例急性早幼粒细胞白血病(APL)患者治疗前后骨髓内PML-RARa融合基因转录本水平,并对1例经治疗完全缓解后又复发的患者PML-RARa转录本水平(拷贝数)进行动态监测.结果表明:用本研究建立的实时定量RT-PCR方法可检测出10-5μg NB4细胞cDNA中的PML-RARa融合基因,其重复性的CT值,管间、批间变异系数(CV)分别为2.1%、3.8%.4例患者初治骨髓PML-RARa基因转录本水平的分别为1 884、5 533、1 803、4 677拷贝,平均为3 475拷贝.经ATRA+化疗治疗后其PML-RARa基因转录水平下降至40、135、79、229拷贝,平均为121拷贝.还有1例患者治疗前PML-RARa基因转录本水平为8 600拷贝,经过4个月治疗,虽然此时患者处于完全缓解期,但其转录水平拷贝数仍有730.3个月后患者出现复发,转录本水平升至为11 000拷贝.经过ATRA+化疗治疗后转录本水平又逐渐下降至1 200拷贝.结论;建立的实时定量RT-PCR灵敏、重复性好.治疗后APL患者的PML-RARa融合基因转录本水平明显下降,复发时基因转录本水平又升高.融合基因表达水平的改变与临床疾病进展关系一致,这有助于监测白血病微小残留病,评价疗效及判断预后.

  • 实时定量逆转录PCR检测慢性淋巴细胞白血病MDM4基因mRNA的表达及其临床意义

    作者:刘玲;方成;董华洁;王冬梅;朱丹霞;乔纯;范磊;缪扣荣;刘澎;徐卫;李建勇

    本研究旨在探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者鼠双微体4(MDM4)基因mRNA的表达情况及其在CLL预后中的意义.采用SYBRGreenⅠ荧光染料行实时定量逆转录PCR(qRT-PCR)方法检测66例CLL患者白血病细胞MDM4 mRNA的表达,以β-actin为内参照物,以2(-△Ct)方法计算MDM4的相对定量值,组间分析采用秩和检验.结果显示,66例CLL患者MDM4 mRNA相对表达水平的中位数为0.037098(0.088245 -0.014875);具有P53基因缺失的CLL患者,其MDM4的表达明显高于无P53基因缺失的患者(0.13167 vs 0.030927) (p<0.00l),具有P53基因突变的CLL患者MDM4 mRNA表达也明显高于无P53基因突变的患者(0.13167 vs0.03077) (p <0.001);此外,MDM4 mRNA的表达水平还与Binet分期(p=0.044)和ATM基因缺失(p=0.046)显著相关,但与血清乳酸脱氢酶(LDH) (p =0.216)、β2-微球蛋白(B2-MG)(p =0.314)、胸苷激酶(TK)1(p=0.300)、ZAP-70(p =o.559)、CD38 (p =0.513)和免疫球蛋白重链可变区(lgVH)基因突变状态(p =0.333)无显著相关性.结论:MDM4的表达与P53基因异常关系密切,与Binet分期和ATM基因缺失相关,MDM4可能在CLL的预后中具有重要价值.

  • 骨髓增生异常综合征患者间充质干细胞SDF-1基因的表达

    作者:张翼鷟;达万明

    本研究探讨骨髓基质细胞衍生因子-1(SDF-1)在骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓间充质干细胞(MSC)中的表达水平.采集MDS的骨髓标本,分离、培养和扩增MSC,观察细胞形态并进行表型鉴定;以实时定量RT-PCR法检测间充质干细胞SDF-1基因和内参照磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因的表达水平,并与健康供者的表达水平相比较.结果发现,MDS患者骨髓间充质干细胞SDF-1基因的表达水平经GAPDH校正后为1.53±0.92,与对照组(5.51±0.99)相比差异非常显著(P<0.01).结论:SDF-1基因在MDS患者骨髓间充质干细胞中的表达显著升高,SDF-1基因的异常表达可能影响MDS患者骨髓微环境的造血调控作用,是否可对MDS的发病机制及治疗提供新的思路值得进一步探讨.

