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胰高血糖素样肽-1对糖尿病小鼠胰岛素原mRNA的影响
目的:探讨静脉注射胰高血糖素样肽-1(glucagon-1ike peptide-1,GLP-1)对糖尿病小鼠的血糖及胰腺胰岛素原ⅡmRNA水平的影响.方法:体重25～30 g雄性昆明小鼠20只,将四氧嘧啶尾静脉注射(45mg/kg)制成糖尿病模型.将20只糖尿病小鼠随机分为对照组(生理盐水)和实验组[GLP-1(7-36)NH2].分别在注射生理盐水、GLP-1(7-36)NH2前及结束后5、10 min时测定尾静脉血糖.应用半定量逆转录聚合酶链式反应(semi-quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测胰岛素原mRNA表达水平.结果:静脉注射前对照组与实验组血糖差异无统计学意义(P＞0.05),静脉注射后5、10 min时实验组血糖低于对照组(P＜0.05),实验组胰岛素原mRNA表达水平高于对照组(P＜0.05).结论:静脉注射GLP-1(7-36)NH2能促进糖尿病鼠胰岛素基因转录、升高胰腺胰岛素原mRNA水平、促进胰岛素的合成与分泌,迅速升高血胰岛素水平以降低血糖.
关键词： 胰高血糖素样肽-1 胰岛素 逆转录聚合酶链式反应 糖尿病 小鼠 -
藤梨根提取物对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的抑制作用
目的 研究藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的生长抑制及凋亡诱导作用,并探讨其作用机制.方法 建立肺癌A549细胞裸鼠移植瘤模型,观察藤梨根乙酸乙酯提取物的作用,设置对照组、治疗组(低剂量组、高剂量组).通过测量移植瘤体积变化绘制生长曲线,根据终末瘤质量比较计算抑制率,采用TUNEL法检测移植瘤凋亡指数,采用免疫组化法检测移植瘤Survivin蛋白表达、增殖指数,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测移植瘤Survivin mRNA变化.结果 各治疗组经藤梨根乙酸乙酯提取物治疗后移植瘤生长缓慢,治疗结束时治疗组移植瘤质量及瘤体积明显低于对照组,高、低剂量组的瘤质量抑制率分别为69.00％和45.09％.各治疗组移植瘤组织凋亡指数则明显高于对照组,而Survivin mRNA及蛋白表达较对照组明显减少,高剂量组尤其明显,各组间上述指标比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 藤梨根乙酸乙酯提取物在体内对肺癌A549细胞生长有抑制作用,可以诱导移植瘤细胞发生凋亡,促进癌细胞凋亡并下调瘤细胞Survivin蛋白和mRNA表达.
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大肠癌组织PTTG、VEGF-C表达及其与微淋巴管生成的关系
目的 探讨垂体肿瘤转化基因(PTTG)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)在大肠癌发生、发展中的作用.方法 采用RT-PCR技术及免疫组织化学法检测20份大肠正常黏膜(正常组)、80份大肠癌组织(大肠癌组)中PTTG mRNA及PTTG蛋白的表达水平；用D2-40标记微淋巴管,采用免疫组化法检测VEGF-C、D2-40表达,计算微淋巴管密度(LMVD).结果 大肠癌组PTTG、VEGF-C表达量及LMVD均明显高于正常组,且与大肠癌浸润深度、淋巴结转移、Duke's分期呈正相关.结论 PTTG与VEGF-C在大肠癌的发生发展中起重要作用,促淋巴管生成为其主要作用机制；PTTG与VEGF-C可作为判断大肠癌转移及预后的预测指标.
