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Skp2 mRNA及蛋白在大肠腺瘤组织中的表达
目的:研究细胞S期激酶相关蛋白2(S-phasekinase-asociated protein 2,Skp2)在大肠腺瘤组织中的表达.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法检测20例管状腺瘤、15例绒毛状腺瘤、18例混合性腺瘤和20例正常黏膜组织中SKq2的表达情况.结果:绒毛状腺瘤和混合性腺瘤Skp2 mRNA的表达水平显著高于正常对照组(0.71±0.34,0.63±0.20vs0.34±0.20,P＜0.01),而管状腺瘤Skp2 mRNA的相对含量与正常对照组无显著差异,绒毛状腺瘤和混合性腺瘤Skp2 mRNA的相对含量与管状腺瘤组亦有显著差异(0.71±0.34,0.63±0.20 vs0.43±0.22,P＜0.05);但是绒毛状腺瘤和混合性腺瘤间无显著差异.大肠管状腺瘤、绒毛状腺瘤、混合性腺瘤及正常组Skp2蛋白表达阳性率分别为15%(3/20)、46.7%(7/15)、27.8%(5/18)和5.0%(1/20),各组间有显著差异(P＜0.05).结论:从基因及蛋白水平证明,skp2的阳性表达与大肠腺瘤的组织学类型有关,可能对大肠腺瘤的发生发展起促进作用.
关键词： 大肠腺瘤 激酶相关蛋白2 逆转录聚合酶链式反应 免疫组化技术 -
双环醇对小鼠日本血吸虫病肝纤维化即早基因与TGF-β1、TIMP1及胶原表达的影响
目的:研究双环醇对小鼠日本血吸虫病肝纤维化的治疗作用及其机制.方法:将80只小鼠随机分为4组,低剂量,高剂量治疗组和实验组各组小鼠感染日本血吸虫8 wj后,分别以60 mg/(kg·d)、120 mg/(kg·d)双环醇治疗8 wk以及不进行任何治疗,第4组小鼠作为正常对照组.应用HE染色、RT-PCR及免疫组化染色法,观察和分析不同剂量双环醇治疗前后各组小鼠肝组织病理改变和c-fos mRNA、c-jun mRNA、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP1)和Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达变化.结果:高剂量双环醇治疗后肝纤维化组织病理损伤减轻,高剂量双环醇组TGF-β1、TIMP1和Ⅰ、Ⅲ型胶原含量(平均积分光密度)分别是0.1815±0.0231、0.2324±0.0536、0.1811±0.0514、0.1543±0.0603明显低于实验对照组0.2139±0.0134、0.2648±0.0361、0.2140±0.0271、0.1862±0.0217.而低剂量双环醇与实验对照组比较无显著差异.与实验对照组相比,高剂量双环醇组小鼠肝组织中c-fosmRNA,c-jun mRNA表达与实验对照组和低剂量双环醇组相比显著降低(c-fos mRNA:0.6511±0.0551 vs 0.7844±0.0852,0.8072±0.0923;c-jun mRNA:0.6803±0.0712 vs 0.7982±0.0902,0.8289±0.094).结论:双环醇治疗血吸虫病肝纤维化作用呈剂量依赖性.高剂量双环醇抗血吸虫肝纤维化作用可能与其抑制肝组织即早基因表达、减少TGF-β1、TIMP1产生有关.
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靶向XIAP的shRNA重组质粒的构建
目的:设计以X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)为靶向的shRNA,构建携带此shRNA的重组质粒,检测其抑制XIAP表达的效应,筛选RNA干扰作用强的shRNA片段.方法:设计4对针对XIAP基因不同位点的shRNA片段,构建携带此shRNA片段的真核表达载体psiRNA-Hhneo-XIAP,通过脂质体介导的方法将重组质粒转染到肝癌细胞株HepG2细胞中.采用逆转录酶链式反应(RT-PCR)及蛋白印迹(Western blotting)方法检测XIAP的mRNA及蛋白表达情况,比较转染前后其表达差异,以判断各sbRNA的干扰效应.结果:成功构建含shRNA片段的重组质粒.经质粒测序证实,插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致.重组质粒转染HepG2细胞后,XIAP基因的mRNA水平及蛋白表达水平明显下调,其中以1号重组质粒效应强.shRNA作用48 h后,对HepG2细胞中XIAP mRNA和蛋白的抑制率与3,4号重组质粒相比,均具有显著性差异(mRNA:94.5%vs 81.5%,82.6%,均P＜0.01:蛋白:92.6% vs 80.7%,82.9%,均P＜0.01).结论:成功构建了携带以XIAP为靶向的shRNA的重组质粒,其对肝癌细胞内XIAP的表达具有显著抑制效应.
