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丙型肝炎抗病毒治疗研究若干进展
全世界估计有1.7亿慢性HCV携带者,大多数成为慢性持续性感染,临床上从无症状携带者进展至慢性活动性肝炎、肝硬化,而且还与肝细胞癌发生有关.近年来对丙型肝炎抗病毒治疗的研究已取得了较大进展.在细胞培养中HCV不易繁殖,因此对病毒生活周期的了解和对抗病毒药物的研制受到了限制.目前认为:在HCV复制周期以及HCV非结构蛋白中具有重要功能的HCV复制蛋白酶,如NS2-NS3金属蛋白酶、NS3丝氨酸蛋白酶及NTP酶/螺旋酶、NS5B的RNA依赖RNA聚合酶等,均可作为抗HCV药物的靶点.以此为据提出的有可能干扰HCV复制的治疗理论策略见表1[1].
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抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎25例临床分析
抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)是一类抗中性粒细胞胞质的自身抗体,其靶抗原主要为丝氨酸蛋白酶3(PR3)或髓过氧化物酶(MPO),与ANCA密切相关的系统性血管炎称为ANCA相关性血管炎,根据2012年欧洲风湿病年会(EULAR)颁布的新分类方法[1]可分为显微镜下多血管炎(MPA)、肉芽肿性多血管炎(GPA)和嗜酸性肉芽肿性多血管炎(EGPA),其预后取决于是否得到早期诊断和及时治疗。本文回顾了25例ANCA相关性血管炎患者的临床资料,探讨该病的临床特征,旨在提高对该病的认识,及时诊断,尽早治疗,现报道如下。
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斯氏按蚊丝氨酸蛋白酶基因克隆及其与约氏疟原虫卵囊黑化关系的研究
目的克隆斯氏按蚊丝氨酸蛋白酶基因,分析该分子与约氏疟原虫卵囊黑化关系.方法根据其它昆虫丝氨酸蛋白酶的保守氨基酸序列设计简并引物,以斯氏按蚊全蚊cDNA为模板,进行RT-PCR扩增,PCR产物纯化,克隆入pUCm(T载体,测定插入片段序列,对序列进行BLAST检索和鉴定,根据序列设计相应基因的特异引物,然后分别从血淋巴细胞或中肠扩增目的基因,并进行不同食源条件下丝氨酸蛋白酶基因的半定量、原位核酸分子杂交定位与约氏疟原虫卵囊黑化关系的分析.结果获得了2种斯氏按蚊血细胞丝氨酸蛋白酶cDNA部分序列,即AsSP1(448bp)和AsSP2(472bp),分别与冈比亚按蚊SP2A和大劣按蚊SP2基因很相似,其编码的氨基酸序列均包含保守的丝氨酸蛋白酶催化功能域.在中肠和血淋巴内也获得相同的目的基因片段,半定量分析显示约氏疟原虫感染或诱导卵囊黑化呈现之前的表达明显增强,原位核酸分子杂交技术也进一步证实血细胞有AsSP1和AsSP2 mRNA表达.结论 AsSP1和AsSP2很可能与疟原虫感染或约氏疟原虫卵囊黑化相关,推测可能是斯氏按蚊的前酚氧化酶的活化酶.
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大劣按蚊丝氨酸蛋白酶cDNA克隆和表达
目的克隆、表达大劣按蚊丝氨酸蛋白酶.方法根据已报道昆虫的前酚氧化酶激活酶(prophenoloxidase-activating enzyme,PPAE)的保守氨基酸序列设计简并引物,以大劣按蚊血细胞mRNA为模板,进行RT-PCR扩增,克隆和测定插入片段;所得序列进行BLAST查询,并原核表达其中的两种PPAE样丝氨酸蛋白酶cDNA,通过SDS-PAGE和Western blotting 检测表达产物.结果和结论获得了3种大劣按蚊血细胞丝氨酸蛋白酶cDNA部分序列,即AdsP1(512bp),AdsP2(488bp)和 AdsP3(512bp).AdsP1和AdsP3与冈比亚按蚊sP14D1、sP14D2、3种昆虫 PPAE和黑腹果蝇Easter很相似,推测AdsP1和AdsP3可能是大劣按蚊的PPAE,起调节大劣按蚊黑化包裹约氏疟原虫反应的作用.另外,成功表达了AdsP1和AdsP3 部分cDNA序列.
