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四川省首例人禽流感病例的病毒核酸检测
人禽流行性感冒是甲型流感病毒中某些亚型毒株引起的急性呼吸道疾病,目前证实感染人的主要有3个亚型(H5N1、H7N7、H9N2).
关键词： 人禽流感 逆转录聚合酶链式反应 核酸检测 -
柴胡皂苷d对肝星状细胞ERα和ERβ mRNA水平的调节
目的:研究柴胡皂苷d对大鼠肝星状细胞ERα、ERβ mRNA的调节作用,探讨其对肝纤维化的作用机制.方法:体外培养大鼠肝星状细胞系HSC-T6,采用实时荧光定量RT-PCR方法,观察柴胡皂苷d对两种雌激素受体亚型表达的影响.采用MTT法,观察雌二醇、柴胡皂苷d对HSC-T6细胞增殖的影响,并为后续实验确定合适的实验用药物剂量和用药时间.结果:柴胡皂苷d能明显提高HSC-T6细胞ERα、βmRNA表达,且呈剂量与时间依赖性,但作用较雌二醇弱,这种作用可被ER完全拮抗剂ICI-182.780抑制.通过对半数抑制率的计算,得出柴胡皂苷d和雌二醇半数抑制率(IC50)的浓度分别为5μmol/l和1μmol/l.结论:推测柴胡皂苷d有雌激素受体调节剂的作用,可能是一种雌激素调节剂.
关键词： 柴胡皂苷d 雌激素 肝纤维化 受体 逆转录聚合酶链式反应 -
鲑鱼鱼白DNA对Balb/c小鼠胸腺基因表达的影响
目的探讨鲑鱼鱼白DNA(Salmon milt DNA,SMD)对小鼠胸腺增龄性萎缩作用的分子机理.方法10月龄雌性Balb/c小鼠按体质量随机分为实验组和对照组,在常规饮食的基础上各组每日分别灌胃333.33和0 mg/kg的SMD,5周后,无菌取胸腺;应用RT-PCR和Northern blot技术检测Genebank登录号为Aw209102、U23789、X80232、NM_009678和AF083929的基因在对照组和实验组胸腺组织中的表达情况.结果Aw209102、U23789、X80232在实验组表达上调;NM_009678、AF083929在实验组表达下调.结论SMD可通过促进细胞增殖相关基因和发育、分化相关基因表达,并抑制细胞凋亡相关基因的表达而逆转胸腺增龄性萎缩.
关键词： 鲑鱼鱼白DNA 小鼠 胸腺 逆转录聚合酶链式反应 Northern blot -
神经营养因子及其受体在造血干细胞的体外表达检测
目的 体外检测神经营养因子及其受体在造血干细胞的表达情况.方法 造血干细胞由小鼠股骨的骨髓细胞培养纯化而来,并用免疫组织化学CD34+鉴定.RT-PCR的方法在mRNA水平检测造血干细胞表达神经营养因子及其受体的情况.结果 造血干细胞可以表达多种神经营养因子及其受体,包括NGF、BDNF、NT-3、EGF、PDGF、CNTF、VEGF、TGF-β1、Trk-A、TrkC,其中NGF、BDNF、NT-3、TrkC有强阳性表达;EGF、PDGF、CNTF、TGF-β1、VEGF、Trk-A有表达但相对较NGF、BDNF、NT-3、TrkC弱;GDNF、IGF-1及TrkB无表达.结论 造血干细胞能不同程度的表达多种重要的神经营养因子及其相关受体,可能是一种潜在的移植治疗中枢神经系统损伤的良好细胞来源.
关键词： 造血干细胞 逆转录聚合酶链式反应 神经营养因子 -
子宫内膜癌淋巴结细胞角蛋白20mRNA的表达
目的:探讨子宫内膜癌淋巴结CK20 mRNA的表达对于淋巴结微转移的临床意义.方法:应用巢式RT-PCR方法检测17例内膜癌患者淋巴结组织中CK20 mRNA的表达情况,并用系列稀释法检测其敏感性.结果:17例内膜癌共检测92枚淋巴结,常规病理检查和CK20 mRNA检测淋巴结转移的检出率分别为7.6%和16.3%,两者差异有显著性(P＜0.05).常规病理检查阴性的淋巴结中,RT-PCR法检测到9.4%(8/85)的淋巴结有微转移.本方法的敏感性达10-6 μg癌细胞RNA.结论:巢式RT-PCR检测内膜癌淋巴结CK20 mRNA的表达有助于发现淋巴结微转移,对于内膜癌的分期、治疗及预后判断具有一定指导意义.