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反义c-myc寡核苷酸对转染FHIT基因胃癌细胞MKN28的影响
目的: 探讨脂质体介导的c-myc反义寡核苷酸对导入脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的胃癌细胞增殖及凋亡的影响.方法: 通过脂质体将重组FHIT基因PRC/CMV质粒和空载体转染到人类胃癌细胞系MKN28,并分别转染c-myc反义寡核苷酸,RT-PCR和Westen b1ot法检测FHIT基因的转染,Westem b1ot法检测细胞c-mHyc的表达,MTT法分析细胞增殖,AO/EB染色法和流式细胞分析技术检测细胞凋亡.结果: 转染FHIT基因后,MKN28细胞检测到FHIT基因片段和FHIT蛋白,而未转染的细胞及转染空载体的细胞未检测到FHIT基因片段及FHIT蛋白.转染c-myc反义寡核苷酸后.对MKN28细胞c.myc的表达有明显的抑制作用,并呈明显的时间依赖性;c-myc asODN对FHIT+MKN28细胞抑制率(F=177.480,P<0.05),凋亡率(F=41.500,P<0.05)和凋亡比例明显高于FHIT MKN28细胞.结论: 癌基因c-myc的表达抑制联合FHIT基因的表达可以发挥较强的抗肿瘤细胞作用,为多基因治疗肿瘤提供了理论基础.
关键词： 脆性组氨酸三联体 反义c-myc寡核苷酸 转染 凋亡 逆转录聚合酶链式反应 -
5-脂氧合酶抑制TNF-α诱导的胰腺癌细胞凋亡
目的:检测胰腺癌细胞中5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)及其代谢产物的表达情况,分析高表达5-LOX及LTB4对胰腺癌细胞生长凋亡的影响.方法:体外培养人胰腺癌细胞株ASPC-1,PANC-1和SW1990,并构建5-LOX基因稳定转染细胞株.用RT-PCR和Western blot检测细胞5-LOX mRNA和蛋白的表达,ELISA检测细胞培养上清中LTB4的含量,采用流式细胞仪、Annexin V/PI双染法检测TNF-α诱导细胞的细胞凋亡.结果:三种胰腺癌细胞株均表达5-LOXmRNA和蛋白,细胞上清中也都检测到一定量LTB4分泌.5-LOX基因稳定转染细胞株表达5-LOX和LTB4的水平上升.TNF-α(20 μg/L)处理野生型SW1990细胞,12和24 h后凋亡率分别为25.4%±3.65%和43.5%±5.23%,但该效应在高表达5-LOX的细胞株中明显减弱,分别为13.2%±2.01%和21.7%±3.65%.在野生型SW1990细胞培养中加入外源性LTB4(10nmol/L)能抑制TNF-α诱导的细胞凋亡,野生型与处理组细胞24 h后凋亡率有显著性差异(47.6%±5.32% vs 18.5%±5.69%,P＜0.01).用LTB4受体阻断剂处理5-LOX高表达细胞株,能恢复其对凋亡诱导的敏感性.结论:胰腺癌细胞均能表达5-LOX并产生LTB4,高表达5-LOX能抑制TNF-α诱导的胰腺癌细胞凋亡.