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日本血吸虫丝氨酸蛋白酶基因片段在真核表达载体中的克隆
目的 为了寻找新的预防日本血吸虫病的候选疫苗分子。方法设计合成引物,以日本血吸虫成虫基因组DNA为模板,用PCR法扩增出丝氨酸蛋白酶(Sp)基因编码序列,其大小约450bp,将其克隆入pGEM-T载体,进行序列测定,并将Sp基因克隆入真核表达载体pBKCMV中。结果PCR法扩增出SjSp基因编码序列,其大小约450bp,重组质粒pGEM-T-Sp 和pBK-Sp经双酶切和以质粒为模板进行PCR扩增,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段,序列测定结果表明具有一个长度为427bp的不完整开放阅读框,其与曼氏血吸虫丝氨酸蛋白酶(SmSp1)具有高度同源性。结论 本文首次报道了日本积压吸虫丝氨酸蛋白酶(SjSp)的部分基因编码序列,并克隆入了真核表达载体pBKCMV中,为进一步研究提供了条件。
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蝇类免疫的研究进展
蝇类在长期的进化过程中形成了独特的免疫防御机制.研究表明:蝇类免疫系统包括细胞免疫和体液免疫,两者相互协同对抗各种微生物的入侵,控制感染.细胞免疫主要依赖血细胞对外来抗原或异物的吞噬(phagocytosis)和包被作用(encapsulation);体液免疫包括细菌识别蛋白、抗菌多肽、丝氨酸蛋白酶、蛋白酶抑制剂、酚氧化作用等[1-2].本文就蝇类免疫的研究进展作一综述.
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超广谱内酰胺酶研究进展
超广谱β-内酰胺酶(extended spectum β-lactamerses,ESBLs)是丝氨酸蛋白酶的衍生物,它能够水解青霉素、广谱及超广谱头孢菌素和单环β-内酰胺抗生素的β-内酰胺酶,且能被克拉维酸抑制.
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人组织激肽释放酶基因家族
激肽释放酶(kallikrein,KLK)是一组丝氨酸蛋白酶,存在于不同组织和生物液体中.初由Werle等人于1930s从胰腺中分离.主要分为两大类:血浆激肽释放酶和组织激肽释放酶.二者在其分子量、特异性底物、免疫学特征、基因结构以及所释放的激肽类型等方面均存在明显差异.
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茄病镰刀菌ALP小干扰RNA载体的构建与表达
[目的]进一步研究碱性丝氨酸蛋白酶(ALP)在真菌性角膜炎发病机制中的作用,寻找有效的治疗措施.[方法]根据载体质粒pBC-hygro要求设计两对小干扰RNA,退火后连接于载体相应位点,经双酶切及测序鉴定后,分别转染标准茄病镰刀菌株,得到菌株△ALP1和△ALP2.采用蛋白琼脂廓清特殊培养基检测酶活性变化,Western-blot检测ALP的表达,并与标准茄病镰孢菌比较.[结果]检测△ALP1菌株、△ALP2菌株和对照菌株各6份,其CH值标准株为0.80±0.01,△ALP1为0.80±0.03,△ALP2为0.86±0.03,△ALP1与标准株的差异无统计学意义(P>0.05),△ALP2大于标准菌和△ALP1株(P<0.01).ALP蛋白条带的积分值(INT×mm2),标准株为1 240.29±289.77,△ALP1为603.58±120.55,△ALP2为401.84±117.94,△ALP1与△ALP2均低于标准株(P<0.01),△ALP1高于△ALP2(P<0.05).[结论]成功地构建了ALP小干扰RNA载体及稳定转染菌株.
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人组织型Kallikrein基因家族及其研究进展
Kallikreins 是一类丝氨酸蛋白酶,至今已发现178种人类丝氨酸蛋白酶,占人类基因组编码总蛋白水解酶的32%.可将Kallikreins分成两大类:基质型Kallikreins和组织型Kallikreins.基质型Kallikreins是由一个基因编码的,位于人染色体的4q35.