  • 用裂解法获得有核细胞进行实时定量RT-PCR的可行性研究

    作者:李玲娣;秦亚溱;李金兰;刘艳荣

    本研究比较裂解法获得的有核细胞与分层法获得的单个核细胞进行实时定量RT-PCR(RQ-PCR)的结果之间是否存在差异性.14例白血病患者(AML-M2 7例,APL 1例,AML M4 Eo 1例,AML M4 1例,AML M6 1例,CML3例)的骨髓标本,分别分成两等份,并分别采用分层法和裂解法获得细胞提取RNA进行实时定量RT-PCR,均检测ABL内参基因,并分别检测3份BCR-ABL(P210)、6份AML-ETO、1份CBFβ-MHY11、5份WT1及6份PRAME mRNA水平.结果显示:①28份样本ABL的拷贝数均>3×104,14对标本之间的内参基因ABL拷贝数没有显著性差异(p>0.05),因此两种方法均能保证RQ-PCR足够的敏感性.②14对标本检测的各目的基因mRNA水平亦没有显著性差异(p>0.05),说明两种方法终得到的mRNA表达水平基本一致,对RQ-PCR结果没有影响.结论:采用裂解法获得有核细胞提取RNA是一种可行的方法,适用于同时提取大量标本RNA并进行RQ-PCR测定白血病特异基因的临床常规检测中.

  • 实时定量PCR技术在转基因肿瘤细胞株筛选中的应用

    作者:胡绍燕;陈子兴;赵晔;顾伟英;岑建农;钱军

    为了探讨实时定量RT-PCR技术用于筛选转基因细胞株的可行性,以转染RbAp46基因的细胞株为研究对象,利用优化的SYBR Green I染料实时定量PCR技术检测RbAp46基因的的表达水平,并与半定量PCR及Western blot检测结果相比较.结果表明:K562/RbA46中RbAp46N为2064.42±253.47,KA562/CMV中RbAp46N为860.94±291.07;单克隆SHG44/RbAp46的细胞株中RbAp46N为234.46±31.08,多克隆SHG44/RbAp46的细胞株RbAp46N为18.17±5.14,SHG44/CMV为1.46±0.54.与半定量RT-PCR及Western blot检测结果比较,三者之间具有非常好的一致性.结论:实时定量RT-PCR技术可以用于筛选转基因细胞株,与半定量RT-PCR及Western blot检测方法比较,具有简便、快捷、重复性好、灵敏度高且不需要后期处理等优点.

  • 实时定量RT-PCR监测儿童AML患者AML1/ETO融合基因的临床价值

    作者:柳彩凤;刘桂兰;张乐萍;程翼飞;陆爱东;田开功;刘艳荣;秦亚臻

    为了探讨实时定量RT-PCR(real-time RT-PCR)监测儿童AML患者AML1/ETO融合基因的临床价值,筛选出AML1/ETO阳性患儿14例,以连续稀释的AML1/ETO质粒作为标准品建立标准曲线,应用实时定量RT-PCR监测其初治及随访期58份骨髓中AML1/ETO融合基因,用SPSS软件进行统计学分析研究其和临床的关系.结果显示:实时定量RT-PCR监测AML1/ETO基因的敏感度可达10-5,重复性好.12份初治标本的AML1/ETO:GAPDH比值平均为0.648,该比值与骨髓中幼稚细胞数的比值无相关性.微小残留白血病(MRD)定量水平检测发现,化疗1个月时6例患儿AML1/ETO的量无明显下降(高于5×10-2),其中3例早期复发,1例晚期复发;另4例患儿有明显下降(低于10-2),均长期存活.化疗3个月时5例高于5×10-3者中3例复发;另6例低于5×10-3者中1例复发.6个月后持续高于10-3者3例均复发.MRD定量水平动态检测发现,在化疗中MRD持续在高水平(>5×10-3)者4例全部临床复发,复发时间在3个月到半年;4例持续低于10-3,维持在10-4 -10-6,一直处于骨髓缓解期;1例化疗中从10-5上升到10-3,5个月后临床复发.3例持续缓解超过9个月的患儿仍可检测到融合基因,约10-5-10-6.结论:实时定量RT-PCR监测AML1/ETO基因的敏感度高、特异性强、重复性好,大量标本的检测结果可能有临床指导意义.

