124 接触低浓度铅儿童尿高香草酸和血清中催乳激素水平的变化

高效毛细管电泳技术同时检测随机尿中香草扁桃酸、高香草酸和肌酐含量

目的 建立高效毛细管电泳技术快速检测随机尿中香草扁桃酸(vanillylmandelic acid,VMA)、高香草酸(homovanillic acid,HVA)和肌酐(creatinine,Cr)的方法.方法 在毛细管区带电泳模式下,以120 mmol/L NaH_2PO_4-Na_2HPO_4(pH值6.80)为缓冲液,在非涂层石英毛细管(47 cm×75μm内径)中进行电泳.样品离心后直接稀释压力进样4 s,20 kV电压分离后通过二极管阵列检测器(DAD)检测(λ=200 nm).对该法进行系统的方法学评价后,测定健康成人及儿童随机尿标本各100份,建立成人与儿童尿VMA/Cr、HVA/Cr参考值.结果尿中VMA、HVA和Cr在13 min内出峰.VMA、HVA和Cr分别在0～500、0～500、0～4 000 μmol/L范围内呈良好的线性,相关系数(r)在0.997 2～0.999 1之间(P<0.01),检出限(S/N=3)分别为1.0、1.0和50.0 μmol/L.尿中VMA、HVA和Cr迁移时间的平均批内(n=10)变异系数(CV)分别为0.58%、0.56%和0.25%,平均批间(n=10)CV分别为0.95%、1.00%和0.48%;峰面积的平均批内(n=10)CV分别为3.78%、3.97%和2.76%,平均批间(n=10)CV分别为4.60%、4.08%和4.42%.VMA、HVA和Cr平均回收率分别为98.36%、93.56%和98.85%.儿茶酚胺、5-羟色胺和清蛋白等对测定结果无干扰.该法与HPLC法有较好的相关性,VMA、HVA浓度的相关系数(r)分别为0.954 9(P<0.01)和0.945 1(P<0.01).健康成人与儿童随机尿标本的VMA/Cr、HVA/Cr比值均呈偏态分布(n=100),以百分位数法建立其95%参考值,成人VMA/Cr、HVA/Cr分别为0～4.26和0～1.69(μmol/mmol),儿童VMA/Cr、HVA/Cr分别为0～10.39和0～4.31(μmol/mmol).结论 该法可同时检测随机尿中VMA、HVA和Cr,样品用量少,且稀释后直接进样,操作简便、快速,准确度和精密度高,易于自动化,是尿液VMA、HVA常规检测及相关疾病筛查的理想方法.

利培酮对精神分裂症患者血浆高香草酸的影响

目的探讨利培酮对精神分裂症患者中枢多巴胺代谢产物血浆高香草酸(pHVA)的影响.方法30例精神分裂症住院患者(患者组)纳入研究,利培酮治疗平均剂量为(3.2±1.1)mg/d,共观察6周.以阳性和阴性症状量表(PANSS)评定疗效,以高效液相库仑阵列电化学检测法测定患者治疗前后的pHVA含量.30例健康志愿者作为对照组,检测pHVA水平.结果(1)患者组治疗前pHVA含量[(7.9±4.0)μg/L]与对照组含量[(8.8±4.1)μg/L]的差异无显著性(P＞0.05),而患者组治疗后pHVA含量[(5.3±2.7)μg/L]明显低于治疗前(P＜0.01);(2)治疗前患者组pHVA与PANSS阳性症状评分[(20.7±4.1)分]存在正相关(r=0.39,P＜0.001),与基线PANSS阴性症状评分[(19.7±5.1)分]存在负相关(r=-0.35,P＜0.01);(3)基础pHVA含量及其治疗前后差值[(2.6±1.3)μg/L]与PANSS阳性症状评分减分值[(10.8±4.1)分]均分别呈正相关(r=0.48,P＜0.01;r=0.60,P＜0.001).结论患者组治疗前pHVA可部分反映精神分裂症症状(尤其是阳性症状)的严重程度,基础pHVA含量及治疗前后pHVA水平的变化与利培酮治疗阳性症状的疗效相关.