关键词： 子宫内膜癌 淋巴转移 细胞角蛋白 逆转录聚合酶链式反应 -
蛋白激酶C抑制剂对人非小细胞肺癌细胞株药物敏感性的影响
背景与目的 蛋白激酶C(PKC)在癌变过程中的作用使其成为肿瘤治疗的潜在重要靶点.非小细胞肺癌(NSCLC)中存在PKC-α的异常表达和活性增高,PKC抑制剂能通过诱导肿瘤细胞凋亡、增强细胞毒作用及下调多药耐药基因的表达而发挥其抗肿瘤作用.通过观察PKC抑制剂白屈菜红碱(CH)对四种人NSCLC细胞株药物敏感性的影响,初步探讨其作用机制.方法 以PKC抑制剂CH分别处理四种NSCLC细胞株H1299、H460、A549及耐顺铂A549细胞株,逆转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)及蛋白印迹法(Western blot)检测PKC-α的mRNA及蛋白表达水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞株对顺铂药物敏感性.结果 用药前A549/DDP细胞株中PKC-α mRNA及蛋白的表达水平高于NSCLC细胞株H1299、H460及亲本A549细胞株(P＜0.05),CH处理后四种NSCLC细胞株中PKC-αmRNA及蛋白的表达水平均有不同程度的下降,CH处理4 h及24 h后H1299、H460、A549细胞株的凋亡率无明显增加,仅A549/DDP细胞株的凋亡率明显增加,用药后NSCLC细胞株对顺铂的药物敏感性即IC50值有不同程度的下降,以A549/DDP细胞株降低更为明显(P＜0.05).结论 四种NSCLC细胞株中存在PKC-αmRNA及蛋白的高表达.通过抑制NSCLC细胞株中PKC-α mRNA及蛋白的表达,PKC抑制剂CH能增加其对顺铂的药物敏感性.与亲本A549细胞株相比,PKC抑制剂CH能通过抑制耐顺铂A549细胞株中PKC-α蛋白的表达及增加细胞凋亡率,而更有效地增加其对顺铂的药物敏感性.
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COX-2反义核酸对H1299细胞增殖及顺铂敏感性的影响
背景与目的目前已知环氧化酶-2(COX-2)在非小细胞肺癌(NSCLC)的浸润、发展及转移中有重要意义,抑制COX-2的表达可能抑制NSCLC的发生及发展.用反义COX-2重组载体转染高表达COX-2的人非小细胞肺癌细胞株H1299,观察其对H1299细胞的生长抑制作用及顺铂敏感性的影响.方法通过脂质体介导将COX-2反义核酸质粒转入H1299细胞,经氨基糖苷磷酸转移酶(Geneticin,G418)筛选获得稳定表达COX-2反义核酸的NSCLC转染细胞系;采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测COX-2 mRNA的表达水平;应用蛋白质印迹分析(Western Blot)技术检测COX-2蛋白表达水平的变化;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测COX-2反义核酸对H1299细胞增生的影响及其对H1299细胞的顺铂敏感性的影响.结果反义COX-2基因转染后的H1299细胞中COX-2 mRNA表达水平明显下调,COX-2蛋白表达水平明显减低.转染后的H1299细胞的生长速率明显下降(P＜0.05),对顺铂的半数存活浓度(IC50)值由转染前的3.8mg/l降低为1.8mg/l(P＜0.05).结论 COX-2反义核酸导入不仅可抑制H1299细胞的增生,而且可增加H1299细胞对顺铂的敏感性.
关键词： 环氧化酶-2 H1299 肺肿瘤 逆转录聚合酶链式反应 反义核酸 -
外周血Mfn2基因表达检测在乳腺癌诊断中的意义
目的 探讨线粒体融合蛋白2 (Mfn2) mRNA在乳腺癌患者外周血中的表达及意义.方法 收集62例乳腺癌患者和25例健康人外周静脉血和组织病理学标本,提取总RNA,检测Mfn2 mRNA以及乳腺癌组织中表皮生长因子受体(EGFR)的表达.结果0～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期乳腺癌患者外周血中Mfn2 mRNA阳性率比较,差异有统计学意义(P＜0.05);健康人外周静脉血中Mfn2 mRNA的表达为100％,明显高于其在乳腺癌患者外周血中的表达(P＜0.05);乳腺癌患者组织病理学标本中,EGFR阳性34例,其中外周血Mfn2 mRNA阳性者12例;EGFR阴性28例,其中外周血Mfn2 mRNA阳性者17例.EGFR阳性患者中Mfn2 mRNA的表达率明显低于EGFR阴性者(P＜0.05).结论 乳腺癌患者外周血中Mfn2 mRNA表达阳性率与肿瘤分期、转移和EGFR表达有关.RT-PCR法检测乳腺癌患者外周血Mfn2 mRNA可能有望成为检测乳腺癌细胞微转移的有效方法.