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PAI-1在大鼠胆汁淤积性肝纤维化形成中的动态变化
目的: 探讨纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI.1)mRNA在胆汁淤积性肝纤维形成中的动态变化及其作用.方法: 应用胆管结扎法复制胆汁淤积性肝纤维化动物模型,分为假手术组,模型组1 wk、2 wk、3 wk、4 wk,观察模型大鼠肝组织病理、纤维化程度、RT.PCR检测PAI-1 mRNA的水平、ELISA法检测MMP-2和MMP-9含量的动态变化.结果: 随胆管阻塞时间延长,胆管阻塞性肝纤维化大鼠纤维化程度逐渐增加,模型组1 wk、2 wk、3 wk、4 wk组PAI-1 mRNA表达与假手术组相比,逐渐增强,有显著性差异(1.53±0.01,1.84±0.03,2.06±0.04,3.62±0.04vs 0.72±0.02,P<0.01),而MMP-2和MMP-9表达先升高后下降.结论: PAI.1mRNA表达存在动态变化,其表达升高与胆汁淤积性肝纤维化形成和发展有关.
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在Fas诱导Bel-7402细胞凋亡中p38MAPK调节Bcl-2的表达
目的:探讨p38MPAK是否参与Fas和AD诱导Bel-7402细胞的凋亡过程,以及p38MPAK和bcl-2的关系,进一步揭示p38MAPK的凋亡途径.方法:在Fas和AD作用24h后,用MTT法检测Bel-7402细胞的活力,用Western-blot和RT-PCR法检测p38MAPK,p-p38MAPK和Bcl-2 expression,用免疫荧光法对p-p38MAPK进行细胞定位.结果:随着Fas浓度的增加,Bel-7402细胞的活力明显抑制,p38MAPK和p-p38MAPK表达明显增高(P＜0.01),且p-p38MAPK由胞质易位到胞核.Bcl-2的表达明显降低(P＜0.01),并且这种降低趋势被p38MAPK抑制剂SB203580所阻止.结论:p38MAPK参与Fas诱导的凋亡途径,以磷酸化形式激活后抑制Bcl-2的表达,进而促进细胞凋亡.
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PAF对肠上皮细胞紧密连接的影响及ITF的保护作用
目的:探讨血小板活化因子(PAF)是否会引起肠黏膜屏障的破坏以及这种破坏机制是否与紧密连接相关,并观察肠三叶因子(ITF)的保护作用.方法:培养人结肠腺癌细胞株caco-2,分别设正常对照组:不加刺激物及干预因素;实验组:加入PAF,终浓度分别为50 ng/L、100 ng/L和200 ng/L;ITF预防组:先加入ITF0.3 g/L,30 min后加入PAF 100 ng/L;ITF治疗组:先加入PAF 100 ng/L,30 min后加入ITF0.3 g/L,24 h后进行实验.MTT比色法检测细胞活力;测定跨上皮电阻TER和荧光黄的透过量反映肠上皮细胞单层通透性:RT-PCR法检测紧密连接蛋白ZO-1和Occludin mRNA表达的变化;免疫荧光染色观察紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的形态学.结果:PAF未影响到细胞的增殖和细胞活力.各浓度PAF作用24 h后,细胞单层通透性增加,跨上皮电阻(TER)下降,荧光黄透过增加.ITF治疗组及预防组TER下降值较模型组明显降低(122.2±14.7,100.3±10.9 vs 210.3±26.4,P＜0.05),荧光黄透过量减少(10226.1±556.2,9711.2±364.9 vs 11601.2±693.5,P＜0.05),预防组作用更明显.PAJF作用后,ZO-1和Occludin mRNA表达均有下降,以100 ng/L组改变为明显.ITF预防组较之表达增加(1.28±0.06 vs 1.07±0.05,1.13±0.07 vs 0.81±0.06,P＜0.05),ITF治疗组改变不明显.免疫荧光染色发现ZO-1和Occludin主要分布在细胞内近胞膜处.PAF作用后,ZO-1及Occludin形态学改变,预防性给予ITF后,可明显减轻这种改变.结论:PAF可引起肠黏膜屏障破坏,其机制可能和紧密连接蛋白的破坏相关;ITF可以通过改变紧密连接蛋白的表达而部分恢复肠黏膜正常通透性,起到保护作用.