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COPD模型大鼠肺组织TGF-β1 mRNA的表达及意义
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在长期吸烟所致慢性阻塞性肺疾病(COPD)病理变化中的作用.方法 将大鼠随机分为对照组和模型组,分别分为1～6月组,每组6只.建立大鼠吸烟COPD模型.光镜下观察吸烟对大鼠肺组织结构的影响,RT-PCR方法检测TGF-β1.mRNA在肺组织中的表达.结果 随吸烟时间延长,肺泡腔不规则扩大,肺泡间隔破裂,有的肺泡融合成肺大泡,以吸烟6月组为明显,肺组织结构表明COPD模型建立成功.RT-PCR结果表明,TGF-β1mRNA在正常肺组织中呈微弱表达,随吸烟时间的延长,TGF-β1mRNA表达增多,5月组表达多.结论 长期吸烟可引起气道壁炎细胞浸润及肺组织形态学变化,导致COPD发生.TGF-β1表达随吸烟月份增加逐渐增多,肺组织结构破坏与TGF-β1表达有相关性,表明TGF-β1在COPD的发生和发展过程中起重要作用.
关键词： 吸烟 肺疾病 慢性阻塞性 转化生长因子β 逆转录聚合酶链式反应 -
用RT-PCR法鉴定人冠状病毒SARS、229E和OC43
目的:建立两种简单、快速和特异性的RT-PCR法鉴定SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43.方法:用DNA Star和Premier 5.0软件设计SARS-HCoV、HCoV-229E和HCoV-OC43及其它冠状病毒针对保守区Pol1 b基因的一对通用引物和分别针对M基因的3对引物,然后通过对扩增片断测序、限制性酶切方法和根据扩增片断的长度进行鉴定.结果:两种方法均能扩增到与预期目标一致的片断,特异性和灵敏度高,能快速区分3种病毒.结论:这些方法将为了解冠状病毒在呼吸道感染中的作用提供一个有利的工具.
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衢州市2011年-2013年流感病原学监测结果分析
目的 了解衢州市2011年-2013年流感流行特征和病原学特点,为预防和控制流感病毒流行提供依据.方法 采用荧光定量RT-PCR方法对疑似流感样病人标本进行核酸检测.结果 衢州市2011年-2013年间采集并检测流感样病例标本1 630份.2012年度流感病毒检测阳性率高,为25.53％,流行优势株为甲型H3亚型;2011年度检测阳性率为16.54％,流行优势株为乙型和新甲型H1亚型流行为主;2013年度检测阳性率低,为7.70％,全年成散发低强度流行,各型别均可见.结论 2011年-2013年衢州市流感病毒株的流行每年都有型别的变化,但不同年度流感流行呈现一定规律.
关键词： 流感 逆转录聚合酶链式反应 监测 -
RT-PCR/Southern杂交方法检测肝癌患者外周血AFP mRNA
目的寻找一种敏感的方法以检外外周血中的肝癌细胞.方法分离原发性肝癌患者以及肝硬化、急慢性肝炎、肝转移癌、肝脏良性肿瘤患者和健康志愿者的外周血单个核细胞,提取单个核细胞的总RAN,进行RT-PCR/Southern杂交检测AFPmRNA.结果原发性肝癌患者外周血AFP mRAN的检出率为41.4%,其检出率与肿瘤大小以及TNM分期有关,对照组均为阴性.结论肝癌患者外周血中的AFPmRNA可以作为肝癌细胞的血液微小转移的标志物.
关键词： 肝细胞癌 微小转移 AFP mRNA 逆转录聚合酶链式反应 Southern杂交 -
核因子抑制剂对眼表碱烧伤后白内障形成的影响
目的 探讨大鼠眼表碱烧伤后应用核因子抑制剂对晶状体上皮细胞(LECs)核转录因子-κB(NF-κB)mRNA表达的影响.方法 制造大鼠眼表碱烧伤模型.实验组每天给予PDTC球结膜下注射,对照组每天给予生理盐水球结膜下注射,分别于烧伤后1、3、5、7d处死大鼠,取晶状体行免疫组织化学染色及RT-PCR检测.结果 碱烧伤后1d,对照组大鼠晶状体上皮脱落,但实验组大鼠LECs完整.碱烧伤后5～7d,2个组的晶状体上皮和皮质变得致密浓缩.碱烧伤后1～3d,对照组LECs中NF-κB表达的灰度值明显低于核因子抑制剂组(t=2.836,P=0.036;t=4.932,P=0.004),但对照组NF-κB mRNA的表达(NF-κB/β-actin)明显高于核因子抑制剂组(t=31.563,P=0.000;t=17.837,P=0.000).碱烧伤5d后,2组间NF-κB及其mRNA表达量的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 眼表碱烧伤可以导致白内障的发生,在碱烧伤后早期使用核因子抑制剂对白内障的形成有一定的抑制作用.
