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脐血干细胞移植
造血干细胞移植是利用造血干细胞自我复制、定向分化、自动定植的特性,在患者经过超大剂量的放化疗等治疗后,回输干细胞,完成患者造血重建的一种先进的血液学治疗方法.该方法目前已经广泛地应用于各种血液系统恶性疾病、对化疗敏感的实体肿瘤,特别对于恶性肿瘤,是目前国内外学者公认的彻底、有前途的治疗方法.
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细胞因子在造血系统疾病中的临床应用细胞因子对造血功能的调控
造血是一个包括细胞新生、分化及成熟的极其复杂的过程,经历多能造血干细胞定向分化成祖细胞,进一步分化成定向细胞系和进行终末分化成熟为成熟血细胞.造血干细胞是造血组织中能产生各种类型血细胞又能自我更新的细胞,约占骨髓有核细胞中0.05%,99%以上处于静止期(细胞周期G0期).
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骨髓干细胞移植诱导肝细胞再生的研究进展
终末期肝病一直是临床治疗的难题,近年来肝移植的广泛开展为此病的治疗提供了光明的前景,但由于供体器官紧缺、费用昂贵以及移植后的并发症等问题,使临床应用受到很大限制.随着对干细胞研究的逐步深入,已证实干细胞具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能,而且能够分化为神经细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞等多种组织细胞,在肝脏严重受损、肝细胞增殖受抑制时,骨髓干细胞还具有定向分化为肝前体细胞、肝细胞、胆管上皮细胞的能力,并可能提供即时有效的肝功能,为宿主肝脏再生恢复赢得时间.
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牛胚胎干细胞分离克隆及定向分化研究
胚胎干(embryonic stem, ES)细胞自Evans和Kanfman(1981)首次从小鼠胚胎中分离到后,胚胎干细胞技术一度成为各国学者研究的热点.ES细胞是自附置前早期胚胎或附置后胚胎原始生殖细胞分离克隆的一种具有自我更新和全向分化潜能的细胞,其具有与胚胎细胞相似的形态特征及分化潜能,同时又可以在体外进行培养、扩增、转化、筛选和冻存.它为克隆治疗以及深入研究基因结构与功能、胚胎发育、各种遗传病模型以及克隆动物和转基因动物等提供了新型实验材料.ES细胞在发育生物学基础研究、组织工程研究、临床医学等方面具有诱人的应用前景和重要的科学意义.本研究以牛为实验材料,探讨影响牛ES细胞分离克隆的因素,完善牛ES细胞的分离克隆程序,为人类ES细胞的研究提供相关的技术参数,主要取得了如下几方面的成果.
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中药体外诱导干细胞定向分化的实验研究进展
干细胞(stem cell,SC)是指具有自我更新、高度增生、自我复制以及多分化潜能的早期未分化细胞,它能产生出表型与基因型完全相同的子细胞,是机体其他细胞的起源.
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骨髓间充质干细胞在细胞治疗中的若干问题
骨髓间充质干细胞是骨髓造血微环境的重要组分,其首要作用在于支持造血,此外它还具有干细胞的特性,即自我更新和多向分化的潜能.因此,这种细胞将有可能用于联合造血干细胞移植以提高造血干细胞移植成功率和作为组织工程学的种子用于修复受损或有遗传缺陷的组织和器官,如骨发育不全和心肌梗死后的心肌等.然而,其分离方法很粗糙,还没有一个令人满意的分离和鉴定的方法,这是制约其用于细胞和基因治疗的重要因素.另外,弄清在分化过程中基因表达的调节机制,有利于体外控制这种干细胞的定向分化.后,间充质干细胞回巢到骨髓或其他组织是成功进行细胞治疗的关键所在.
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人骨髓间充质干细胞在体外向成骨细胞定向分化的研究分析
目的:探讨人骨髓间充质干细胞在体外向成骨细胞定向分化情况。方法取引产胎儿的人骨髓间充质干细胞进行原代细胞培养,诱导培养向成骨细胞分化,诱导后进行形态学观察,碱性磷酸酶( ALP)染色与生长曲线测定。当人骨髓间充质干细胞培养生长密度为80.0%左右时分为转染组与对照组,对照组不进行转染,转染组常规进行转染。结果原代细胞生长2h开始贴壁,培养4d左右胞体逐渐变得粗大。经成骨诱导后细胞形态由长梭形逐渐变为多边形,形成细胞结节甚至团块状。转染组的胎儿骨髓间质干细胞和未转染对照组的生长状况对比差异无统计学意义( P>0.05),转染细胞与未转染细胞倍增时间分别为(23±4) h和(25±4) h。转染组在转染后第3、6、9、12日的ALP活性均明显高于对照组[(0.12±0.02)%比(0.10±0.02)%,(0.16±0.02)%比(0.12±0.02)%,(0.20±0.03)%比(0.13±0.02)%,(0.23±0.04)%比(0.14±0.02)%],差异有统计学意义( P<0.01)。结论胎儿骨髓间充质干细胞在成骨细胞分化转染的诱导下可促进向成骨细胞进行定向分化,为胎儿间质干细胞分化调控和药物作用机制研究奠定基础。
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胃肠道间质瘤20例分析
胃肠道间质瘤(GIST)是起源于胃肠道间质的星形胶质细胞,有着特殊的免疫表型及组织学特点,可以向平滑肌、神经分化或不定向分化的一种具有恶性潜能的胃肠道黏膜下肿瘤,是临床上较为少见的低度恶性肿瘤.笔者对我院自1998年1月至2008年1月期间20例被确诊的 GIST患者的临床资料进行回顾性总结,并结合文献对本病的诊治情况进行分析,报道如下:
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多能干细胞向血管平滑肌细胞定向分化的研究进展
1 前言干细胞(stem cells,SC)是指一类具有自我复制能力,同时也可以分化为特定组织的多潜能细胞.根据SC所处发育阶段的不同,可以分为胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)和成体干细胞(somatic stem cells,SSCs);根据干细胞发育潜能的不同,又可以分为全能干细胞(totipotentstem cells,TSCs)、多能干细胞(pluripotentstem cells,PSCs)和单能干细胞(unipotent stemcells,USCs).