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靶向S区和C区基因的M1GS RNA核酶共同抑制HBV的表达
目的:研究靶向HBV S区和C区基因的M1GSRNA核酶共同作用对HBV基因表达的影响.方法:选择HBV ayw亚型S区基因294 nt和C区基因2333 nt为切割位点,以含有编码M1 RNA的DNA序列的质粒pTK117为模板.通过PCR扩增得到M1GS RNA核酶的DNA模板,并将其克隆至真核表达载体pEGFP-C1得到重组质粒pEGFP-GSS和pEGFP-GSC.将2个重组质粒共转染HepG2.2.15细胞,转染后ELISA法测细胞培养液中的HBsAg和HBeAg,RT-PCR检测HBV mRNA.结果:成功构建了分别靶向HBV S区基因和C区基因的真核表达载体.共转染HepG2.2.15细胞后,HBsAg和HBeAg的表达分别被抑制了33.2%和39.1%.HBV C mRNA和S mRNA分别被抑制了32.5%和29.7%,而HepG2.2.15细胞的增殖无明显变化.结论:靶向HBV S区和C区基因的M1GS RNA核酶共同作用可特异性抑制HBV S区和C区基因的表达.
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清胰汤对大鼠急性胰腺炎肺损伤时SP-A表达的影响
目的:探讨重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤(ALI)时肺表面活性蛋白A(SP-A)的表达及其在ALI发病中的作用,并观察清胰汤对SP-A表达和病情转归的影响.方法:采用胆胰管内逆行注入1.5%去氧胆酸钠建立大鼠SAP时ALI模型.将SD大鼠随机分为假手术组(n=10)、模型组(n=10)和清胰汤组(n=10).假手术组仅行剖腹术,翻动胰腺.清胰汤组在建立SAP模型后30 min和12 h清胰汤ig(10 mL/kg).各组大鼠在术后24 h测PaO2和血淀粉酶.应用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)检测肺SP-A mRNA的表达强度,Westernblot观察SP-A表达,并观察胰、肺病理变化及肺泡Ⅱ型上皮细胞的电镜下变化.结果:模型组血淀粉酶(7144.19 U/L±727.91U/L)显著高于清胰汤组(4283.51 U/L±527.52U/L)和假手术组(1193.41 U/L±192.54 U/L,P＜0.01).模型组PaO2显著低于假手术组和清胰汤组(79.24±5.84 vs 96.78±3.81,79.24±5.84 vs 88.16±5.07,P＜0.01).清胰汤组肺SP-AmRNA表达显著高于模型组(P＜0.01),肺SP-A蛋白的表达显著高于模型组,SP-A mRNA的表达与肺损伤的程度呈负相关.清胰汤组胰、肺病理及电镜改变较模型组减轻.结论:SAP时肺泡Ⅱ型上皮细胞功能受损,SP-A mRNA表达降低导致急性肺损伤的机制之一.清胰汤能保护肺泡Ⅱ型上皮细胞功能,恢复SP-A mRNA正常表达,维持肺泡功能,从而对肺组织起保护作用.
关键词： 急性重症胰腺炎 急性肺损伤 肺表面活性蛋白A 逆转录聚合酶链式反应 -
Dnmt1,Dnmt3a,Dnmt3b和HMT在不同结肠癌细胞系的表达及意义
目的:探讨不同结肠癌细胞系中表观遗传学酶谱的表达水平.方法:RT-PCR分别检测结肠癌细胞系HT-29、Lovo和Caco-2中Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b和HMT mRNA表达水平.结果:Dnmt3b mRNA在结肠癌细胞系HT-29、Lovo中高度表达,Dnmt1与HMT次之,Dnmt3a表达水平低;Dnmt3b、Dnmt3a在不同结肠癌细胞系之间的表达水平存在显著的差异.结论:不同分化程度的结肠癌细胞系可能存在不同的表现遗传学发生机制;Dnmt3b在建立和维持结肠癌细胞系DNA甲基化模式中可能起更为重要的角色.
