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疏肝和胃降逆汤对胃食管反流病肝胃不和证患者食管黏膜蛋白酶激活受体-2及环氧合酶-2蛋白表达的影响
目的:探讨疏肝和胃降逆汤对胃食管反流病(GERD)肝胃不和证患者食管黏膜蛋白酶激活受体-2(PAR-2)及环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达的影响.方法:选取2015年1月至2016年1月辽宁中医药大学附属医院收治GERD患者178例作为研究对象,以随机数表法分为观察组和对照组,每组89例.2组均给予奥美拉唑肠溶片治疗,观察组在此基础上给予疏肝健脾和胃方治疗.观察2组基线期和治疗后12周(治疗后)反流性疾病问卷(RDQ)症状积分及食管黏膜PAR-2及COX-2蛋白表达变化.结果:基线期,2组RDQ症状积分、食管黏膜PAR-2及COX-2蛋白表达基本相同,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,观察组RDQ症状积分、食管黏膜PAR-2及COX-2蛋白表达显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).观察组RDQ症状积分与食管黏膜PAR-2及COX-2蛋白表达正相关(P<0.05),对照组RDQ症状积分与食管黏膜PAR-2及COX-2蛋白表达无明显相关性(P>0.05).结论:奥美拉唑肠溶片联合温阳活血汤治疗胃食管反流病肝胃不和证具有较好的疗效,其机制可能是通过降低患者食管黏膜PAR-2及COX-2蛋白表达而起治疗作用.
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补中益气汤对便秘型肠易激综合征血液学 及肠敏感度的影响
目的:观察方药补中益气汤在治疗便秘型肠易激综合征的临床疗效,并分析其对患者相关指标的影响.方法:选取2016年1月至2016年12月武汉市中西医结合医院消化内科门诊及住院的便秘型肠易激综合征患者90例,通过随机数字法随机分为观察组和对照组,每组45例.在基础治疗的同时,对照组予以双歧杆菌三联活菌胶囊口服,观察组加补中益气汤口服,2组均治疗8周.治疗前后抽取血液测定血清内P物质(Substance P)、血浆生长抑素(Somatostatin,SS),神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY).通过肠镜下取结肠黏膜组织,运用荧光定量PCR测定其蛋白酶激活受体-2水平,同时进行肠敏感度的评定及临床疗效分析.结果:治疗后观察组总有效率(88.89％)优于对照组(77.78％)(P<0.05).2组肠道敏感度均较治疗前明显改善(P<0.05),且观察组腹痛、腹胀、腹泻评分改善程度明显优于对照组(P<0.05).同时治疗后2组患者的血清SP、SS水平及肠黏膜PAR-2表达均降低,而血清NPY水平升高,且观察组改善程度优于对照组(P<0.05)结论:脾胃虚弱证便秘型肠易激综合征患者口服补中益气汤可以有效的改善其临床症状.
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蛋白酶激活受体-2与消化系统疾病的研究进展
蛋白酶激活受体-2(protease activated receptor-2,PAR-2)属于G蛋白耦联受体,具有蛋白酶受体家族较特异的分子结构与激活方式,广泛分布于胃肠道,可被多种蛋白酶激活,产生多种生物学效应,包括影响多种消化腺的分泌,具有胃黏膜保护作用,影响胃肠道运动,参与胰腺炎的发生、发展,与消化道恶性肿瘤密切相关.PAR-2与消化系统疾病的关系正成为当前研究的一个热点.