关键词： 核因子抑制剂 白内障 碱烧伤 免疫组织化学 逆转录聚合酶链式反应 -
人婆罗双树样基因及其蛋白在儿童急性白血病中表达的意义
目的 研究人婆罗双树样基因(SALL4) mRNA及其蛋白在儿童急性白血病(AL)中的表达情况.方法 运用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对急性白血病患儿及正常对照的单核细胞进行SALL4 mRNA表达测定,运用ELISA法同步检测惠儿血清中SALL4蛋白表达水平,并对其相关性进行分析.结果 ①AL组与对照组之间SALL4 mRNA表达率比较差异有统计学意义(P＜0.05),其中急性淋巴细胞白血病组(ALL)和急性非淋巴细胞白血病(ANLL)组均明显高于正常对照组(P＜0.05),B-ALL和T-ALL之间的SALL4 mRNA表达率比较差异有统计学意义(P＜0.05),而B-ALL与ANLL组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).②B-ALL组、T-ALL组、AN-LL组、正常对照组的SALL4蛋白表达量均数分别为:136±17、33±23、151±64、55±16.③各组中的SALL4 mRNA和外周血清中的SALL4蛋白表达呈正相关(r=0.931,P＜0.01).结论 儿童AL骨髓单个核细胞中存在SALL4基因的异常高表达,与健康对照比较差异有统计学意义,提示SALL4基因参与了儿童AL的发病.儿童AL中,SALL4 mRNA及其蛋白在B-ALL和ANLL中高表达,且呈正相关；而在T-ALL和健康对照中不表达,提示儿童AL中B-ALL和T-ALL的发病机制可能不同；而B-ALL和ANLL可能存在同样的发病机制.
关键词： 儿童急性白血病 逆转录聚合酶链式反应 人婆罗双树样基因 -
活血熄风方对局灶性脑缺血大鼠血管内皮生长因子mRNA表达的影响
目的 观察活血熄风方对局灶性脑缺血模型大鼠脑梗塞体积及脑组织中血管内皮生长因子(VEGF mRNA)表达的影响.方法 Wistar雄性大鼠随机分为假手术组,模型组,活血熄风方高、中、低3个剂量组(剂量分别为20,10,5 g·kg~(-1))和尼莫地平对照组(0.02 g·kg~(-1)),采用光化学法建立局灶性脑缺血大鼠模型,造模前7d灌胃给药,造模后24 h 取材,TTC染色法测脑梗塞体积,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测VEGF mRNA表达.结果 与模型组比较,活血熄风方各剂量组的脑梗塞体积明显减少(P＜0.01),VEGF mRNA表达明显升高 (P＜0.01).结论 活血熄风方可明显减少局灶性脑缺血大鼠脑梗塞体积,具有脑保护作用,其作用机制可能与增强VEGF mRNA表达有关.
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瘦素及其受体在食管鳞癌中的表达意义
目的 探讨瘦素(leptin)及其受体(Ob- Ra、Ob-Rb)与食管鳞癌的关系,为食管鳞癌的发病机制研究提供一定的理论依据.方法 RT- PCR法检测20例正常食管和24例食管鳞癌组织中leptin、Ob-Ra、Ob- Rb的mRNA表达.结果 (1)20例正常食管组织中leptin、Ob- Ra、Ob-Rb的mRNA表达阳性率分别为50.0％、50.0％、40.0％；24例食管鳞癌组织中leptin、Ob- Ra、Ob-Rb的mRNA表达阳性率分别为79.2％、83.3％、83.3％.正常食管组与食管鳞癌组相比差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)食管鳞癌组织中leptin、Ob-Ra、Ob-Rb的mRNA相对表达量亦高于正常食管组织,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 瘦素及其受体在食管鳞癌组织中的表达阳性率和相对表达量均高于正常食管组织,提示瘦素及其受体可能在食管鳞癌的发生发展中发挥重要作用.