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基因调控表达技术的建立及在多潜能造血干/祖细胞扩增调控中的应用
干细胞是一种原始多潜能的细胞,具有自我更新和定向分化的基本特征.为了克服干细胞数量少的不足,众多学者已经在积极探索干细胞的扩增方法.目前国内外采用不同细胞因子的组合方案来进行干细胞的扩增,但其扩增的结果存在很多问题,主要体现在:扩增的时间短,倍数低,扩增体系难于调控,扩增后的干细胞自我更新能力,可塑性及造血重建的功能均较扩增前下降.
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干细胞循环及其潜在应用前景
干细胞(stem cell)是胚胎发育过程中产生的或在个体成长中存留的一些能无限自我更新(self-renewing)并同时又能定向分化生成一系列组织的原始细胞.目前,据其来源分为胚胎干细胞和成体干细胞;按其分化能力分为全能干细胞(totipotent stem cell, TSC)和多能干细胞(multipotent stem cell, MSC).一般认为胚胎干细胞为全能干细胞,而成体干细胞则多为多能干细胞.而近年来发现成年动物体内几乎所有的组织都存在成体干细胞,并表现有跨胚层多系分化,甚至一个成体细胞可以重建一个完整的系统或个体,这一系列现象打破了细胞分化发育的定向性和不可逆性这一传统观念,并极大地拓展了干细胞的概念,使人们开始从宏观角度思索干细胞作为一个特殊细胞群体的生物学行为及生物学意义.
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转导JAK2基因可促进原始多能造血细胞在体外的长期扩增
目的探讨激活JAK2信号通路是否能够长期扩增调控造血干祖细胞并评价扩增细胞的定向分化潜能.方法构建克隆1个含有JAK2基因和二聚化化学诱导物(AP20187)结合位点所组成的逆转录病毒载体.AP20187可以使JAK2二聚化激活细胞内信号传导.将该载体转入小鼠原始骨髓造血细胞,在无血清培养基中,将JAK2转基因的细胞分为:①空白对照组,②AP20187组,③细胞因子联合组[干细胞因子(SCF)+Flt3-配体(Flt3-L)],④AP20187+ SCF+ Flt3-L组.对扩增的细胞进行免疫表型、定向分化、造血祖细胞集落分析及脾集落形成单位的研究.结果只有AP20187+SCF+Flt3-L组能够使JAK2转基因的骨髓细胞持续大量对数级增殖.约8 d时,细胞数量可以达到扩增前的1019倍.扩增的细胞经流式细胞仪检测为:Sca1阳性细胞为52%~98%,C-kit阳性率为56%~69%,CD34阳性率40%~85%;而其他表型TER119阳性0~20%,CD41阳性5%~36%,B220阳性12%~46%,Gr1阳性6%~17%,CD11b阳性35%~46%,CD3为阴性.扩增细胞在SCF/粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)/白介素(IL)-3条件下,可分化形成明显的粒细胞和巨噬细胞;在SCF/红细胞生成素(EPO)条件下,可分化为红细胞;在SCF/血小板生成素(TPO)/IL-11条件下,可分化为巨核细胞.祖细胞半固体集落培养,可以形成红系爆式集落形成单位(BFU-E)、粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)、混合集落形成单位(CFU-Mix)以及IL-7产生的B淋巴细胞集落,并可在照射过的小鼠体内形成脾集落形成单位.结论 JAK2介导的转基因骨髓造血细胞可以长期扩增调控,扩增的细胞仅限于JAK2转基因的细胞,并且具有多系分化的潜能.