  • 实时定量PCR检测白血病相关miRNA方法的建立

    作者:朱丹霞;缪扣荣;朱远东;朱华渊;范磊;刘澎;徐卫;李建勇

    本研究建立实时定量PCR(RQ-PCR)技术检测白血病相关miRNA的方法,探讨此方法在定量检测miRNA中的应用价值.通过提取82例慢性淋巴细胞白血病(CLL)、70例急性白血病(AL)患者骨髓或外周血标本总RNA,以cDNA为模板进行10倍梯度系列稀释,分别作miRNA及内参U6 RNA的标准曲线并计算扩增效率;运用ABI7300定量PCR仪进行定量检测;采用SYBR Green荧光染料法、以U6 RNA作为内参照、循环阈值(Ct)比较法进行miRNA表达相对定量分析,以检测CLL患者miR-15a、miR-16-1、miR-29b、miR-181b及AL患者miR-128-1、miR-223、let-7b、miR-155、miR-181a的表达.方法学考核参数包括特异性、线性范围、精密度和重复性.结果表明:RQ-PCR检测miRNA仅需10-50 ng总RNA样本,检测下限为0.05 ng,miRNA及U6的Ct值均在15-30之间,10倍系列稀释法制作的标准曲线呈现良好的线性关系(R2>0.980),扩增效率均在0.9以上,溶解曲线均为单峰,PCR产物经琼脂糖电泳均显示较亮的目的条带,批内差和批间差分别小于4.8%和6.3%.结论:RQ-PCR技术检测白血病相关miRNA敏感、快速,高通量,节约成本,定量范围宽,极大的方便了对miRNA的定量研究.

  • 脐血CD34+细胞体外扩增时HOXB4基因表达的变化

    作者:唐宇宏;费小明;沈文怡;缪扣荣;崔毓桂;汪承亚

    同源盒基因家族成员HOXB4反映原始造血干/祖细胞(PHSC/PHPC)的自我更新和增殖能力.本研究采用实时定量RT-PCR的方法在mRNA水平上检测HOXB4基因的表达,以观察体外扩增脐血CD34+细胞自我更新的水平.结果显示:随着体外培养时间的延长,虽然CD34+细胞数增加,但HOXB4表达下降;周后,HOXB4几乎检测不到,与成熟外周血淋巴细胞表达HOXB4的水平相同;CD34+细胞与骨髓间充质干细胞(BM-MSC)共培养可以减缓CD34+细胞HOXB4表达的下降.结论:脐血CD34+细胞体外扩增过程中自我更新能力逐渐下降.CD34+与BM-MSC共培养有助于减缓体外扩增的CD34+细胞自我更新能力的丧失.

  • 骨髓增生异常综合征患者人端粒酶逆转录酶和survivin基因的表达

    作者:焦雪丽;陈子兴;岑建农;何军;邱桥成;刘丹丹;陈文明

    本研究探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)和凋亡抑制因子survivin的表达及它们之间的关系.以普通RT-PCR方法检测56例MDS患者和27例缺铁性贫血患者骨髓端粒酶逆转录酶hTERT mRNA的表达,以应用Taqman探针的实时定量RT-PCR方法检测55例MDS患者和12例缺铁性贫血患者骨髓survivin mRNA的表达,分析它们在MDS中的表达水平及相互关系.结果表明:RA患者及RAEB患者hTERT的阳性率均显著高于对照组,差异有统计学意义(p<0.005);随着病情的改善,RA患者hTERT表达率下降,与对照组相比无明显差异(P>0.10);按IPSS危险度分组,低危+中危-1组hTERT的表达与中危-2+高危组相比无明显差异(P>0.50);RA患者survivin的表达均明显高于对照组,差异有显著性(P<0.02),而RAEB患者survivin的表达与对照组相比无明显差异(P>0.05);按IPSS危险度分析,低危+中危-1组survivin的表达明显高于对照组,差别有显著性(P<0.02).中危-2+高危组survivin的表达与对照组无明显差异(P>0.10).结论:端粒酶逆转录酶hTERT和凋亡抑制因子survivin可能在MDS恶性克隆细胞逃脱凋亡控制、获得无限增殖能力的过程中发挥作用.