关键词： 食管鳞癌 瘦素 受素受体 逆转录聚合酶链式反应 -
心房颤动中钙耦联蛋白表达的实验研究
采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法研究起搏房颤(AF)模型心房肌钙耦联蛋白--L型钙通道α1c亚基和肌浆网Ca2+-ATP酶的基因表达情况以及药物的干预作用。选择成年杂种犬15条，随机分为起搏组(P组)、起搏及口服维拉帕米组(PV组)和对照组(C组)。采用心房猝发刺激诱发AF。其中P组和PV组的犬在诱发AF后置入起搏脉冲发生器作心房快速(400次/分)起搏7天。PV组的犬于起搏第2天起给予维拉帕米缓释剂120 mg/天口服。第7天再次诱发AF后将动物处死，于左、右心房和房间隔部位取材进行RT-PCR扩增。结果：心房快速起搏7天后，阵发性AF和持续性AF的发生率明显增加。而加用维拉帕米后AF的发生率和起搏前没有差异。以β-actin为内参照的RT-PCR结果显示起搏组心房肌的L型钙通道α1c亚基和肌浆网Ca2+-ATP酶的mRNA水平明显降低(和C组相比分别降低43%和40%，P<0.01)。而PV组第7天心房肌L型钙通道α1c亚基和Ca2+-ATP酶的mRNA水平和C组相比则没有显著差异(P>0.05)。心房不同部位之间的mRNA水平没有差异。结论：心房起搏AF模型中心房肌细胞钙耦联蛋白L型钙通道α1c亚基和肌浆网Ca2+-ATP酶的基因表达明显下调；钙通道阻断剂维拉帕米可预防心房电重构和心房肌钙耦联蛋白的下调。
关键词： 心房颤动 钙耦联蛋白 维拉帕米 逆转录聚合酶链式反应 犬 -
小儿肠套叠与肠道病毒感染
采用逆转录聚合酶链式反应分别对原发性肠套叠患儿和健康小儿的粪便标本进行肠道病毒核糖核酸(RNA)检测,结果4岁以上年龄组两者肠道病毒阳性率差异无显著性意义(P＞0.05),4岁以下年龄组原发性肠套叠肠道病毒阳性率37.04%,显著高于健康小儿阳性率11.11%(P＜0.01),提示肠道病毒感染可能是部分原发性肠套叠的病因之一.
关键词： 逆转录聚合酶链式反应 肠道病毒 肠套叠 -
腮腺多形性腺瘤中BMP-2基因的表达及意义
目的:检测腮腺多形性腺瘤中BMP-2基因的表达并探讨其病理意义.方法:分别抽提7例人腮腺多形性腺瘤组织标本的总RNA,应用人BMP-2 mRNA特异性引物和RT-PCR方法检测7例腮腺多形性腺瘤中BMP-2 mRNA的表达情况.结果:7例标本中有6例检测到人BMP-2 cDNA的特异性扩增条带.结论:BMP-2基因的表达可能参与腮腺多形性腺瘤中软骨样组织形成的病理过程.
关键词： 多形性腺瘤 骨形成蛋白-2 逆转录聚合酶链式反应 -
口腔黏膜下纤维性变中MMP-2基因的表达及意义
目的:检测口腔黏膜下纤维性变中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达并探讨其病理意义.方法:抽提11例口腔黏膜下纤维化组织和10例正常口腔黏膜组织的总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(PF-PCR)检测MMP-2mRNA在口腔黏膜下纤维性变患者颊黏膜中的表达并与正常口腔黏膜进行比较.结果:口腔黏膜下纤维性变患者颊黏膜组织中MMP-2 mRNA表达高于正常颊黏膜(p＜0.05).结论:MMP-2基因的表达与口腔黏膜下纤维性变组织重塑过程密切相关.