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经Flk1前祖细胞胚胎干细胞分化为内皮细胞的研究
目的 掌握小鼠胚胎干细胞(ESCs)向内皮细胞分化方法,为临床心血管疾病治疗研究的发展奠定基础.方法 分化前检测ESCs自我更新标记分子的表达.单层分化4d检测血管内皮生长因子受体2(Flk1)的表达.分化8d检测血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达,同时于显微镜和透射电镜下观察分化细胞形态.后在血管内皮生长因子(VEGF)诱导组分化2、4、6、8、10d检测八聚体结合转录因子4(Oct4)、Flk1和VE-cadherin的表达.结果 分化前自我更新标记分子的表达结果说明E14细胞具有自我更新能力.分化4d表达Flk1,说明E14细胞分化为中胚层前祖细胞;分化8 d VE-cadherin的表达说明E14细胞分化成为血管内皮细胞.分化8d光镜下观察内皮细胞特征性呈“鹅卵石”样结构非常明显;透射电镜下可观察到韦-帕小体(W-P)小体,以上结果说明E14细胞分化成为内皮细胞.后,对分化用VEGF诱导组分化2、4、6、8、10d的Oct4、Flk1和VE-cadherin表达范围有了掌握.结论 单层分化8d,VE-cadherin的表达说明E14细胞已分化为成熟血管内皮细胞.掌握ESCs向血管内皮细胞定向分化方法为临床心血管疾病治疗研究的发展奠定基础.
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造血干细胞分化相关基因的研究进展
造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)是一群存在于造血组织,且具有自我更新及定向分化潜能的造血细胞,其具体的造血分子机制目前尚未完全明确.随着分子遗传学和分子生物学研究的迅猛发展,许多具有特异性调控造血干细胞功能及与细胞定向分化相关的主要基因被识别和克隆出来,如急性T淋巴细胞白血病/造血干细胞白血病基因(T-cell acute lymphocytic/stem cell leukemia,TALl/SCL)、GATA-2、Hox(homeobox)B4、FIK2、c-mpl、DLK(deha-like)等,它们在造血干细胞生长及定向分化过程中起重要的调节作用.
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红细胞造血过程中因子调控及胞内信号转导
由髓系造血干/祖细胞开始的红细胞造血经历了大约3个阶段,首先是定向分化为红系爆式集落形成单位(BFU-E),然后分化为红系祖细胞集落形成单位(CFU-E),后逐渐成熟,成为形态上可辨认的幼稚红细胞到去核红细胞.该过程受到多种因子调控并伴有复杂的胞内信号转导.现对该方面研究进展综述如下.
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K562细胞定向分化时Bcl-6的表达
Bcl-6(B cell lymphoma 6)是原癌基因bcl-6的表达产物,决定着正常淋巴细胞的发育及淋巴组织生发中心形成[1].近研究表明,Bcl-6还在其它许多正常及肿瘤细胞的增殖、分化过程中发挥着十分重要的生物学功能[2,3].人红白血病细胞株K562具有在不同诱导剂作用下分别向红细胞系、巨核细胞系及巨噬细胞系定向分化的特征[4],是研究白血病细胞分化及其机制的理想细胞系,了解Bcl-6在K562细胞定向分化过程中的表达及功能,对进一步了解白血病的发病机制,揭示Bcl-6新的生物学功能有重要意义.
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胚胎干细胞研究进展
胚胎干细胞来源于着床前的囊胚内细胞团或早期胚胎的原始生殖细胞,是一类未分化的全能性(多能性)干细胞,具有无限增殖和分化潜能.人类胚胎干细胞系的成功建立以及其体外诱导分化为特定细胞、组织甚至器官的研究进展,使其在临床应用中显示出诱人的前景.就胚胎干细胞系的建立、定向分化及临床应用等研究现状作一综述.
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诱导骨髓基质细胞定向分化为软骨细胞的因素
关节软骨损伤后,自身难以修复,久之易导致骨关节退行性变,临床上尚无有效的治疗方法,组织工程学的出现,为软骨修复开辟了一片新的领域."载体"、"诱导因子"、"种子细胞"被称为组织工程的3个要素,合适的种子细胞是软骨修复的重要条件之一,目前组织工程使用的细胞有软骨细胞、骨膜和软骨膜细胞、间充质干细胞及胚胎干细胞等.
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黄芩甙诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的实验研究
目的黄芩甙体外定向诱导SD大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞.方法通过贴壁法分离大鼠骨髓间充质干细胞,体外扩增培养.中药黄芩甙定向诱导分化为类神经元样细胞.光镜下观察细胞形态,免疫细胞化学检测神经细胞特异性抗原标志物神经元烯醇酶(NSE)、巢蛋白(Nestin)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.结果大鼠骨髓间充质干细胞可通过贴壁法成功分离并可在体外大量扩增.黄芩甙诱导5h后大部分骨髓间充质干细胞转变为神经元样细胞,出现胞体和突起,免疫细胞化学染色NSE及Nestin呈阳性,GFAP阴性.结论黄芩甙可在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞.
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骨形成蛋白-2和碱性成纤维细胞生长因子对人骨髓基质细胞的生物学作用
骨髓基质细胞具有多向分化潜能,在特定培养条件下可转化成多种间充质细胞.骨组织工程中为提高成骨效率,必须选择合适的培养条件,以促进骨髓基质细胞繁殖及定向分化为成骨细胞.本实验旨在观察重组人骨形成蛋白-2(recombinant human bone morphogenetic protein,rhBMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b-FGF)分别和联合作用条件下,对人骨髓基质细胞增殖与分化的影响,以期建立一种理想的培养体系.