力量训练对游泳运动员单胺类神经递质代谢物的影响

目的:观察不同类型的力量训练对运动员机体内单胺类神经递质代谢物的作用,并探讨其机制,从而在无创性尿液神经递质代谢指标方面为运动训练监控提供部分科学理论依据.方法:选择北京市参加全运会的一线男子游泳运动员6名进行3个阶段(大力量期、专项力量期和爆发力量期)的力量训练.取力量训练周期前、3个阶段力量训练期内第1次训练课后以及3个阶段力量训练期结束后24小时全尿,测量其尿肌酐及单胺类神经递质代谢物水平.结果:一次性力量训练课后的24h尿体积均显著降低(P＜0.05),而尿肌酐水平均无变化;与训练前的安静值相比,3种力量训练的一次性力量训练后尿液中香草扁桃酸(VMA)与高香草酸(HVA)均有不同程度的升高,其中大力量训练期提高水平多,专项力量期次之,爆发力量期低;而一次性力量训练后尿液中的5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)均未有显著变化;长期力量训练后受试者安静态24小时的尿体积和尿肌酐水平均无显著变化.与训练前安静值相比,长期力量训练后安静态24小时尿VMA、HVA、5-HIAA的水平均无显著变化.结论:一次性力量训练可促进尿液VMA和HVA浓度升高,提示机体儿茶酚胺(CA)的代谢水平增强,并且训练强度越大促进的效果越明显;一次性力量训练对5-HIAA代谢没有影响,提示机体5-HT的代谢水平未受影响;而长期的力量训练对尿液中单胺类神经递质代谢物的水平没有影响.

高效液相色谱—电化学法测定尿液中单胺类神经递质代谢物含量

目的:建立快速、准确测定人体尿液中香草扁桃酸(VMA)、高香草酸(HVA)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)的高效液相色谱-电化学法,为实施无创性采样运动训练监控研究提供新的实验室检测手段.方法:采用ISO-3100高效液相色谱仪系统,BM钛系统泵、WPS 3000自动进样器、WAX-1阴离子交换色谱柱(3 μm,3×150 mm),5011A双通道库仑电化学检测器；流动相由20 mmol/L磷酸缓冲盐配制成盐溶液并调节pH值=5,然后与乙腈分别按照75∶20(v/v)和80∶25 (v/v)配制成流动相A和流动相B,超声20 min后使用.流速为0.4 ml/min,进样量为5μl.检测器采用E1=100 mV和E2=500 mV两种电势条件.采用以上色谱条件分别测定标准品和成年人24 h尿样的VMA、HVA、5-HIAA含量,并进行统计和分析.结果:VMA、HVA、5-HIAA的线性关系分别为v=55.387x-0.2327(r=0.9998),y=55.31x+0.3247(r=0.9996),y=59.752x-0.1938(r=0.9987);低检测限分别为5 ng/ml、5 ng/ml和7 ng/ml;批内变异系数(CV)分别为2.7％、2.4％、1.6％,批间变异系数分别为3.2％、3.1％、4.1％；所测成年人24h尿的VMA、HVA和5-HIAA含量分别为(1.65±0.08)mg/day、(2.67±0.24)mg/day、(1.79±0.13)mg/day,均分别符合正常成年人24 h尿中VMA、HVA、5-HIAA的水平.结论:本研究所采用的新型WAX阴离子交换色谱柱特异性好,对阴离子化合物的分离效果显著.本方法测定结果良好,线性关系、精密度以及检测限均满足定量要求,值得在研究中推广使用.