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蛋白酶激活受体-2激动剂在应激性溃疡中的作用
目的:探讨大鼠蛋白酶激活受体-2在应激性溃疡中的作用.方法:建立大鼠水浸束缚应激模型,肉眼计算胃黏膜溃疡指数(UI);取动脉血和胃液做血气分析计算胃黏膜内pH值(pHi);应用分光光度计检测胃黏膜氨基己糖;采用放射免疫方法检测血浆中6-酮前列腺素F1α(6-K)和血栓素B2(TXB2);观察胃组织病理形态学变化.结果:PAR-2激动剂组pHi(4.71±0.23 vs 4.53±0.11,P＜0.05)、氨基己糖(5.26±1.48 g/kgvs 1.19±0.58 g/kg,P＜0.05)、6-K(856.92±165.21 ng/L vs 654.50±221.31 ng/L,P＜0.05)高于阴性对照组,TXB2(338.67±12.91 ng/Lvs 378.89±15.10 ng/L,P＜0.05)、UI(37.50±24.42 vs 69.00±33.27,P＜0.05)低于阴性对照组.除6-K(856.92±165.21 ng/L vs 687.60±219.50 ng/L,P＜0.05)外,PAR-2激动剂组与奥美拉唑组相比其他参数差异无统计学意义(P＞0.05),并且两组病理形态学观察均表现为无明显血栓形成.结论:蛋白激酶受体-2激动剂通过促进胃黏液分泌、舒张血管起到保护胃黏膜的作用,其机制可能是激活辣椒素敏感性感觉神经元.
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RANTES对类胰蛋白酶引起的肥大细胞蛋白酶激活受体-2表达和白细胞介素-4释放的影响
目的检测 RANTES 对类胰蛋白酶引起的肥大细胞白细胞介素-4(interhukin-4,IL-4)分泌和蛋白酶激活受体 (protease activated receptor,PAR)-2表达的影响.方法 P815肥大细胞培养后,用不同浓度的RANTES、类胰蛋白酶单独或联合激发肥大细胞,不同时间点收集激发细胞和上清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中IL-4水平,用流式细胞术检测P815肥大细胞表面PAR-2的表达.结果 RANTES单独作用对肥大细胞IL-4分泌无明显影响,而类胰蛋白酶单独作用则以浓度依赖方式促进肥大细胞IL-4I释放(P<0.01);RANTES或类胰蛋白酶单独作用对肥大细胞PAR-2表达均无明显影响(P>0.25).以RANTES预处理肥大细胞,则类胰蛋白酶促进肥大细胞IL-4释放的作用被显著抑制(P<0.01):而类胰蛋白调节的肥大细胞PAR-2表达显著增强(P<0.01).结论 RANTES 抑制类胰蛋白酶引起的肥大细胞IL-4分泌可能是通过RANTES增强类胰蛋白酶调节PAR-2表达而实现.
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蛋白酶激活受体-2在重症急性胰腺炎中的作用
目的 探讨蛋白酶激活受体-2(PAR-2)在大鼠重症急性胰腺炎病理损害中发挥的作用.方法 由大鼠胰胆管逆行注射3.5%牛磺胆酸钠,制作坏死性胰腺炎模型.36只大鼠被随机分为对照组、胰腺炎组、胰腺炎+皮下活化肽组(给药组),造模后3 h取材.免疫组化方法测定造模前后胰腺组织PAR-2表达情况变化;胰腺损害程度采用病理评分评价;测定胰腺组织湿/干重比、髓过氧化物酶含量,通过股静脉注射Evans blue(EB)测定EB漏出率;ELISIA方法测定血清IL-6水平.结果 正常胰腺组织胞浆及胞膜弱表达PAR-2,造模后表达升高.给药组病理评分、湿/干重比、髓过氧化物酶含量、Evans blue漏出率、血清IL-6水平明显低于胰腺炎组,胰腺病理评分与IL-6之间存在相关关系.结论 诱导重症急性胰腺炎后胰腺PAR-2表达升高,PAR-2可明显减轻胰腺炎症程度,对胰腺局部损害起保护作用.