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白血病患者白细胞中分化抑制因子Id2mRNA的表达
目的:探讨分化抑制因子Id2基因在白血病白细胞中的表达状况.方法:应用KT-PCR半定量分析16例急性非淋巴细胞白血病(ANLL),10例慢性粒细胞白血病(CML)白细胞中Id2的mRNA表达水平.结果:Id2基因在急性非淋巴细胞和慢性粒细胞白血病患者外周血白细胞中的表达水平均增高,有统计学意义(P<0.05),但两者间比较无统计学意义.结论:Id2基因在白血病细胞中的表达明显增高,可能与白血病的发病有一定相关性.
关键词： Id2基因 白血病 白细胞 逆转录聚合酶链式反应 -
分化抑制因子Id1基因在白血病细胞中的表达及意义
目的:研究分化抑制因子-1(inhibitors of differentiation,Id1)在白血病白细胞中的表达,探讨其与急性非淋巴细胞和慢性粒细胞白血病发病的相关性,为白血病的诊断、治疗提供参考.方法:应用KT-PCR.方法,检测Id1在健康志愿者、急性非淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病白细胞中的表达情况.结果:与健康自愿者相比,Id1基因在急性非淋巴细胞和慢性粒细胞白血病患者外周血白细胞中的表达均降低,有统计学意义(P<0.05),而后两者比较无统计学意义.结论:Id1在白血病细胞中的表达明显降低,与白血病的发病有一定相关性.
关键词： Id1基因 白血病 白细胞 逆转录聚合酶链式反应 -
IL-6调节miR-21在激素抵抗性前列腺癌中的机制研究
目的 检测转染微核糖核酸-21抑制剂(miR-21-inhibitor)前后前列腺癌细胞PC3在不同白细胞介素-6(IL-6)浓度下微核糖核酸-21(miR-21)的表达情况,细胞的增殖能力及雄激素受体(AR),转录信号诱导和激活者3(STAT3)水平.分析IL-6和miR-21在前列腺癌非依赖性进程中的作用及意义.方法 通过RT-PCR检测不同IL-6浓度培养下非依赖性细胞系PC3在转染miR-21前后miR-21的表达情况.通过CCK-8检测转染前后细胞的增殖能力.通过western blot检测不同IL-6浓度培养下PC3细胞AR,STAT3的表达情况.结果 转染miR-21能显著的抑制前列腺癌细胞miR-21的表达量,并抑制前列腺癌细胞的增殖.IL-6在短期促进PC3细胞的增殖,并且诱导miR-21的高表达.IL-6短期能够诱导PC3细胞系AR,STAT3高表达.结论 IL-6在非依赖性前列腺癌的进展中起重要作用,长期培养下IL-6对前列腺癌细胞系的作用需要进一步研究.miR-21与前列腺癌的恶性程度及依赖性相关,在前列腺癌的非依赖性进程中起重要作用,miR-21有希望成为非依赖性前列腺癌的一个潜在治疗靶点.IL-6可以诱导miR-21高表达,AR,STAT3在这一通路中起重要作用.
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外周血EGFR mRNA在膀胱癌中的表达及在微转移中的意义
目的: 探讨表皮生长因子受体( Epidermal growth factor receptor,EGFR) mRNA在膀胱移行细胞癌(transitional cell carcinoma,TCC)患者外周血中的表达及意义. 方法: 收集62例膀胱移行细胞癌患者外周静脉血及癌组织标本,提取总RNA,行RT-PCR,检测EGFR mRNA的表达.25例健康人外周静脉血标本作为对照.结果: 62例膀胱TCC组织标本中,EGFR mRNA在组织中平均阳性率72.6 % (45/62).在Tis-1、T2、T3、T4期膀胱TCC患者组织中EGFR mRNA阳性率分别为57.1%、62.5%、85.7%、100 %;在Tis-1、T2、T3、T4期膀胱TCC患者外周血中EGFR mRNA阳性率分别为14.3%、25.0%、78.6%、90.9%.在组织和外周血中低分期(Tis-1、T2)与高分期(T3、T4)膀胱TCC表达EGFR mRNA阳性率差异有显著性(P＜0.01).在25例健康人外周静脉血中均未发现EGFR mRNA的表达.结论: 膀胱TCC组织及外周血中EGFR mRNA表达阳性率与肿瘤分期、是否转移呈相关性.RT-PCR法检测膀胱TCC患者外周血EGFR mRNA有望成为检测膀胱肿瘤细胞循环内微转移的有效方法.