回生再造丸对帕金森病模型大鼠的影响

目的:探讨回生再造丸对帕金森病模型大鼠的影响.方法:通过向大鼠左侧黑质致密部(SNc)和中脑腹侧背盖区(VTA)纹状体两点注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)的方法制作帕金森病大鼠模型,通过灌胃给药,连续3周,探讨回生再造丸高、中、低剂量(1.4,0.7,0.35g·kg-1)对帕金森病大鼠的影响;旋转行为通过计数30 min内大鼠的旋转圈数测定;DA,HVA,MAO-B,AchE和GSH-px含量分别由其试剂金测定.结果:回生再造丸可减少阿朴吗啡引起帕金森病大鼠30min内的旋转圈数,降低损伤侧脑组织中的MAO-B活性,提高DA,HVA和AchE含量,但GSH-px含量无统计学差异.结论:回生再造丸对帕金森病模型大鼠具有一定的治疗作用.

钩藤碱对脑缺血大鼠纹状体及海马单胺类递质含量的影响

目的探索钩藤碱对大鼠脑缺血损伤的机制。方法采用大鼠大脑中动脉缺血模型，利用微透析方法收集正常及脑缺血后不同时间点纹状体和海马细胞外液(透析液)。经反相高效液相电化学法检测其单胺类神经递质含量的变化。结果大鼠脑缺血后纹状体和海马细胞外液中5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、3，4-二羟苯酰乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)含量下降，去甲肾上腺素(NE)含量上升，钩藤碱能升高脑缺血后细胞外液5-HIAA，DOPAC和HVA的含量，降低NE的含量。结论钩藤碱能调节脑缺血大鼠纹状体内和海马单胺类神经递质及代谢物的含量。

苔黑酚葡萄糖苷对抗甲基苯丙胺诱导的小鼠焦虑样行为研究

目的:探讨苔黑酚葡萄糖苷(Orcinol Glucoside,OG)对甲基苯丙胺(Methamphetamine,MA)引起的焦虑样行为的影响以及对海马区多巴胺、高香草酸、5-羟色胺、5-羟吲哚乙酸的影响.方法:通过高架十字迷宫实验研究OG对MA(1 mg/kg)诱导的焦虑样行为影响;通过小鼠自发活动实验观察OG对MA诱发的小鼠高活动量的影响;采用高效液相质谱联用技术检测小鼠脑内多巴胺和5-羟色胺及其代谢物含量.结果:OG能够显著性增加MA处理小鼠进入高架十字迷宫开放臂时间,降低MA小鼠的自发活动;神经化学检测发现MA组小鼠脑内海马区多巴胺、5-羟色胺及高香草酸含量明显增加;而OG能够显著性降低MA小鼠脑内高香草酸含量,同时有降低MA诱导的多巴胺及5-羟色胺水平增加的趋势.结论:OG能够有效减轻MA引起的焦虑样行为,且对MA导致的脑内高香草酸水平有回调作用,可作为对抗MA精神症状的潜在治疗药物.

紫红獐牙菜(咄)酮提取物对MPTP所致的帕金森小鼠的神经保护作用

紫红獐牙菜提取物是一种应用广泛的中国传统中药,其抗乙型肝炎病毒,保肝,降低血糖等作用已经被报道.在本研究中,我们发现紫红獐牙菜(咄)酮提取物可以改善1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森(PD)小鼠的运动功能障碍.此外,我们还发现该提取物能够提高纹状体中多巴胺(DA)和高香草酸(HVA)的含量,缓解由于MPTP导致的黑质致密区的酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元的缺失.这些结果表明,紫红獐牙菜(咄)酮提取物具有对抗MPTP神经毒素的神经保护作用,有望成为一个潜在的治疗帕金森病的药物.