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人BRAF野生型及V600E突变型真核表达载体的构建及表达
目的:构建BRAF野生型和V600E突变型真核表达载体;转染并筛选稳定表达BRAF的胰腺癌细胞株,为探讨BRAF V600E突变在胰腺癌发生发展中的作用提供合适的细胞模型.方法:将BRAF野生型及V600E突变型cDNA克隆于真核表达载体pCMV-Myc中,构建pCMV-Myc-BRAFW)及pCMV-Myc-BRAFV600E重组质粒,酶切鉴定、测序证实序列正确后,利用脂质体将重组质粒转染胰腺癌细胞Panc-1,经G418培养筛选获得抗性细胞克隆,用RT-PCR和Western blot鉴定野生型和V600E突变型BRAF基因在Panc-1细胞中的表达.结果.酶切鉴定和序列分析证实,重组克隆pCMV-Myc—和pCMV-Myc—BRAFV600E序列正确,RT-PCR和Western blot结果显示G418筛选获得的转基因Panc-1细胞稳定表达BRAF和BRAF V600E.结论:成功构建了pCMV-Myc-BRAFW和pCMV-Myc-BRAFV600E真核表达载体,建立了稳定表达BRAF和BRAF V600E的胰腺癌细胞株.稳定表达BRAF和BRAF V600E的胰腺癌细胞株.稳定表达BRAF和BRAF V600E的胰腺癌细胞株.
关键词： BRAF 胰腺癌 逆转录聚合酶链式反应 Western blot 克隆 真核表达 -
溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜CINC-1及其受体CXCR2的表达及意义
目的:探讨溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠结肠黏膜中性粒细胞趋化因子-1(CINC-1)及其受体CXCR2的表达及意义.方法:♂SD大鼠36只完全随机分为正常组、模型1组、模型2组, 共3组, 每组12只. 用2, 4,6三硝基苯璜酸100 mg/kg灌肠建立大鼠溃疡性结肠炎模型, 7 d后处死模型1组动物, 14 d后处死模型2组动物. 运用RT-PCR法、免疫组化染色法分别检测各组大鼠CINC-1及CXCR2mRNA及其蛋白的表达.结果:CXCR2主要表达在中性粒细胞及肠上皮细胞膜表面. UC活动期CINC-1及CXCR2mRNA及其蛋白表达明显呈上升趋势, 与炎症相关. 与正常组相比, 模型1组、2组CINC-1mRNA及蛋白表达有显著差异(1.77±0.52,1.82±0.24 vs 0.29±0.10; 0.30±0.01, 0.31±0.04 vs 0.18±0.02, 均P<0.05); CXCR2 mRNA及蛋白表达也有显著差异(1.66±0.10, 2.49±0.29 vs 0.55±0.13; 0.20±0.03, 0.23±0.02 vs0.16±0.01, 均P<0.05).结论:CINC-1及其受体CXCR2表达水平与UC炎症正相关, CINC-1可能通过CXCR2介导中性粒细胞浸润, 造成结肠炎症及组织损伤.
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血管内皮生长因子165基因对人胃癌细胞凋亡的影响及机制
目的: 本实验探讨血管内皮生长因子165(VEGF165)对体外培养的胃癌细胞株BGC-823凋亡的影响和机制.方法: 将BGC一823细胞分为对照组、感染复数(MOI=20)病毒Ad-GFP的Ad-GFP组,重组腺病毒Ad_VEGF165转染的Ad-VEGF165组,应用流式细胞仪检测细胞凋亡的百分率,R11-PCR方法检测凋亡抑制基因Bc1-2mRNA的表达,免疫细胞化学方法检测Bc1-2蛋白的表达情况.结果: 流式细胞仪测定显示Ad-VEGF165组的细胞凋亡率明显低于Ad-GFP组和对照组(4.6%±0.31% vs 8.37%±1.06%.7.73%±0.86%,P.<0.01):RT-PcR和细胞免疫化学结果显示VEGF165转染BGC.823细胞后促进了细胞Bc1-2mRNA和蛋白的表达,Ad.VEGF165组Bc1-2 mRNA和蛋白均高于对照组和Ad-GFP组(Bc1-2 mRNA:0.761±0.05 vs 0.363±0.12,0.356±0.08:Bc1-2蛋白:1.010±0.08 vs 0.865±0.07,0.901±0.05;P<0.01).结论: VEGF165通过上调凋亡抑制基因Bc1-2及其蛋白的表达,来抑制血浆饥饿诱导的胃癌细胞的凋亡.
