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硫化镍对支气管上皮细胞中磷酸化JNK(P-JNK)表达的影响
目的 通过结品硫化镍在支气管上皮细胞(16HBE)中磷酸化氨基未端蛋白激酶(P-JNK)表达,探讨镍致癌的分子机制.方法 用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)检测16HBE细胞中P-JNK的表达.结果 硫化镍能明显激活磷睃化氨基未端蛋白激酶(P-JNK)的表达,硫化镍浓度越高,磷酸化P-JNK的表达值越高,而且存在剂量-效应关系(r=0.7736),染镍组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 结晶型硫化镍激活16HBE细胞中P-JNK的表达,可能是镍致痛的分子机制之一.
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硫化镍对支气管上皮细胞膜脂质过氧化的影响
目的 探讨硫化镍对支气管上皮细胞脂质过氧化的影响和硫化镍毒性作用机制。方法 采用体外细胞培养方法，观察硫化镍对人支气管上皮细胞膜脂质过氧化产物丙二醛(MDA)及超氧化歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)、谷胱甘肽氧化酶(GSH-Px)的含量。结果 硫化镍能明显增加MDA及ROS的含量，与阴性对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)；硫化镍能明显降低SOD及GSH-Px含量，与阴性对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 硫化镍可增加细胞脂质过氧化作用，可能是硫化镍毒性作用机制之一。
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原花青素拮抗砷诱导人肺上皮细胞氧化损伤的研究
目的 探讨原花青素拮抗砷诱导支气管上皮细胞氧化损伤作用,为揭示原花青素拮抗砷毒性作用提供参考.方法 以BEAS-2B细胞为研究对象,分别给予不同剂量As2O3(0、5、10和20μmol/L)、葡萄紫原花青素(GSPE)(0、25和50mg/L)在24和48h时,利用试剂盒检测氧化应激相关指标[活性氧(ROS)、脂质过氧化物(LPO)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽(GSH)、巯基(-SH)、超氧化物气化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化能力(T-AOC)]的表达.采用一般线性模型分析原花青素拮抗砷效应的交互作用.结果 与砷染毒组相比,在24和48h均发现As2O3+GSPE50mg/L组的ROS、MDA和LPO的水平降低(P＜0.05),T-AOC、GSH、GSH-Px、CAT、-SH、SOD活性和水平增加(P＜0.05),As2O3+ GSPE25mg/L组的GSH、T-AOC和SOD升高(P＜0.05).结论 在一定浓度范围内,GSPE可以有效地拮抗砷所致的氧化损伤,且随着剂量增加,抗氧化损伤效果提高.
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不同粒径SiO2颗粒诱导BEAS-2B细胞凋亡的研究
目的 探讨不同粒径二氧化硅(silica particles,SiO2)颗粒对支气管上皮细胞凋亡的诱导作用,进一步阐明SiO2颗粒粒径相关的毒作用机制.方法 以体外培养的支气管上皮细胞(Bronchial epithelial cells,BEAS-2B)为模型,随机分为对照组和SiO2(Nano-Si40、Nano-Si60和Si200)颗粒暴露组,暴露浓度为6.25、12.5和25 μg/ml.采用透射电子显微镜(TEM)观察3种SiO2颗粒粒径、形貌特征及分散稳定性.细胞处理24 h后,采用MTT比色法测定细胞存活率;采用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法测定细胞膜的完整性;TEM观察SiO2颗粒摄取;采用倒置荧光显微镜观察4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色后细胞核的形态;Annexin V/PI双染标记后采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡的情况.结果 电子显微镜结果显示3种SiO2颗粒分布均匀,大小均一,颗粒呈圆形或椭球形,分散性良好,未发生明显聚集.Image J软件计算颗粒平均粒径分别为41.26±3.78、61.51±7.93和206.31±18.70 nm.与对照组相比,SiO2颗粒作用BEAS-2B细胞24 h后,细胞存活率下降(P＜0.05);细胞培养液中LDH活力明显升高(P＜0.05);3种SiO2颗粒均能够被BEAS-2B细胞摄取,大量的粒子以单个粒子或以膜包裹的聚集状态分布在胞质中,呈核周分布的现象;DAPI染色细胞核出现核固缩、核碎裂和染色质凝聚边缘化等典型的凋亡细胞核形态;3种SiO2颗粒均能诱导细胞凋亡发生,且随着颗粒浓度的增加和粒径的减小,凋亡率逐渐升高.结论 SiO2颗粒可被BEAS-2B细胞摄取,降低细胞存活率,进而破坏细胞膜完整性,终诱导细胞凋亡发生,且具有明显的剂量和粒径依赖趋势.