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人组织型Kallikreins基因家族研究进展
人组织型Kallikreins基因(下称Kallikreins)是由15个编码丝氨酸蛋白酶的基因组成的家族,1986年Watt等从精液中纯化出前列腺特异性抗原(PSA、hK3),1987年Landwall和Lilja报道了几乎完整的PSA酶原前体(Prepro-PSA)序列;接着Schedlich分离到hK2的基因组DNA.至此认为该基因家族由三个成员组成,分别命名为KLK1(编码胰/肾Kallikrein)、KLK2(编码人腺体Kallikrein2)及KLK3(编码前列腺特异性抗原)[1].
关键词: Kallikreins基因 丝氨酸蛋白酶 肿瘤 中枢神经系统 -
黄粉虫纤溶活性蛋白酶(TFP)酶学性质以及红外光谱分析
目的 研究黄粉虫纤溶活性蛋白(Tenebrio Fibrinolyric Proteins,TFP)的酶学性质及对其进行分类.方法 以BAEE、BAPNA和酪蛋白为底物分别测TFP的Km值;分别研究PMSF和胰蛋白酶对TFP活性的影响.结果 以BAEE和BAPNA为TFP底物,Km值分别为0.182 mmol/ L和1.138 mmol/L,表明TFP与BAEE亲和力好,酯酶活力>酰胺酶活力>肽键酶活力.丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF能有效抑制TFP活性,而偏弱碱性环境下胰蛋白酶未降解TFP,胰蛋白酶与TFP红外结构图谱相似,可以初步证明TFP属于丝氨酸蛋白酶.结论 黄粉虫纤溶活性蛋白酶的醋酶活力好,属于丝氨酸蛋白酶.
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缓激肽在器官微循环损伤中的作用
器官微循环障碍是急性胰腺炎(AP)等疾病发病的重要机制之一,血管活性物质参与了这些疾病局部微循环的调节,激肽尤其是缓激肽在其中扮演了重要角色。1 缓激肽的代谢缓激肽是在激肽释放酶的作用下由激肽原生成的血管活性物质,而血浆激肽释放酶是由激肽释放酶原转化而来,激肽释放酶原激活物促使激肽释放酶原转化为血浆激肽释放酶。激肽释放酶的活性可受到3,4-二氯异香豆素(丝氨酸蛋白酶的抑制剂)和Pefabloc PK(选择性血浆激肽释放酶抑制剂)的影响,它们可通过抑制缓激肽的产生,从而抑制缓激肽的血管效应[1]。
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内皮素-内皮素受体在凝血酶促进血管平滑肌细胞增殖中的作用
凝血酶是一种丝氨酸蛋白酶,催化裂解纤维蛋白原形成纤维蛋白,参与凝血过程;通过其特异性受体(凝血酶受体)激活血小板,是已知体内强的血小板聚集剂.凝血酶还是体内重要的有丝分裂原,与内皮素(ET)、血管紧张素(AT)一样作用于G蛋白偶联的受体,促进血管平滑肌增殖,与冠状动脉硬化的发生、发展和PTCA后的再狭窄有关[1].
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抗凝药物和溶栓药物的临床应用和实验监测
抗凝药物治疗血栓性疾病能阻止血液凝固的药物称为抗凝药物(anticoagulative drugs),抗凝药物主要用于防止血栓形成,兹将各种抗凝药物的特性简述如下. 普通肝素和低分子量肝素普通肝素即肝素(heparin)是一种硫酸化的糖胺聚糖,相对分子质量(Mr)10 000~56 000(平均15000);低分子量肝素(loW molecular weight heparin,LMWH)是由肝素经解聚法制备而得,Mr 1 500~10 000(平均3 000~7 000).肝素和LMWH的抗凝血作用需依赖抗凝血酶Ⅲ(antithrombin Ⅲ,AT Ⅲ)或其次需依赖肝素辅因子Ⅱ(heparin co-Ⅱ,Hc-Ⅱ).肝素与AT Ⅲ结合形成复合物,该复合物可灭活激肽释放酶(K)、因子XⅡa、Ⅺa、Ⅺa、Xa和凝血酶等丝氨酸蛋白酶;肝素与HC-Ⅱ结合,也可灭活凝血酶.普通肝素和LMWH的比较见表1.