关键词： 腺病毒 血管内皮生长因子165 胃癌 凋亡 Bd-2 逆转录聚合酶链式反应 -
NM-3含药血清对体外胃癌细胞株SGC-7901生长和VEGF及其受体KDR、Flt-1表达的影响
目的:探讨NM-3含药血清对胃癌SGC-7901细胞的抑制作用.方法:将SGC-7901胃癌细胞分成空白对照组、血清对照组、NM-3含药血清低、中、高剂量实验组共5组.在不同时间段以流式细胞仪检测细胞的凋亡率,分析细胞周期分布;应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组胃癌细胞中VEGF及其受体KDR,Flt-1mRNA的表达.结果:NM-3含药血清3组随着时间的延长凋亡率增高,呈时间剂量依赖性,其高、中剂量组在6 h(16.80%±0.40%,25.20%±0.86%)、24 h(26.95%±3.25%,43.62%±3.53%)、72h(39.85%±4.10%,54.35%±5.42%)内的细胞早期凋亡率与空白,血清两个对照组相比有显著性差异(5.34%±0.28%,5.66%±0.72%;6.91%±1.06%,8.90%±0.86%:6.87%±1.24%,8.06%±0.78%;.P＜0.01).随着NM-3药物剂量的增加,G0/G1期细胞增多,而S期及G2/M期细胞则相应减少.细胞培养72 h后,NM-3含药血清高,中,低剂量组与两对照组比较可显著抑制VEGF及其受体KDR,Flt-1 mRNA的表达(P＜0.05).在72 h后细胞凋亡率,细胞周期以及胃癌细胞中VEGF及其受体KDR,Flt-1.mRNA的表达上,高剂量组与中低剂量组均有明显差异(P＜0.05).结论:NM-3含药血清可抑制胃癌组织的血管生长,并可诱导胃癌细胞凋亡.
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Wnt-5a基因在胃癌中的表达及意义
目的:探讨Wnt-5a基因在胃癌发生发展过程中的表达及意义.方法:采用实时定量RT-PCR方法对10例胃癌和癌旁组织Wnt-5a mRNA进行检测;免疫组织化学SP法检测84例胃癌、癌旁组织及20例正常胃黏膜Wnt-5a和β-catenin蛋白的表达.结果:胃癌和癌旁组织中Wnt-5a mRNA表达的相对含量分别为5.9194±1.869和1.281±0.744(P<0.05);Wnt-5a蛋白在胃癌和癌旁组织的表达阳性率分别为40.54%(34/84)和14.29%(12/84),差异具有统计学意义(P<0.01),肿瘤中Wnt-5a上调表达相关于高的TNM分期和淋巴结转移(P<0.0 1).β-catenin在胃癌及癌旁组织中异常表达率分别为70.23%(59/84)、38.1%(32/84),两者差异表达具有统计学意义(P<0.01),癌组织中β-catenin的异常表达相关于肿瘤的TNM分期和淋巴结转移(P<0.05).胃癌中Wnt-5a和β-catenin蛋白表达呈负相关关系(P<0.05).结论:Wnt-5a在胃癌中可能发挥癌基因样作用,其异常活化可能部分参与了胃癌发生的始动过程,并可能相关于肿瘤差的预后.Wnt-5a与β-catenin在胃癌发生过程可能经由不同的信号途径在胃癌进展中发挥作用.
关键词： 胃癌 wnt-5a β-catenin 逆转录聚合酶链式反应 免疫组织化学 -
Rb/E2F1调控途径在新疆哈萨克族食管鳞癌发生中的作用
目的:探讨Rb基因与转录因子E2F1在新疆哈萨克族食管鳞癌中的表达及临床意义.方法:应用RT-PCR法对48例新疆哈萨克族食管鳞癌组织及其配对的癌旁正常组织进行Rb和E2F1表达检测,分析Rb/E2F1通路与新疆哈萨克族食管鳞癌发生发展之间的关系.结果:新疆哈萨克族食管鳞癌组织中Rb的阳性表达高于癌旁正常组织(64.6％,43.8％)差异有统计学意义(P＜0.05)；转录因子E2F1的阳性表达率与癌旁正常组织阳性表达率(70.8％,75％)差异无统计学意义(P＞0.05).Rb、E2F1的表达与组织学分级及临床分期无关(P＞0.05).Rb阳性表达强度与E2F1的阳性表达强度之间呈正相关(r=0.867,P＜0.05).结论:Rb的高表达伴随新疆哈萨克族食管鳞癌的发生,E2F1可能作用于食管癌发生的早期阶段,二者在新疆哈萨克族食管鳞癌的发生发展中起拮抗作用.