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不同粒径SiO2颗粒诱导细胞自噬的研究
目的 探讨不同粒径二氧化硅(SiO2)颗粒诱导的细胞自噬,进一步阐明其机制.方法 以体外培养的支气管上皮细胞(BEAS-2B)为模型,随机分为对照组和SiO2(Si200,Nano-Si60,Nano-Si40)颗粒暴露组,暴露浓度为25 μg/ml.采用透射电子显微镜(TEM)观察SiO2粒径、形貌及分散性.细胞处理24 h后,MTT法测定细胞活力;透射电子显微镜观察SiO2颗粒摄取及细胞自噬超微结构;Western blot检测3-MA预处理后自噬标志蛋白LC3的表达.结果 电镜显示3种SiO2颗粒分布均匀,大小一致,颗粒呈球形,分散性好,未发生聚集.用Image J软件计算得到颗粒平均粒径分别为46.26 ±5.68 nm、61.51 ±7.82 nm和206.31 ±6.35 nm.与对照组相比,SiO2颗粒作用于BEAS-2B细胞后,细胞活力下降(P＜0.05);电子显微镜观察显示Nano-Si60和Nano-Si40处理组细胞内呈现出自噬泡累积,自噬泡内含有明显的高电子密度SiO2颗粒及被部分降解的细胞内物质并伴有不同程度的线粒体损伤;Western blot显示LC3蛋白水平在Nano-Si60和Nano-Si40处理组有明显变化,加入3-MA预处理后LC3表达受到抑制.结论 SiO2颗粒可降低支气管上皮细胞存活率,并具有剂量和粒径依赖趋势;纳米级SiO2颗能够诱导细胞发生自噬而微米级SiO2颗粒则不诱导细胞自噬;3-MA能够在一定程度上抑制SiO2颗粒诱导细胞自噬发生.
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基因芯片筛选二羟环氧并芘转化支气管上皮细胞相关基因的研究
目的应用基因芯片技术筛选二羟环氧苯并芘(BPDE)转化细胞的相关基因,探讨基因芯片技术高通量筛查在细胞、分子毒理学研究中的应用价值.
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烟草致癌物诱发人支气管上皮恶性转化细胞中p16基因的变化
采用银染PCR-SSCP方法检测NNK诱发BEP2D恶性转化细胞中p16基因变化.与对照组比较,转化细胞中p16基因的E1.β外显子带型出现变异,而第1～3外显子均未见泳动变位,提示E1.β外显子突变和/或缺失所致细胞周期失调是NNK诱发人类支气管上皮细胞癌变的可能原因之一.
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Ras基因家族在二羟环氧苯并(a)芘恶性转化细胞中的表达研究
目的 检测环境致癌物苯并(a)芘代谢物二羟环氧苯并芘(BPDE)对人支气管上皮细胞Ras基因家族表达的影响.方法 以正常人支气管上皮细胞为对照组,经BPDE恶性转化人支气管上皮细胞为实验组,分别利用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学方法,检测Ras基因家族在mRNA和蛋白水平表达变化.结果 RT-PCR实验表明,BPDE恶性转化细胞H-Ras、K-Ras和N-Ras mRNA表达水平分刺是正常细胞的2.237、1.254和3.616;Western blot实验显示,H-Ras、K-Ras和N-Ras蛋白表达量分别是正常细胞的1.273倍、1.547和1.600倍;免疫细胞化学实验表明,恶性转化细胞H、K和N-Ras蛋白表达明显强于正常细胞.结论 BPDE诱发人支气管上皮细胞恶性转化存在H-Ras、K-Ras和N-Ras基因过表达.
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三子养亲汤含药血清对支气管上皮细胞中CysLTs介导的炎症通路的影响
目的:探究三子养亲汤含药血清对支气管上皮细胞中半胱氨酰白三烯(cysteinyl leukotrienes,CysLTs)介导的炎症通路的影响.方法:采用含药血清药理学的实验方法,以1.25％,2.50％和5.00％的三子养亲汤含药血清和空白血清来干预白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)和CysLTs共同诱导刺激的支气管上皮细胞,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测培养基上清液中嗜酸性粒细胞趋化因子-1(eotaxin-1,Eot-1)和Eot-3的浓度,采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)法检测支气管上皮细胞中半胱氨酰白三烯受体1 (cysteinyl leukotrienes receptor 1,CysLTR1)和CysLTR2表达水平,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测支气管上皮细胞中CysLTR1和CysLTR2 mRNA表达水平.结果:2.50％和5.00％三子养亲汤含药血清组的细胞培养基上清液中的Eot-1和Eot-3含量明显低于同血清含量的空白组(P＜0.05);1.25％,2.50％和5.00％三子养亲汤含药血清组细胞中CysLTR2蛋白表达水平和CysLTR1 mRNA表达水平与同血清含量的空白组没有显著性的差异;2.50％和5.00％三子养亲汤含药血清组细胞中CysLTR1蛋白表达水平和CysLTR1 mRNA表达水平明显低于同血清含量的空白组(P＜0.05).结论:三子养亲汤含药血清通过下调CysLTR1表达以及Eot-1和Eot-3表达和分泌,阻断CysLTs介导的炎症通路来治疗支气管哮喘.