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Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA在门脉高压症病人脾静脉壁的表达及意义
目的研究Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA在门脉高压症时脾静脉壁的表达,探讨细胞外基质在门脉高压性血管病变发生中的作用.方法试验组为乙肝后肝硬化门脉高压症病人18例,男12例,女6例,平均年龄48.5岁.住院期间行择期脾切除加贲周血管离断术.选取同济医院同期因外伤性脾破裂急诊入院行脾切除术患者10例,男7例,女3例,平均年龄31岁.采用逆转录聚合酶链反应检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA在门脉高压症时脾静脉壁的表达.结果门脉高压症时脾静脉壁(α1)Ⅲ型前胶原mRNA表达明显增高(P＜0.01),但门脉高压症病人脾静脉壁(α1)Ⅰ型前胶原mR-NA表达与非门脉高压症病人相比差异无显著性意义(P＞0.05).结论Ⅲ型前胶原及胶原可能是门脉高压症时导致血管构形改建的重要细胞外基质,门脉高压性血管病变可能存在着与其他系统血管病变不同的发病机制.
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PAR-2在人胰腺肿瘤细胞中的表达及其相关机制的研究
目的:通过对蛋白酶激活受体-2(PAR-2)在人胰腺癌细胞及癌旁组织中表达态势的研究,以期明确PAR-2在胰腺癌中表达特点,并探索其相关机制.方法:收集胰腺癌标本,采用免疫组织化学(SP法)检测胰腺癌PAR-2基因的表达;培养胰腺癌细胞,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测胰腺癌PAR-2基因的表达.结果:胰腺癌组PAR-2 mRNA的表达高于对照组(P<0.01).PAR-2在胰腺癌中的表达与患者年龄、性别无关(P>0.05),但癌细胞远处转移者显著高于无转移者(P<0.01).结论:胰腺癌的发生与发展与PAR-2正相关.PAR-2在胰腺癌中的表达与患者年龄、性别无关;但与淋巴结转移正相关.
关键词： 胰腺癌 蛋白酶激活受体-2 SP法 逆转录聚合酶链式反应 表达 -
多种探针的RT-PCR检测H5N1病原体方法的建立及应用
目的：建立与应用多种探针的 RT-PCR分析 H5N1病原体的检测方法体系。方法通过 GenBank发表的基因序列分析，针对保守区分别设计并合成2对特异性引物（P1/P2，P3/P4）。通过对扩增条件的优化，建立了检测两种病毒的快速双重PCR方法。结果合适引物浓度：P1/P2为0.32μmol/L，P3/P4为0.96μmol/L。双重检测的小病毒核酸量为2 ng/μl，H5N1病原体混合液在相对应位置出现特异性条带，而其他病毒及空白对照均未出现条带。结论多种探针的RT-PCR分析对于 H5N1病原体检测方法在合理引物浓度的应用下具有很好的敏感度与特异度，值得在检验中推广应用。
关键词： 探针引物 逆转录聚合酶链式反应 H5N1 病原体 引物浓度 -
HMG-B1在人胃癌及周边组织中的表达研究及其克隆和序列分析
目的 研究比较人胃癌及癌周边组织中高迁移率族蛋白-1(high mobility group box 1,HMG-B1)的表达量变化,克隆人肿瘤HMG-B1基因并对其进行序列分析.方法 用半定量逆转录聚合酶链式反应(reverse transcript polymerasechain reaction,RT-PCR)检测HMG-B1的表达量,并同时利用内参18S rRNA对肿瘤及其周边组织的HMG-B1表达量进行比较.克隆人胃癌组织HMG-B1后,进行序列测定及分析.结果 HMG-B1在肿瘤组织和癌旁组织中的表达量显著高于远端正常组织;对实验数据进行统计学分析,差异有显著性(P<0.05).克隆出的一特异基因产物与}IMG-B1预期长度678 bp相符.测序结果与GenBank中报道序列同源性为89%.结论 实验证实了文献报道的GMG-B1在肿瘤组织和癌旁组织中表达水平会升高,进而有可能作为肿瘤的诊断、生长、转移及预后的重要判定指标.成功获得了人胃癌组织HMG-B1基因编码序列,为进一步研究打下基础.