关键词： 食管鳞癌 Rb E2F1 逆转录聚合酶链式反应 -
增龄对大鼠股骨上端BMP-2基因表达的影响
目的了解增龄变化对大鼠股骨上端BMP-2基因表达的影响,分析BMP-2基因表达与老年性骨质疏松发病的相互关系.方法随机选取4,8,12,16及22月龄大鼠各3只,应用RT-PCR技术检测其股骨上端BMP-2的基因表达情况.结果 4～8月龄的大鼠股骨上端BMP-2基因表达逐渐升高;8～12月龄时进入平台期;12～16月龄时开始逐步下降.22月龄大鼠BMP-2基因表达较12月龄大鼠显著下降.结论 BMP-2基因表达具有明显的年龄相关性,老龄时BMP-2基因表达明显降低可能是老年性骨质疏松发病的重要原因之一.
关键词： 骨形态发生蛋白-2 增龄 逆转录聚合酶链式反应 -
应用巢式RT-PCR联合检测原发性肝癌病人外周血AFPmRNA和MAGE-1mRNA的表达
目的寻找一种敏感的方法以早期发现原发性肝癌的复发与转移.方法应用逆转录聚合酶链反应分别在术前、术后1周和术后2个月检测37例行根治性切除的原发性肝癌病人外周血中MAGE-1mRNA和AFPmRNA的表达, 并随访所有病人1年.结果外周血中MAGE-1mRNA和AFPmRNA的阳性率和肿瘤的病理分期相关;肿瘤病期越晚,外周血中微转移灶的检出率越高.1年的随访中,有9例病人出现复发,MAGE-1 和(或) AFPmRNA的阳性率为77.8%(7/ 9),其中6例外周血中MAGE-1mRNA和(或)AFPmRNA持续阳性,2例由阴性转为阳性.另有10例病人MAGE-1mRNA和(或) AFPmRNA由术前阳性术后转为阴性,随访1年中无复发.结论联合检测外周血MAGE-1和AFPmRNA的表达是早期发现肝癌术后复发、评估预后一项敏感可信的指标.
关键词： 癌 肝细胞 MAGE-1mRNA AFPmRNA 外周血 逆转录聚合酶链式反应 -
MFN2 mRNA和蛋白在膀胱癌组织中的表达及与临床特征的关系
目的 探讨膀胱癌组织中线粒体融合蛋白2(MFN2)基因和蛋白的表达及其与临床特征的关系.方法 选取80例膀胱癌患者的术后膀胱癌组织标本为膀胱癌组,选取40例行手术切除的外伤患者的正常膀胱组织标本为对照组.采用免疫组织化学法检测两组标本中MFN2蛋白的表达情况;采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测两组标本中MFN2 mRNA的表达水平;分析MFN2蛋白表达与膀胱癌患者临床特征的关系.结果 膀胱癌组织中MFN2蛋白的阳性表达率、MFN2 mRNA的相对表达量均明显高于正常膀胱组织(P<0.01).中低分化、T3期膀胱癌患者的膀胱癌组织中MFN2蛋白的阳性表达率分别高于高分化、T2期膀胱癌患者(P<0.05);不同年龄、性别、淋巴结转移膀胱癌患者的膀胱癌组织中MFN2蛋白的阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 膀胱癌组织中MFN2基因和蛋白的表达均明显上调,且MFN2蛋白的表达与膀胱癌患者的临床特征有关.
关键词： 膀胱癌 线粒体融合蛋白2 临床特征 逆转录聚合酶链式反应 免疫组织化学法