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ROS在火药烟雾致人支气管上皮细胞损伤中的作用
研究活性氧(ROS)在火药烟雾致人支气管上皮细胞损伤中的作用.对支气管上皮细胞直接作用于火药烟雾环境中,观察不同时间火药对支气管上皮细胞活性影响及胞内ROS相对含量变化.结果表明培养的支气管上皮细胞的活性随着与火药烟雾接触时间的增加而降低,细胞内ROS相对含量随着时间的增加而升高.结论是细胞内ROS相对含量与细胞损伤程度相关,ROS是火药烟雾致支气管上皮细胞损伤机制重要部分.
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4-羟基壬烯醛诱导支气管上皮细胞凋亡
目的 探讨4-羟基壬烯醛(4-HNE)对支气管上皮细胞(16-HBE)凋亡的诱导作用及其机制.方法 将支气管上皮细胞(16-HBE)分为空白对照组、10 μmol/L、30 μmol/L、50 μmol/L4-HNE作用4 h组,观察4-HNE作用4 h后的细胞凋亡情况.Western印迹方法检测磷酸化(p-)SAPK-JNK和caspase-3蛋白表达的情况.结果 细胞经30 μmol/L、50 μmol/L 4-HNE作用后,姬姆萨染色可见明显细胞凋亡改变.对照组、10 μmol/L、30 μmol/L、50μmol/L 4-HNE组的AnnexinV-PI染色凋亡细胞数分别为1.94±1.03,2.03±1.04,43.36±1.3,65.92±3.45.30 μmol/L和50 μmol/L 4-HNE组与对照组及10 μmol/L 4-HNE组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).各组p-SAPK-JNK蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).30 μmol/L、50 μmol/L 4-HNE刺激组caspase-3的表达较对照组和10 μmol/L4-HNE组差异有统计学意义(P＜0.01).结论 30、50 μmol/L 4-HNE可通过caspase-3的激活引起支气管上皮细胞的凋亡.
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CC10蛋白功能及在疾病中的作用研究进展
Clara细胞是一种分布于哺乳动物肺脏末端细支气管的非纤毛、非浆液分泌上皮细胞,具有多种生物学功能.在气管支气管树分叉处的Clara细胞是支气管上皮细胞的祖细胞,有助于损伤后上皮再生[1-2].Clara细胞10-kD蛋白(clara cell 10-kD protein,CC10)是Clara细胞分泌的一种分子量为10-kD的分泌蛋白.其通过抑制磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)活性发挥抗炎和免疫调节活性[3-4].CC10初因出现在兔生殖管道着床期,被称为子宫球蛋白( uteroglobin,blastokinin).除此之外,CC10还有多种别名,如CCSP (Clara cell secretory protein)、CC16 (Clara cell 16-kD protein)、 UP-1 (urine protein 1)、CCPBP ( Clara cell phospholipid-binding protein)、 SCGB 1A1(Secretoglobin family 1A member 1 )等.
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尘螨抗原对支气管上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响
目的探讨屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus,Derp)抗原对支气管上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响.方法使支气管上皮细胞BEAS-2B暴露于系列不同浓度(0.02、0.2、2、20μg/ml)的Derp抗原24h至96h,分别观察各时间点细胞的表现,然后用酶联免疫法(ELISA)检测其细胞上清MCP-1的浓度表达.结果正常为未加Derp抗原,表现为单层细胞完全平铺;实验各组在抗原的刺激下,表现为随着浓度和时间的增加,细胞逐渐变瘦长,细胞间距逐渐增大;在无抗原刺激因素培养条件下的对照组,MCP-1释放水平很低,而在加入Derp抗原组,引起细胞分泌MCP-1蛋白水平的显著增加,并随着时间和浓度增加,MCP-1蛋白的表达水平呈上升趋势,特别是在高浓度组,即20μg/ml抗原组,各时间点MCP-1的表达差异均有统计学意义(P＜0.01).结论Derp抗原刺激气道上皮细胞,引起支气管上皮损伤和脱落等气道炎症反应,激发单核巨噬细胞产生大量的MCP-1,促成和加重气道炎症反应,因此认为MCP-1可能参与哮喘疾病的某些过程.