  • 实时定量荧光PCR检测白血病融合基因

    作者:李晓进;喻镁佳;梁洋;何迪;李斌;胡杰;陈琪;李惠民

    本研究旨在建立实时定量荧光PCR的方法并检测CML、ALL、APL患者中融合基因的拷贝数,观察患者体内融合基因转录水平的变化.构建质粒标准品,制作标准曲线.检测49例患者的骨髓及外周血标本130份,对个别患者连续监测融合基因转录表达水平.结果表明:在82.4%(28/34)的CML患者中检测到BCR-ABLP210.阳性(BCR-ABLP210./ABL比值为0.01~3.19),其中在1例CML急淋变患者检测到BCR-ABLP210和BCR-ABLP190双阳性;在66.7%(4/6)的ALL患者中检测到BCR-ABL阳性,其中2例BCR-ABLP210阳性,2例BCR-ABLP190阳性;在77.8%(7/9)的APL患者中检测到PML-RARa融合基因阳性(PML-RARa/ABL比值为0.0014~3.199),其中3例为长型,3例为短型,1例为变异型,检测结果为阴性的患者处于缓解期;连续监测患者融合基因转录表达水平与临床缓解和复发的变化情况相吻合.结论:实时定量荧光PCR技术成熟、操作简便,检测白血病融合基因结果准确稳定,对于临床明确诊断、具体分型、动态观测肿瘤负荷、选择治疗方案、评估治疗效果和预后都有较大价值,值得推广应用.

  • 实时荧光定量RT-PCR检测良性前列腺增生与前列腺癌相关基因表达的临床意义

    作者:钟惟德;李俊玲;何慧婵;江福能;刘文华;毕学成;彭志强;刘良式;魏鸿蔼

    目的应用实时荧光定量RT-PCR检测良性前列腺增生(BPH)与前列腺癌相关基因表达. 方法通过实时荧光定量RT-PCR对9个前列腺癌相关基因(KLK3、KLK2、KLK11,pim-1,hepsin,PSMA,AR,p27,IGF-1)在前列腺正常组织、BPH组织和癌组织(PCa)定量表达,分析其特异性的差异.结果检测9个选定相关基因中发现KLK2,pim-1,AR和IGF-1在这3种组织中的表达差异有统计学意义(P<0.01).结论KLK2,pim-1,AR和IGF-1作为前列腺癌组织特异性的分子标记物组合,有望提高前列腺癌早期诊断的准确性.

  • 新辅助化疗前后乳腺癌患者外周血细胞角蛋白19表达变化及其临床意义

    作者:毛莹;邹天宁;杨庄青;张季

    目的 探讨细胞角蛋白(CK)19在乳腺癌新辅助化疗前后表达的变化及其临床意义.方法采用实时定量RT-PCR技术检测86例乳腺癌患者新辅助化疗前后外周血CK19 mRNA的表达变化,将30例乳腺良性疾病患者和20例健康体检志愿者作为对照.对非正态分布或方差不齐的数据采用Wilcoxon非参数秩和检验,用中位数±百分位数之差[M(QR)]表示,计数资料组间采用χ2检验.结果 新辅助化疗前乳腺癌患者外周血中CK19 mRNA阳性表达率为32.56%(28/86),与腋窝淋巴结转移、临床分期有关(分别P<0.001);而新辅助化疗后阳性表达率为13.95%(12/86),化疗前后CK19 mRNA表达差异具有统计学意义(P=0.004);新辅助化疗后CK19 mRNA阳性表达的患者中,57.14%(16/28)获得临床完全缓解成部分缓解,低于CK19 mRNA阴性患者的93.10%(54/58),差异有统计学意义(P<0.001),这提示CK19 mNRA表达水平变化可能与新辅助化疗疗效有关.结论 CK19可作为新辅助化疗疗效判定的早期预测指标之一.

  • 航天环境对拟南芥幼苗内参基因表达稳定性的影响

    作者:李华盛;鹿金颖;潘毅;刘敏

    目的 筛选在航天环境下表达稳定的拟南芥幼苗内参基因.方法 “神舟”8号飞船搭载拟南芥幼苗,设置3个试验处理:1)空间飞行处理(F ug);2)空间飞行+1g离心力处理(F1g);3)地面对照(G1g).样品返回后,提取总RNA,通过实时定量RT-PCR的方法,利用geNorm软件分析8个内参基因:ACT8,EF1α,eIF4A,YLS8,UBQ5,ACT2,TIP41和UBC8.结果 三个处理中,内参基因表达的稳定性如下:TIP41=UBC>ACT2>UBQ5>YLS8>eIF4A>EF1α >ACT8,其中ACT2,TIP41和UBC的M值小于0.5.结论 利用qRT-PCR分析比较太空中拟南芥幼苗基因表达差异时,ACT2,TIP41和UBC可作为内参基因.