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宫颈癌组织PAR-2和MMP-2表达及其与侵袭转移关系的研究
目的:探讨蛋白酶激活受体-2(PAR-2)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在正常宫颈组织、宫颈原位癌、宫颈浸润癌组织中的表达及临床意义.方法:采用免疫组化SP法分别检测PAR-2、MMP-2在15 例正常宫颈组织,20例宫颈原位癌组织,70例宫颈浸润癌组织中的表达.结果:PAR-2及MMP-2在宫颈浸润癌组织中阳性表达率分别为45.71％及71.43％,明显高于宫颈原位癌及正常宫颈组织(P＜0.01),PAR-2在宫颈癌盆腔淋巴结转移组和未转移组中的阳性表达率分别为72.41％和26.83％,MMP-2的阳性表达率分别为93.10％0和56.10％,两组比较差异有统计学意义,P＜0.01.结论:PAR-2 及MMP-2与宫颈癌的侵袭和淋巴结转移密切相关.
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蛋白酶激活受体-2在皮肤色素沉着中的作用
皮肤色素沉着在很大程度上受黑素小体向角质形成细胞内转运和再分布、降解的影响.而目前发现黑素小体转运的重要调节剂是蛋白酶活性受体2(PAR-2),上调或下调PAR-2活性可提高或减少黑素体转运并影响色素沉着.应用蛋白酶激活受体-2抑制剂在治疗皮肤色素沉着疾病上有重要意义.
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银杏达莫注射液对机械通气所致肺损伤大鼠蛋白酶激活受体-2表达的影响
目的 观察银杏达莫注射液对机械通气相关性肺损伤(VILI)肺组织蛋白酶激活受体-2(PAR-2)表达的影响.方法 21只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、过度通气组、银杏达莫干预组,每组7只.所有大鼠均行气管切开插管、右颈总动脉穿刺置管术;对照组不进行机械通气;过度通气组及银杏达莫组大鼠气管插管外接动物呼吸机,通气3h.银杏达莫干预组大鼠于实验前24 h腹腔注射银杏达莫注射液1.6 mL/kg,机械通气开始时尾静脉注射等剂量银杏达莫注射液.制模成功后测定大鼠血清肿瘤坏死因子-oα (TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)水平;取肺组织,光镜下观察病理学变化并进行损伤病理评分,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组化法检测肺组织PAR-2的mRNA和蛋白表达水平;用Pearson相关性分析法分析肺组织PAR-2 mRNA和蛋白表达水平与细胞因子含量的相关性.结果 与对照组比较,过度通气组TNF-α、IL-8、肺组织病理学评分及PAR-2 mRNA和蛋白[吸光度(A)值]表达水平均较对照组明显升高[TNF-α(ng/L):394.37±45.72比127.34±14.83,IL-8 (ng/L):407.58±22.54比167.28±16.81,病理学评分(分):12.14±1.57比1.00±0.82,PAR-2 mRNA(灰度值):1.249±0.095比0.513±0.049,PAR-2蛋白(A值):167.84±5.61比107.84±1.57;与过度通气组比较,银杏达莫干预组TNF-α、IL-8、肺组织病理学评分及PAR-2 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(分别为334.59±10.27比394.37±45.72、374.76±13.86比407.58±22.54、10.57±0.98比12.14±1.57、1.133±0.095比1.249±0.095、158.44±7.82比167.84±5.61),差异均有统计学意义(均P＜0.05).光镜下过度通气组肺组织结构破坏,肺泡腔内大量出血,肺泡壁见明显充血和炎症细胞浸润,伴有不同程度肺泡腔实变和肺不张;银杏达莫干预组肺组织病理结构改变较过度通气组有一定程度的改善.相关分析显示:PAR-2 mRNA与TNF-α、IL-8呈正相关(r值分别为0.971、0.969,均P＜0.001);PAR-2蛋白与TNF-α、IL-8亦呈正相关(r值分别为0.958、0.980,均P＜0.001).结论 银杏达莫注射液可能通过抑制炎性因子及PAR-2的表达而对VILI过程中肺组织产生保护作用.