关键词： 屋尘螨 支气管上皮细胞 单核细胞趋化蛋白-1 哮喘 -
白细胞介素5受体α链在支气管上皮细胞BEAS-2B的表达
目的 白细胞介素5(IL-5)作为参与嗜酸粒细胞成熟、分化过程的主要因子,其作用通过特异性受体IL-5Rα介导.本文以支气管上皮细胞株为研究对象,证实该上皮细胞株在炎症因子的刺激下可以表达IL-5Rα.方法 通过促炎症因子TNF-α和TH2型细胞因子IL-4、IL-5、IL-13以及白三烯成分之一的LTCA(白三烯C4)对细胞进行单独或协同刺激,以RT-PCR方法、流式细胞检测技术评价上皮细胞对IL-5Rα的基因和蛋白质的表达,同时评价在IL-5和TNF-α的协同刺激下IL-5Rα、ICAM-1和VCAM-1的协同表达.结果 正常支气管上皮细胞在TH2型细胞因子、LTCA和TNF-α的刺激下可以表达IL-5Rα基因,在TNF-α单独或与其他因子的协同刺激下表达显著增强,更可以表达IL-5Rα蛋白.流式细胞检测分析显示TNF-α单独或协同刺激后16 h IL-5Rα蛋白表达高,并随时间的延长表达下降.当TNF-α与IL-5协同刺激后上皮细胞可以同时表达VCAM-1和IL-5Rα,而ICAM-1呈持续表达.结论 通过对支气管上皮细胞的研究证实了支气管上皮细胞可以在炎症因子TNF-α和TH2型细胞因子的协同刺激下进一步表达IL-5特异性受体IL-5Rα,并在IL-5和TNF-α的刺激下进一步表达黏附分子VCAM-1,吸引嗜酸粒细胞及其前体细胞浸润至气道参与炎症.说明支气管上皮细胞不仅在哮喘炎症反应中是主要的受累器官,也是导致炎症的参与者之一.
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PM2.5对支气管上皮细胞色素上皮衍生因子表达的影响
目的：探索不同浓度PM2.5对支气管上皮细胞(BEAS-2B)色素上皮衍生因子(PEDF)蛋白表达的影响。方法 BEAS-2B细胞传代培养，加入低、中、高浓度PM2.5悬液(25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml)刺激24 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中PEDF水平；Western blotting检测BEAS-2B细胞中PEDF蛋白表达水平。结果与对照组相比，PM2.5浓度为25μg/ml时，细胞内和上清液中PEDF蛋白水平均有增加趋势，但无统计学意义(t=-0.730, t=-1.840, P>0.05)；PM2.5浓度为50μg/ml和100μg/ml时，细胞内和上清液中PEDF蛋白表达水平明显增高(t>5.798, P<0.01)。结论中、高浓度PM2.5能够增加支气管上皮细胞中PEDF蛋白水平，并呈浓度依赖性。
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细胞因子信号转导抑制因子在呼吸道合胞病毒感染支气管上皮细胞免疫失衡中的表达
呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是婴幼儿下呼吸道感染的重要病原体之一,流行病学调查发现,婴幼儿期患过RSV毛细支气管炎的患儿中50％ ～ 70％可发生反复喘息,甚至支气管哮喘(简称哮喘)[1].Th1/Th2失衡是哮喘患儿气道炎症和气道高反应性发生和发展的关键[2],细胞因子信号转导抑制因子(suppressor of cytokine signaling,SOCS)与Th1/Th2分化有密切关系[3].本研究通过在体外构建RSV持续感染人气道上皮细胞(human bronchial epithelial cells,HBEC)的模型,并与淋巴细胞共培养,观察干扰素-γ(IFN-γ)和IL-4以及SOCS3和SOCS5的表达,为RSV感染引起Th免疫失衡的机制及SOCS与Th分化的关系提供证据.