醒脾开郁方对抑郁症大鼠模型的中枢单胺类递质的影响

目的研究醒脾开郁方对抑郁症大鼠模型海马及皮层的单胺类递质的影响.方法结合分养及慢性不可预见性应激的方法造成大鼠抑郁模型,应用高效液相色谱-电化学检测器观察大鼠海马及皮层单胺类递质和其代谢产物的变化,以探讨醒脾开郁方抗抑郁的机制.结果模型组大鼠海马及皮层5-羟色胺(5-HT)含量明显低于正常组,海马3,4二羟基苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA) 、DOPAC/多巴胺(DA)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)/5-羟色胺(5-HT)及皮层5-HIAA/5-HT均明显高于正常组.醒脾开郁方可明显升高慢性应激抑郁模型大鼠海马及皮层5-HT,降低海马DOPAC、HVA含量,并降低海马 DOPAC/DA 、5-HIAA/5-HT和皮层5-HIAA/5-HT.结论提示醒脾开郁方通过降低海马和皮层5-HT及DA的代谢,相对升高海马5-HT、DA及皮层5-HT含量而发挥抗抑郁作用.

尿中高香草酸和香草扁桃酸的高效液相色谱测定法

目的 建立一种能同时测定人尿液中高香草酸和香草扁桃酸含量的高效液相色谱荧光检测方法.方法 尿样经0.45 μm滤膜过滤后直接进样,经ODS色谱柱(250mm×4.6mm,5.0μm)室温分离,以甲醇-0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(体积比为20:80)为流动相,流量为1 ml/min,进样量为10μl,激发波长为277 nm,发射波长为320 nm.结果 分离测定过程在15 min之内完成,香草扁桃酸、高香草酸保留时间分别为3.18、6.72 min.高香草酸检出限为0.15 μg/ml.线性范围为0～25μg/ml,加标回收率为84.53%～106.1%,相对标准偏差<3.44%.香草扁桃酸检出限为0.13 μg/ml,线性范围为0～20μg/ml,加标回收率为94.66%～107.3%,相对标准偏差<2.16%.结论 该方法各项指标均达到<生物材料分析方法的研制准则>的要求,能准确测定尿液中高香草酸和香草扁桃酸的含量.

尿中高香草酸和香草扁桃酸测定的高效液相色谱-串联质谱法

目的 建立尿中高香草酸和香草扁桃酸测定的高效液相色谱-串联质谱(HPLC/MS/MS)法.方法 取尿样200μl置于离心管中,分别加入20μl氯唑沙宗内标,混匀后加入100μl甲醇(含1％乙酸),涡旋震荡1 min,13 000 r/min(半径8.2 cm)离心5 min,提取上清后,取10μl进样,利用HPLC/MS/MS法对高香草酸和香草扁桃酸进行定性定量分析.结果 该方法测定高香草酸和香草扁桃酸的线性范围分别为20～10 000和20～7 500 ng/ml,相关系数分别为0.995 6和0.997 0,检出限分别为4.69和2.33 ng/ml,回收率分别为85.72％～ 117.95％和95.82％～113.78％.结论 该方法操作简便、快速、准确、灵敏度高,可满足尿中高香草酸和香草扁桃酸测定的要求.

尿液中四种生物胺代谢物同时测定的高效液相色谱法

目的 建立能同时测定尿液中香草扁桃酸(VMA)、5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、3,4-二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)4种生物胺代谢物的高效液相色谱法.方法 尿样经0.45 μm过滤头过滤后直接进样,采用C18色谱柱分离,荧光检测器检测,波长:EX 280 nm,EM 315 nm,以甲醇-0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(体积比20:80)为流动相,流速为1.0 ml/min,进样体积为20 μl.结果 该方法测定VMA、5-HIAA、DOPAC、HVA 4种物质线性范围分别为0～2.5、0～2.0、0～2.0、0～2.5 μg/ml；相关系数分别为0.999 9、0.999 8、0.999 7和0.999 9；低检出浓度分别为0.006、0.008、0.001 2和0.008 2 μg/ml;平均精密度分别为4.2％、3.7％、4.9％和3.6％；回收率分别为91％～102％、93％～101％、94％～101％、89％～102％.结论 该方法简便、高效、准确,适用于尿液VMA、5-HIAA、DOPAC、HVA含量的同时测定.