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PAR-2和COX-2在不同类型胃食管反流病患者病变组织中表达及与患者血清炎性因子水平关系
目的：探讨蛋白酶激活受体-2（PAR -2）和环氧合酶-2（COX -2）在不同类型胃食管反流病（GERD）患者病变组织中表达及与患者血清炎性因子水平的关系。方法选取GERD 患者127例，其中糜烂性食管炎组41例，Barrett 食管组43例，非糜烂性反流病组43例，另选取同期内镜检查正常者40例作为对照组，应用 RT - PCR 技术检测各组食管组织中PAR -2 mRNA 和 COX -2 mRNA 表达情况，利用 ELISA 法检测血清 IL -1β、IL -6、IL -8和TNF -α水平，利用 Pearson 相关分析对变量间相关关系进行分析。结果各患者组病变组织中 PAR -2 mRNA 和 COX -2 mRNA 相对表达量均明显高于对照组（ P 均<0.05），Barrett食管组和糜烂性食管炎组病变组织中 PAR -2 mRNA 和 COX -2 mRNA 相对表达量均明显高于非糜烂性反流病组（P 均<0.05），且 Barrett 食管组病变组织中 COX -2 mRNA 相对表达量高于糜烂性食管炎组（P <0.05）。各患者组血清 IL -1β、IL -6、IL -8和 TNF -α水平均明显高于对照组（P 均<0.05），Barrett 食管组和糜烂性食管炎组血清 IL -1β、IL -6、IL -8和 TNF -α水平均明显高于非糜烂性反流病组（ P 均<0.05），且 Barrett 食管组血清 IL -8水平明显高于糜烂性食管炎组（P <0.05）。Pearson 相关分析显示，GERD 患者病变组织中 PAR -2 mRNA 和COX -2 mRNA 相对表达量均与血清 IL -1β、IL -6、IL -8和 TNF -α水平呈正相关。结论 PAR -2和 COX -2在GERD 患者病变组织中呈高表达，且与患者血清炎性因子水平呈正相关，提示炎性反应可能参与了 GERD 的发生及发展过程。
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小檗碱对DRG中PDN相关因子影响
目的 探讨小檗碱对糖尿病并发症痛性糖尿病神经病变(PDN)发生过程中背根神经节(DRG)中PPARβ、PAR-2、TRPV4、P2X3、nNOS表达的影响.方法 采用高糖及加入小檗碱处理原代培养的DRG神经元,Western blot及Real-time PCR法检测DRG中PPARβ、PAR-2、TRPV4、P2X3、nNOS的mRNA及蛋白表达水平.结果 高糖培养组中PPARβ、TRPV4的蛋白和mRNA表达高于对照组(P＜0.05),加入小檗碱后,mRNA水平下降;PAR-2、P2X3、nNOS mRNA表达低于对照组(P＜0.05),加入小檗碱后,mRNA水平上升;PPARβ、PAR-2、PAR-2、P2X3、nNOS蛋白表达水平升高(P＜0.05),加入小檗碱后,蛋白表达水平降低.结论 小檗碱能使高糖引起的DRG的PPARβ、PAR-2、TRPV4、P2X3、nNOS的蛋白和mRNA水平的改变趋向恢复至正常,有助于维持神经元正常功能.
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PAR-2在人胰腺癌细胞中的表达及吉西他滨的干预作用
目的 通过研究蛋白酶激活受体-2(proteinase activated receptor-2,PAR-2)在人胰腺癌细胞中的表达态势,明确PAR-2在胰腺癌中的表达特点,并通过RT-PCR观察吉西他滨对胰腺癌细胞中PAR-2 mRNA表达的影响.方法 培养人胰腺癌细胞,收集人正常胰腺组织;设立五组:cancer组(胰腺癌细胞阳性对照组)、Gao组(吉西他滨给药浓度50 μg/ml干预胰腺癌细胞)、Zhong组(吉西他滨给药浓度5 μg/ml干预胰腺癌细胞)、Di组(吉西他滨给药浓度0.5 μg/ml干预胰腺癌细胞)及normal组(正常胰腺组织阴性对照组).RT-PCR实验观察各组PAR-2 mRNA的相对表达量.结果 以Quantity one分析软件对实验结果进行分析,试验重复3次.cancer组、Di组、Zhong组、Gao组中细胞PAR-2 mRNA的相对表达量均高于normal组(P<0.001),cancer组>Di组、Zhong组、Gao组>normal组;但是Gao组、Zhong组、Di组三组间的相对表达量无显著性差异(P>0.05).结论 PAR-2 mRNA在胰腺癌细胞高表达,胰腺癌的发生与发展与PAR-2正相关.吉西他滨能够降低胰腺癌细胞PAR-2 mRNA的表达率,可能是吉西他滨治疗胰腺癌的作用机制之一,但本实验未发现吉西他滨对PAR-2 mRNA表达的干预作用与剂量有关.