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白介素5受体α链在支气管上皮细胞的表达
目的 白介素5(IL-5)作为参与嗜酸粒细胞(EOS)成熟、分化过程的主要因子,其作用通过特异性受体白介素5受体α链(IL-5Rα)介导.本研究以支气管上皮细胞株为研究对象,发现支气管上皮细胞在炎症因子的刺激下可以表达IL-5Rα.方法 通过促炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和Th2型细胞因子IL-4,IL-5,IL-13以及白三烯成分之一的白三烯C4(LTC4)对细胞进行单独或协同刺激,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法、流式细胞检测技术评价上皮细胞对IL-5Rα的基因和蛋白质的表达,同时评价在IL-5和TNF-α的协同刺激下IL-5Rα、细胞内黏附分子1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子1(VCAM-1)的协同表达.结果 正常支气管上皮细胞在Th2型细胞因子、LTC4和TNF-α的刺激下可以表达IL-5Rα基因,在TNF-α单独或与其他因子的协同刺激下表达显著增强,更可以表达IL-5Rα蛋白.流式细胞检测分析显示TNF-α单独或协同刺激后16 h IL-5Rα蛋白表达高,并随时间的延长表达下降.当TNF-α与IL-5协同刺激后上皮细胞可以同时表达VCAM-1和IL-5Rα,而ICAM-1呈持续表达.结论 本研究通过对支气管上皮细胞的研究证实了支气管上皮细胞可以在炎症因子TNF-α和Th2型细胞因子的协同刺激下进一步表达IL-5特异性受体IL-5Rα,并在IL-5和TNF-α的刺激下进一步表达黏附分子VCAM-1,吸引EOS及其前体细胞浸润至气道参与炎症.说明支气管上皮细胞不仅在支气管哮喘炎症反应中是主要的受累器官,也是导致炎症的参与者之一.
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支气管上皮细胞在支气管哮喘发病中的作用
支气管哮喘(简称哮喘)是一种由多细胞,多细胞组分参与形成的慢性气道炎症性疾病.支气管上皮细胞是气道结构细胞作为抵抗外界损伤因素的第一道防线,当吸人性刺激物质时,首先激化支气管上皮细胞并破坏上皮细胞的正常结构和生理功能,应激状态下的上皮细胞通过分泌炎性介质与自身细胞或其他气道结构细胞、炎性细胞、抗原递呈细胞等相互作用,积极参与哮喘的气道慢性炎症发生与发展进程.
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马尔尼菲青霉菌对支气管上皮细胞吞噬和细胞因子分泌的影响
目的：探讨马尔尼菲青霉菌（PM ）孢子对人支气管上皮细胞BEAS‐2B吞噬和细胞因子分泌的影响。方法人HIV －分离株孢子与细胞培养6 h PAS染色，观察孢子黏附细胞的情况；HIV －分离株孢子与细胞培养4 h行荧光原位杂交（FIS H ），观察细胞吞噬孢子的情况；H IV －分离株孢子与细胞培养1～5 h ，透射电镜观察细胞吞噬孢子的过程；（人HIV －分离株孢子、人HIV＋分离株孢子、FRR2161孢子、野生分离株孢子、及LPS分别加入以上4种分离株孢子、空白对照及LPS阳性对照组）10组实验组分别与细胞培养24、48、72 h ，用ELISA测定细胞上清液IL‐6和IL‐8浓度。结果 PAS染色示孢子紧紧黏附细胞；FISH示细胞能吞噬孢子；透射电镜示细胞吞噬孢子后，孢子细胞壁被破坏，细胞溶酶体增多和线粒体空泡化并轻度肿胀；3个时间段的L PS阳性对照组、孢子刺激组及孢子加LPS刺激组的细胞上清液 IL‐6及IL‐8浓度均高于空白对照组（P＜0．05）。结论 PM 孢子与BE‐AS‐2B细胞发生黏附后被吞噬，细胞内溶酶体将孢子消化破坏，并导致细胞分泌的IL‐6和IL‐8浓度增加。
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儿童闭塞性细支气管炎
闭塞性细支气管炎(bronchiolitis obliterans,BO)是1901年德国病理学家Lange首次报道并命名的.从病理学角度,BO被定义为两种类型的支气管损伤:狭窄性细支气管炎和增殖性细支气管炎.从临床意义上讲,BO是一种与小气道炎症损伤相关的慢性气流阻塞综合征.各种因素导致的细支气管上皮细胞和上皮下结构的损伤和炎症,及机体对以上损伤和炎症的不正当修复是BO的发病原因.这些因素包括感染、器官或骨髓移植、严重的皮肤黏膜过敏性疾病,如Stevens-Johnson 综合征、结缔组织病、吸入有毒物质、胃食管反流、药物不良反应等,在儿童多为感染后BO.临床表现为持续的咳嗽喘息,高分辨CT可见到马赛克灌注征、支气管壁增厚、支气管扩张等特征性改变,肺功能表现为阻塞性通气功能障碍.BO目前尚无有效的治疗方法,预后不良.