关键词： 口腔黏膜下纤维性变 基质金属蛋白酶2 逆转录聚合酶链式反应 -
MiRNA-29调控B细胞转位基因2在肝癌细胞X线照射中的作用研究
目的 探讨miRNA-29调控B细胞转位基因2(B cell translcoation gene2,BTG2)表达并初步研究二者在肝癌细胞X线照射后的作用.方法 利用miRNA芯片技术寻找肝癌HepG2与正常肝LO2细胞之间miRNAs表达差异;生物信息学软件预测靶向结合BTG2的人miRNAs;构建miRNA-29a/b/c的miRNA模拟物和miRNA抑制物,分别转染293细胞和HepG2细胞,逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测BTG2在两种细胞中的表达;在HepG2细胞中,给予2、4、8、16Gy剂量X线照射细胞48h后,实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测miRNA-29表达,Western blot检测BTG2表达.结果 利用miRNA芯片技术发现与正常肝LO2细胞相比,miRNAs在HepG2细胞中表达有显著差异,其中66个上调和88个下调,miRNA-29在HepG2细胞中表达显著低于LO2细胞;生物信息学预测发现BTG2基因可能是miRNA-29的靶基因;miRNA-29模拟物分别转染293细胞和HepG2细胞后,BTG2表达降低,而miRNA-29抑制物分别转染细胞后,BTG2表达增加;在HepG2细胞中,给予2、4、8、16Gy剂量照射细胞48h后,miRNA-29随照射剂量增加表达降低,其中16Gy照射组miRNA-29表达较未照射组(对照组)显著降低(P<0.05);BTG2表达与之相反,其表达随照射剂量增加而增高,其中16Gy照射组BTG2表达较未照射组显著性增高(P<0.05).结论 高剂量X线照射肝癌细胞后miRNA-29与BTG2表达相反,BTG2可能是miRNA-29调控直接靶基因.
关键词： 肝细胞肝癌 逆转录聚合酶链式反应 转染 X线 -
乳腺癌患者外周血EMA和EGP-2mRNA的表达及其临床意义
目的 探讨上皮膜抗原(EMA)和表皮糖蛋白基因(EGP-2)在乳腺癌患者外周血中的表达及其与肿瘤微转移的关系. 方法采用RT-PCR方法检测53例乳腺癌患者(乳癌组)和24例乳腺良性疾病患者(良性病组)EMA和EGP-2mRNA在外周血中的表达,并分析其与临床指标之间的关系. 结果乳癌组外周血EMA和EGP-2mRNA的表达率分别为33.96%和28.30%,而在良性病组外周血表达率分别为0和4.17%,差异均有统计学意义(P＜0.05).EMA和EGP-2mRNA的检出率与腋窝淋巴结转移、TNM分期等临床参数呈正相关;EMA和EGP-2mRNA联合检测敏感度和准确性在乳腺癌组分别为52.83%和66.23%,相对于EPG-2 mRNA单项检测敏感度及准确性有明显升高,但与EMA mRNA无统计学差异.结论 EMA和EGP-2联合检测时准确性明显升高,故两者可作为标志物检测乳腺癌患者外周血微转移,有可能对乳腺癌的疗效和预后判断有意义.
关键词： 乳腺肿瘤 EMA/血液 EGP-2/血液 逆转录聚合酶链式反应 -
RT-PCR检测神经母细胞瘤患儿化疗后骨髓PGP9.5 mRNA表达在预后判断中的意义
目的该研究试图阐明诱导化疗后在转录水平清除骨髓肿瘤细胞能否取得好的疗效.方法应用以PGP9.5为靶基因的逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,其敏感性为10-6个细胞,测定32例发病时组织学存在骨髓转移的神经母细胞瘤患者,测定初诊及诱导治疗结束后骨髓肿瘤细胞水平.入选病例须在诱导治疗后用免疫组织化学法测定骨髓瘤细胞阴性.结果 32例患者诊断时骨髓PGP9.5 mRNA均阳性,诱导结束后16例仍阳性,自体骨髓移植后随访3.4±0.9 年11例复发,无病生存率31%;16例阴转,骨髓移植后随诊3.2±0.7年仅有5例复发,无病生存率69%,两组无病生存率有显著性差异(P=0.018).结论诱导治疗在转录水平清除骨髓神经母细胞瘤后行自体骨髓移植可以取得较好疗效.