BDNF基因工程细胞对帕金森大鼠纹状体多巴胺及其代谢物影响的研究

目的:观察经侧脑室移植pIRESneo-EGFP-BDNF修饰骨髓间充质干细胞(MSCs)对帕金森病(PD)大鼠纹状体多巴胺(DA)及代谢产物的影响.方法:采用电穿孔法将pIRESneo-EGFP-BDNF转染至骨髓MSCs;制备PD大鼠模型,随机分为Sham组,PD组,MSCs组,脑源性神经生长因子(BDNF)组,经侧脑室移植MSCs或pIRESneo-EGFP-BDNF修饰骨髓MSCs,术后2周,4周,8周,腹腔注射阿朴吗啡(APO)诱导PD大鼠旋转行为；应用高效液相色谱测定各组大鼠纹状体内多巴胺(DA)、高香草酸(HVA)及二羟苯乙酸(DOPAC).结果:移植术后2周,4周,8周BDNF组、MSCs组大鼠与PD组比较旋转次数明显减少(P＜0.05),以BDNF组改善更为明显.移植细胞干预PD模型8周后BDNF组、MSCs组大鼠纹状体DA、HVA、DOPAC较PD组明显提高(P＜0.01),以BDNF组更为显著.结论:经侧脑室移植pIRESneo-EGFP-BDNF修饰的骨髓MSCs干预PD大鼠模型,显著降低PD大鼠纹状体内DA代谢率,提高DA水平,改善PD大鼠的行为能力.

帕金森病患者血浆单胺类神经递质的变化水平

目的:研究帕金森病患者血浆单胺类神经递质的水平变化.方法:用高效液相色谱仪-电化学检测法测定了46例2002-12/2004-02就诊于中山大学附属第一和第二医院神经科的帕金森病患者和28例正常对照者血浆中多巴胺、5-羟色胺、高香草酸和双羟苯乙酸浓度.结果:帕金森病患者血浆中多巴胺、高香草酸、5-羟色胺的质量浓度分别为(0.447±0.198),(0.193±0.161),(0.332±0.152)mg/L,明显低于对照组(P＜0.05),而双羟苯乙酸的浓度和对照组差异无显著性意义.结论:帕金森病患者血浆中多巴胺、高香草酸、5-羟色胺存在明显的变化,其可能共同参与帕金森病的发病,并为帕金森病的诊断提供参考价值.

职业性锰暴露电焊工唾液锰和尿高香草酸水平的研究

[目的]通过研究不同锰暴露水平电焊工唾液锰和尿高香草酸水平的差异,探索职业性锰暴露的早期生物标志. [方法]选择青浦区24家锰电焊企业的234名电焊工人为暴露组,采用个体长时间采样采集工作场所空气锰,时间加权平均浓度(TWA)≥0.15 mg/m3者为高暴露组共121人,TWA＜0.15 mg/m3者为低暴露组共113人,选取不接触锰工人135人为对照组,测定各组唾液锰和尿高香革酸浓度,分析各组间两指标的差异及其影响因素. [结果]暴露组和高暴露组唾液锰浓度分别为(7.65±5.57) μg/L和(13.38±15.36) μg/L,暴露组与对照组以及高暴露组与低暴露组比较,唾液锰浓度差异均有统计学意义(均P＜0.01);高暴露组接锰工龄5年以上组唾液锰均值为(16.94±19.81) μg/L,较接锰工龄5年以下组差异有统计学意义(P＜0.05);暴露组和高暴露组尿高香草酸浓度均值分别为(6.79±1.01) μg/L和(7.58±0.92) μg/L,暴露组与对照组以及高暴露组与低暴露组比较尿高香草酸差异有统计学意义(P＜0.01).[结论]唾液锰可以考虑作为职业性锰暴露的生物标志;尿高香草酸可以作为职业性锰暴露早期的效应标志.