关键词： HMG-B1 癌组织 逆转录聚合酶链式反应 mRNA 基因克隆 -
慢性阻塞性肺疾病患者血清胞浆型磷脂酶A2α基因和表达水平检测的临床意义
目的：探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者检测胞浆型磷脂酶 cPLA2α（cPLA2α）基因表达水平的临床意义。方法选取收治的 COPD 患者90例，按照 COPD 严重程度分级标准分为轻度组30例，中度组35例和重度组25例，以同期90例肺功能正常的健康体检者为对照组。用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测受试者血清中 cPLA2α含量，同时用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测同组患者 cPLA2α基因表达水平。结果 COPD 轻度组 cPLA2α的含量为（0.0392±0.0051）pg／ml，表达为（0.68±0.01）；中度组含量为（0.049 8±0.0074）pg／ml，表 达为（0.92±0.02）；重度组含量为（0.0554±0.0081）pg／ml，表达为（1.35±0.02）；而对照组含量为（0.0102±0.0066）pg／ml，表达为（0.11±0.01）。无论是 cPLA2α血清学水平还是基因表达水平，四组之间差异均有统计学意义（F ＝8.643，12.415，P ＜0.05）。且 COPD 各组随着病变程度加重 cPLA2α的水平逐渐增加，且三组彼此比较差异有统计学意义（t＝3.013～5.817，5.039～11.667，P 均＜0.05）。结论血 cPLA2α水平可预示 COPD 严重程度，cPLA2α是诊疗 COPD 及分级的新靶标。
关键词： 胞浆型磷脂酶 A2α 逆转录聚合酶链式反应 慢性阻塞性肺疾病 -
IGF-IR反义基因片段真核表达载体的构建
目的构建人胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-IR)的反义真核表达载体.为肿瘤的IGF-IR反义基因治疗研究创造条件.方法设计含有BamH1和HindⅢ酶切位点的一对引物,通过逆RT-PCR获得IGF-IR cDNA片段.经过纯化的hIGF-IR cDNA和空载体pcDNA3.1(-)经过BamH1和HindⅢ双酶切,连接,转化,鉴定而得到重组体.结果反义基因重组体经过BamH1和HindⅢ双酶切后,得到700bp和5.4kb两条带;以重组体为模板进行PCR检测,700bp的目的基因片段呈现强阳性;重组体测序的结果与预期结果完全一致.结论成功构建了hIGF-IR的反义真核表达载体.
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逆转录PCR在泌尿生殖道沙眼衣原体药敏试验中的应用
目的 将逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)应用于沙眼衣原体药物敏感性实验,对沙眼衣原体的药敏实验进行优化.方法 将经McCoy细胞培养法检测出的40例沙眼衣原体临床株,传代培养至感染率达90％以上,进行多西环素的药敏实验.采用传统碘染方法和RT-PCR法来测定多西环素药物的MIC值.采用t检验比较两种方法的区别.结果 采用RT-PCR测定的MIC值要高于传统碘染方法(P＜0.05).结论 用RT-PCR代替传统碘染方法能够提高沙眼衣原体体外药物敏感实验的敏感性,有助于临床医生在临床治疗失败病例中更好地寻找耐药菌株.
关键词： 沙眼衣原体 逆转录聚合酶链式反应 热休克蛋白60 多西环素 药敏试验 -
组蛋白去乙酰化酶1、3在炎症牙周膜中的表达
目的:比较组蛋白去乙酰化酶1、3在炎症牙周膜和健康牙周膜中的表达差异.方法:分别收集炎症牙周膜和健康牙周膜,采用RT-PCR方法分别检测组蛋白去乙酰化酶1、3的mRNA表达,以管家基因作为内参,进行灰度值比较.结果:与健康牙周膜相比,炎症牙周膜中组蛋白去乙酰化酶1、3mRNA的表达均显著升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:炎症牙周膜组织中组蛋白去乙酰化酶1、3表达升高,提示其可能参与牙周炎症反应的基因调控.
关键词： 组蛋白去乙酰化酶 牙周膜 牙周炎 逆转录聚合酶链式反应