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蛋白酶激活受体-2在胃间质瘤组织中的表达及其临床意义
目的 探讨蛋白酶激活受体-2(Protease activated receptor-2,PAR-2)在胃间质瘤组织中的表达及其与胃间质瘤临床病理特征之间的相关性.方法 采用RT-PCR、Western blot及免疫组化法检测PAR-2在72例胃间质瘤患者的瘤中心组织、瘤旁组织及正常胃组织中的表达,并分析其与胃间质瘤临床病理特征之间的相关性.结果 瘤旁组织和瘤中心组织中PAR-2基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显高于正常组织(P＜0.05或P＜0.01),瘤中心组织中的表达水平明显高于瘤旁组织(P＜0.01).瘤中心组织中PAR-2基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均随着NIH分级的升高而上调(P＜0.05或P＜0.01),且与黏膜受侵情况密切相关(P＜0.05).结论 胃间质瘤组织中PAR-2的表达水平明显高于瘤旁组织和正常胃组织,PAR-2的高表达可能与间质瘤的侵袭与转移相关.
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肥大细胞及蛋白酶激活受体-2与肝纤维化
近年来研究表明肥大细胞与肝纤维化的发生发展有密切关系,但其具体作用途径不甚明确,目前推测肥大细胞可能通过蛋白酶激活受体-2途径在肝纤维化中发挥重要作用.现将肥大细胞、蛋白酶激活受体-2与肝纤维化的有关进展作一综述.
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角质形成细胞PAR-2基因siRNA的筛选
目的 设计并筛选能高效抑制人角质形成细胞膜上蛋白酶激活受体-2(PAR-2)基因表达的小干扰RNA(siRNA)序列.方法 根据人PAR-2 mRNA的序列,设计合成3对针对靶基因的不同siRNA.应用脂质体Lipofectamin 2000转染试剂,将3对siRNA转染人角质细胞,半定量RT-PCR技术检测PAR-2mRNA表达水平、Western blot检测PAR-2蛋白表达,以评价干扰效果.结果 设计合成的3对PAR-2 siRNA中有2对siRNA可有效抑制PAR-2基因表达,以第2对siRNA效果为佳.结论 成功设计合成特异且高效阻断PAR-2表达的siRNA,为进一步应用RNAi技术沉默PAR-2基因奠定实验基础.
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烟曲霉菌提取物对人支气管上皮细胞粒-巨噬细胞集落刺激因子表达的影响
目的:探讨烟曲霉菌对呼吸道上皮细胞的粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)表达的影响及其可能机制.方法:分别应用不同浓度(0、8、16、20 mg/L)的烟曲霉菌提取物(Aspergillus fumigatus extract,AFE)作用体外培养人支气管上皮细胞16HBE-14o不同的时间(12、24、48、72 h).同时还应用热处理的AFE(heat-treated AFE,HT-AFE)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(抑肽酶)、蛋白激酶激活受体-2(PAR-2)激动剂(SLIGLV-NH2)和PAR-2阻断剂(FSLLRY-NH2)作用16HBE-14o细胞.应用ELISA法检测细胞上清液GM-CSF含量,同时应用RT-PCR法检测GM-CSF mRNA的表达.结果:正常培养条件下的对照组细胞仅表达分泌少量GM-CSF,而给予不同浓度的AFE作用后,细胞合成和分泌GM-CSF的量较对照组明显增加(P＜0.05),并呈明显的时间和浓度依赖性.PAR-2激动剂同样可以促进细胞合成分泌GM-CSF.丝氨酸蛋白酶抑制剂和PAR-2阻断剂几乎完全抑制AFE的上述作用.HT-AFE的蛋白酶活性完全灭活,不能促进细胞GM-CSF表达增加.结论:AFE依赖其蛋白酶活性激活PAR-2受体,促进呼吸道上皮细胞GM-CSF合成和分泌,从而促进哮喘的发生和发展.