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槲芪散及其君药槲寄生对大鼠肝癌前病变组织中促凋亡因子Omi/ HtrA2表达的影响
目的:探讨槲芪散及其君药槲寄生干预肝癌前病变组织中癌细胞凋亡机制.方法:用电镜观察模型组、正常组以及槲芪散大小剂量组、槲寄生单体组肝细胞线粒体形态学的变化,用免疫组化SP法、Western Blotting法检测各实验组大鼠肝组织丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2的表达.结果:槲芪散治疗组肝细胞线粒体形态较模型组有明显改善;除正常组外,模型组,槲芪散大、小剂量治疗组,槲寄生单体组均有Omi/HtrA2的表达,模型组、正常组、大剂量治疗组、单体组之间丝氨酸蛋白酶的表达量有统计学意义(P<0.05).结论:槲芪散及其君药槲寄生能够改善肝细胞线粒体的形态和功能,降低Omi/HtrA2总量的表达,并且促使Omi/HtrA2从线粒体释放,诱导肝癌细胞的凋亡.
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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对Omi/HtrA2不同表达水平前列腺癌细胞的促凋亡作用
目的 观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对前列腺癌细胞(PC-3M)不同丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2表达水平的促凋亡作用.方法 构建其小分子干扰RNA(siRNA)表达载体,辅助设计Omi/HtrA2特异性siRNA序列.合成后克隆入真核表达载体psiRNA-hH1neo.脂质体法转染psiRNA-Omi/HtrA2载体至PC-3M中,检测Omi/HtrA2在PC-3M细胞中的表达及psiRNA-Omi/HtrA2对Omi/HtrA2沉默效应后的转录和表达.用原位末端转移酶标记技术检测Omi/HtrA2基因沉默后,计算不同浓度TRAIL(50、100、200、500 μg/L)下PC-3M细胞凋亡指数(AI).结果 Omi/HtrA2在PC-3M细胞中高表达.酶切和DNA测序证实siRNA基因序列正确,且准确克隆入psiR-NA-hH1neo载体中.psiRNA-Omi/HtrA2载体可特异性抑制PC-3M细胞中Omi/HtrA2的表达.不同浓度TRAIL(50、100、200、500 μg/L)对转染psiRNA-Omi/HtrA2载体后PC-3M细胞AI分别为7.23、14.87、22.65、31.78.而未转染组分别为15.28、24.17、36.33、47.76.两组之间差异有统计学意义(P<0.05).结论 Omi/HtrA2在前列腺癌细胞凋亡过程中起重要作用,TRAIL促进前列腺癌细胞的凋亡,其效果与TRAIL浓度及Omi/HtrA2表达水平相关.
关键词: 小分子干扰RNA 前列腺癌 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 丝氨酸蛋白酶 -
跨膜丝氨酸蛋白酶4和癌胚纤维连接蛋白在甲状腺癌中的表达
甲状腺癌是头颈部常见的恶性肿瘤,约占全身恶性肿瘤的1%左右[1].本实验探讨了甲状腺癌、良性病变和癌旁组织中跨膜丝氨酸蛋白酶4(TMPRSS4)和癌胚纤维连接蛋白(onfFN)mRNA的表达与甲状腺癌临床病理参数之间的关系.
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蚓激酶胶囊治疗脑梗死病人的临床观察
蚓激酶是从露天红赤子爱胜蚓中提取的一种丝氨酸蛋白酶,具有典型的胰凝乳蛋白酶类丝氨酸蛋白酶的多肽链折叠形式,与纤维蛋白原有特异的亲和力,且具有纤溶活力.蚓激酶胶囊能明显降解纤维蛋白原,降低血小板聚集率及血液粘度.我们采用随机双盲、安慰剂对照(2:1)观察蚓激酶胶囊治疗脑梗死病人的临床疗效及安全性,尤其关注对纤维蛋白原等实验指标的影响,现报告如下.
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组织蛋白酶K在口腔疾病中的研究进展
组织蛋白酶K(cathepsin K)是一种半胱氨酸蛋白酶,主要存在于破骨细胞、破牙细胞中,该酶主要降解胶原纤维、骨连接素等多种骨基质蛋白.1组织蛋白酶K结构及功能组织蛋白酶是番木瓜家族的成员,由超过21种的蛋白酶构成,他们被分成4个家族:半胱氨酸蛋白酶,天门冬氨酸蛋白酶,丝氨酸蛋白酶及三肽酶[1].其中CK属于半胱氨酸蛋白酶,在卵巢、心脏、胎盘、肺、骨骼肌、结肠、小肠等多组织中表达,免疫组织化学证明其在破骨细胞和破骨细胞样细胞(大的多核细胞)中的浓度较高[2].