  • 3个S100A基因在胃癌及其正常黏膜中表达的QRT-PCR检测

    作者:黄海力;吴本俨;朱旭东;尤纬缔;王孟薇

    目的 比较S100A2、S100A4、S100A6基因在胃癌及其对应正常黏膜中的表达情况.方法 应用实时定量RT-PCR构建上述3个基因的定量扩增标准曲线,精确定量3个基因在20例配对胃癌中的表达丰度并分析它们与胃癌的相关性.结果 S100A2、S100A4、S100A6基因相对于β2微球蛋白(β2-MG)基因的表达丰度分别为2.83×10-4、6.44×10-2、0.41,3个基因在胃癌中表达均升高,升高倍数分别为10.78、2.31和2.25倍.与正常黏膜比较,S100A2、S100A6表达显著升高(P<0.05).Spearman分析显示,S100A2与S10A4、S100A2与S100A6基因表达之间呈正相关(P值分别为0.00和0.017).结论 S100A2、S100A6基因表达变化可能是胃癌的早期事件,S100A4基因则可能与胃癌的浸润密切相关.

  • X射线全身照射诱导小鼠胸腺Egr-1和Egr-4基因表达水平的实时定量RT-PCR分析

    作者:武宁;刘丽波;张萱;金顺子;倪冠英;刘宇光;刘树铮

    目的 应用实时定量RT-PCR技术检测X射线伞身照射诱导小鼠胸腺Egr-1和Egr-4基因的表达变化.方法 小鼠接受X射线全身照射后4和24 h,提取胸腺mRNA,以GAPDH作为内参基因,利用实时定量RT-PeR检测方法,探讨Egr-1和Egr-4基因的相对表达量与不同照射剂量之间的关系.同时计数骨髓嗜多染红细胞微核率作为辐射生物剂量参照.结果 Egr-l和Egr-4基因表达量在0.5~6 Gy全身照射后4和24 h均与照射剂量之间存在显著的相关性(r=0.974,0.987,0.978,0.999,P<0.01),其剂量效应曲线可拟合成线性平方方程.各剂量点Egr-1和Egr-4基因表达量与骨髓嗜多染红细胞微核率高度相关(r=0.866、0.947、0.983、0.835,P<0.05).进一步分析表明,照射后4 h Egr-4基因表达不仅剂量效应关系良好,且增幅为明显,并与骨髓嗜多染红细胞微核率的剂量效应曲线相平行.结论 实时定量RT-PCR技术检测Egr-4基因的早期表达有可能成为建立大批量、快速辐射生物剂量估算方法的候选者.

  • 利用荧光定量聚合酶链反应检测小鼠纹状体中Per1基因的表达规律

    作者:蔡彦宁;左晓虹;刘姝;谢淑;温玫;陈彪

    目的建立定量检测Per1 mRNA表达水平的系统,并检测小鼠纹状体中该基因的表达规律.方法提取小鼠纹状体总RNA,用Per1基因特异性引物进行聚合酶链反应(PCR),以荧光染料SYBR green I法进行实时检测.结果确定了Per1基因荧光定量的扩增和检测参数.证明在此条件下无非特异扩增,并且扩增效率在90%以上.利用此检测体系发现小鼠纹状体内Per1基因的表达呈节律性波动.结论所建立的方法能够定量测定Per1 mRNA表达水平,具有灵敏度高,线性范围广的特点.纹状体中Per1基因表达的节律性波动提示黑质纹状体系统间的相互调节可能具有昼夜节律性差异.

  • miR-92在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义

    作者:胡萍;彭蔚;吴名桃;刘婷

    目的 探讨miR-92在上皮性卵巢癌组织中的表达及临床意义.方法 选取2007年1月~2017年12月我院收治的300例各期上皮性卵巢癌患者、300例上皮性卵巢良性肿瘤患者以及300例因生殖器官(除卵巢外)良性病变而行单侧或双侧卵巢切除患者作为研究对象,采用实时荧光定量检测法检测三组患者术后卵巢癌癌组织、卵巢良性肿瘤组织及正常卵巢组织中miR-92的表达水平.结果 卵巢癌组患者的miR-92水平高于卵巢良性肿瘤组及正常卵巢组,差异有统计学意义(P<0.05).卵巢癌组的miR-92水平与淋巴结转移、临床分期以及肿瘤分化程度有关(P<0.05).结论 miR-92表达水平可作为上皮性卵巢癌的临床诊断依据.

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