关键词： 烟曲霉菌 支气管上皮细胞 粒-巨噬细胞集落刺激因子 蛋白酶激活受体-2 -
抗蛋白酶激活受体-2单克隆抗体的制备与鉴定
目的:制备出一种具有多种用途的抗蛋白酶激活受体-2(PAR-2)单克隆抗体(mAb).方法:用人工合成的11肽PAR-2作为免疫原,采用皮下多点注射方法免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,杂交瘤细胞采用间接ELISA法筛选.通过ELISA、Dot blot、免疫组化染色、流式细胞分析、激光共聚焦显微镜技术鉴定mAb的特异性.结果:获得1株可稳定分泌抗:PAR-2 mAb的杂交瘤细胞.其分泌的mAb为IgM型,ELJSA法检测杂交瘤细胞培养上清效价为1:16;点杂交分析表明此抗体可特异性结合PAR-2;免疫组化染色显示该单克隆抗体与人肺组织中的肺泡上皮细胞和平滑肌细胞,结肠组织中的腺上皮细胞和疑似淋巴细胞,扁桃体中的淋巴细胞,包皮组织中的鳞状上皮细胞呈阳性反应;流式细胞仪分析显示与人肺腺癌细胞系A549细胞中的PAR-2呈阳性反应;激光共聚焦扫描显微镜观察发现荧光标记的阳性反应物位于A549细胞的胞膜和胞浆.结论:成功地制备出可用于免疫组化和点杂交的抗PAR-2单克隆抗体,为PAR-2相关性疾病的研究提供了有用的工具.
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蛋白酶激活受体-2与胃肠道运动和感知的研究进展
蛋白酶激活受体-2(proteinase-activated receptor,PAR)是G蛋白耦联受体家族成员之一,遍布整个胃肠道上皮细胞表面,易暴露于能使其激活的蛋白酶中,是体内许多消化道腺体外分泌的直接调控者,直接影响胃肠道动力.目前,蛋白酶激活受体独特的激活方式及其在消化系统中的广泛分布和复杂多样的生理作用,特别是蛋白酶激活受体-2与胃肠运动和感知的关系正受到广泛关注.
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蛋白酶激活受体-2介导的呼吸道上皮细胞活化在哮喘中的作用
蛋白酶激活受体(PAR)是近年来新发现的一个受体家族,其中PAR-2对呼吸道上皮细胞功能的影响及其在哮喘中的作用正受到越来越多的关注.作者就PAR-2的结构、激活剂及生物学功能,尤其是PAR-2介导的呼吸道上皮细胞活化及其在哮喘中的可能作用作一综述.
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胰蛋白酶及PAR-2在恶性肿瘤调控中的研究进展
胰蛋白酶及蛋白酶激活受体-2(PAR-2)在多种肿瘤细胞中异常表达,且与肿瘤细胞的生物学特性及恶性程度密切相关.PAR-2激活后可通过多种信号转导途径导致细胞增殖和侵袭转移.PAR-2和胰蛋白酶可能成为肿瘤细胞生物学行为的新标志物,为临床恶性肿瘤的早期诊断和治疗提供一个新的方向.现全文对胰蛋白酶和PAR-2在恶性肿瘤调控途径中的新进展作一全面的综述.