关键词： 神经母细胞瘤 逆转录聚合酶链式反应 PGP9.5 儿童 -
补阳还五汤和其有效部位对大鼠脑缺血再灌注后IL-1β及相关因子表达的影响
目的 研究补阳还五汤及其有效部位生物碱、苷对大鼠脑缺血再灌注后白细胞介素1β(IL-1β)及其相关因子mRNA表达的影响.方法 采用颈内动脉线栓法建立大鼠MACO再灌注模型,以逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定缺血脑组织IL-1β、IL-1R1、IL-1ra、ICAM-1 mRNA的表达.结果 脑缺血2 h再灌注22 h后,模型组IL-1β、IL-1R1、IL-1ra和ICAM-1 mRNA表达较假手术组均显著增强(P＜0.05和P＜0.01).补阳还五汤组IL-1β表达显著高于假手术组(P＜0.05),而生物碱组和苷组较模型组有所降低;补阳还五汤组IL-1R1表达较模型组显著降低(P＜0.05),而生物碱组和苷组IL-1R1表达均显著高于假手术组(P＜0.05),与模型组接近.补阳还五汤组、生物碱组和苷组IL-1ra表达均显著高于假手术组(P＜0.05和P＜0.01).补阳还五汤组、生物碱组、苷组ICAM-1表达低于模型组(P＜0.05).结论 补阳还五汤及其有效部位生物碱、苷通过抑制IL-1β、IL-1R1、ICAM-1 mRNA的表达,从而减少炎症因子及炎症介质的表达,对缺血脑组织起保护作用.各药对脑缺血后IL-1ra表达无影响.
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胃癌患者腹腔冲洗液中CEAmRNA及HpamRNA表达对判断腹腔微转移的临床意义
目的 探讨腹腔冲洗液中CEAmRNA、HpamRNA及MMP-7mRNA表达情况与腹膜微转移关系.方法 采用RT-PCR技术检测80例胃癌患者及16例胃良性肿瘤患者的腹腔冲洗液中的CEAmRNA、HpamRNA及MMP-7mRNA表达水平,并与传统的腹腔冲洗细胞学(PLC)对比分析,寻找与胃癌腹膜微转移有关的肿瘤标志物.结果 胃癌组分别与胃良性瘤组患者比较,腹腔冲洗液中CEAmRNA、HpamRNA、MMP-7mRNA表达阳性率明显增高(P＜0.05),其中CEAmRNA高,其次为HpamRNA,MMP-7mRNA的阳性率较低(P＜0.05)；CEAmRNA、HpamRNA和MMP-7mRNA这三种指标在临床分期、组织学类型、pTNM、淋巴结转移及肝转移间阳性率比较,统计分析显示均有统计学意义(P＜0.05),而在肿瘤部位方面,差异无统计学意义,随着临床分期的增加,这些肿瘤标志物的表达率也明显升高,有淋巴结及远处转移的患者较未转移的患者阳性率也明显升高；随着肿瘤浸润深度的增加,CEAmRNA、HpamRNA、MMP-7mRNA及PLC阳性率也明显增加,统计分析显示有统计学意义(P＜0.01).结论 采用RT-PCR技术检测腹腔冲洗液中的CEAmRNA及HpamRNAA表达,可以用于预测胃癌患者腹膜微转移.
关键词： 胃癌 逆转录聚合酶链式反应 CEAmRNA HpamRNA MMP-7mRNA