慢性间歇性低压低氧对老年大鼠纹状体多巴胺含量及行为的影响

目的:探讨慢性间歇性低压低氧(CIHH)对老年大鼠纹状体多巴胺(DA)及其代谢产物含量以及相关行为的影响.方法:用CIHH氧仓处理大鼠30 d,通过黏附物去除实验、倾斜面实验和水平绳实验检测大鼠行为的改变,通过液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析DA及其代谢产物二羟苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量.结果:老年组大鼠黏附物去除实验、倾斜面实验和水平绳实验中各行为参数均较成年组大鼠显著下降,CIHH处理后上述行为参数均有改善,但没有达到成年组水平;老年组大鼠DA及其代谢产物DOPAC和HVA含量均较成年组大鼠显著下降,老年CIHH组DA及其代谢产物DOPAC和HVA均升高,但没有达到正常成年组水平.结论:CIHH改善老年大鼠纹状体DA含量及行为衰退.

HPLC-ECD法对精神分裂症患者脑脊液单胺类神经递质的检测

目的探讨精神分裂症患者脑脊液(CSF)中多巴胺(DA)、高香草酸(HVA)含量的变化及立体定向手术对其的影响.方法立体定向手术治疗22例精神分裂症患者,高效液相色谱-电化学HPLC-ECD法检测CSF中的DA及HVA水平.结果精神分裂症患者手术前CSF中DA[(3.23±0.36)μmol/L]、HVA[(1.99±0.49)μmol/L]水平显著高于对照组[(2.44±0.32)μmol/L、(1.41±0.37)μmol/L](P<0.01);手术后DA[(2.49±0.35)μmol/L]、HVA[(1.42±0.28)μmol/L]水平明显下降(P<0.01).结论支持精神分裂症中枢DA亢进假说,立体定向手术具有明显的DA传导阻滞作用.

谷氨酸和MK-801对正常和帕金森模型大鼠纹状体内多巴胺代谢的影响

采用微透析和高效液相色谱-电化学(HPLC-ECD)技术研究了谷氨酸和MK-801对正常和帕金森模型大鼠纹状体内多巴胺代谢的影响.用微透析技术在大鼠纹状体内分别定位给以左旋多巴、L-谷氨酸和/或MK-801,同时收集透析液,用HPLC-ECD方法测定透析液中多巴胺代谢产物的浓度.微透析和HPLC-ECD分析结果表明:纹状体内定位给以左旋多巴,正常大鼠和帕金森模型大鼠纹状体内多巴胺代谢产物的浓度均升高;纹状体内定位给以L-谷氨酸,可使正常大鼠纹状体内多巴胺代谢产物的浓度降低,但对帕金森大鼠模型纹状体内多巴胺代谢产物浓度的降低不显著;纹状体内定位给以MK-801,正常大鼠纹状体内多巴胺代谢产物的浓度升高;但对帕金森大鼠模型纹状体内多巴胺代谢产物浓度的升高不显著;纹状体内同时定位给以MK-801和L-谷氨酸,可以有效防止L-谷氨酸所致正常大鼠纹状体内多巴胺代谢产物浓度的降低.结果提示,谷氨酸可以通过NMDA受体调节多巴胺的代谢.尽管非竞争性NMDA拮抗剂MK-801可以有效防止L-谷氨酸所致正常大鼠纹状体内多巴胺代谢产物浓度的降低,但却不能有效地改善帕金森大鼠模型纹状体内多巴胺的代谢水平.因此在正常及帕金森病情况下,谷氨酸-多巴胺相互作用机制和MK-801改善帕金森病的机制还有待进一步研究.

尿液香草扁桃酸和高香草酸检测的方法学及临床意义

香草扁桃酸(vanillylmandelic acid, VMA),为肾上腺素、去甲肾上腺素的主要终末代谢产物.嗜铬细胞瘤患者能够分泌大量的肾上腺素和去甲肾上腺素,其中大约60%将终转化为VMA,随尿液排出体外.尿中VMA含量的升高是临床诊断嗜铬细胞瘤的重要指标.