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检测热原的新方案
综述了利用外致热原激活体内血单核细胞(MNC)释放细胞因子如白介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子(TNF-α)等即所谓的内致热原的原理，将待检样品与MNC共同培养，检测其上清液中的IL-1或TNF-α含量，这一体外检测致热原的新方法。
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可溶性趋化因子对人单核细胞表达及基质金属蛋白酶-9的影响
目的 观察趋化因子Fractalkine(CX3CL1, Fkn)对人单核细胞株U937细胞表达与分泌基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9, MMP-9)的影响.方法 使用不同浓度的人重组Fkn干预U937细胞,RT-PCR法检测细胞MMP-9基因表达,明胶酶谱法检测细胞上清中MMP-9水平.结果 不同浓度人重组Fkn干预U937细胞MMP-9基因表达及上清中MMP-9水平低于空白对照组.结论 Fkn可抑制U937细胞表达与分泌MMP-9.
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丙泊酚对脂多糖刺激人单核细胞丝裂原活化蛋白激酶信号通路的影响
目的 研究丙泊酚对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激人单核细胞(human mononuclear macrophage cell,THP-1)丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的影响.方法 将体外培养的THP-1细胞按完全随机方法分为4组:对照组(C组):给予脂肪乳20 mg/L;LPS刺激组(L组):给予LPS10mg/L；丙泊酚处理组(P组):给予丙泊酚20 mg/L;丙泊酚处理合并LPS刺激组(P+L组):给予丙泊酚20mg/L及LPS10 mg/L.在刺激后0.5、1、2、6h4个时间点通过免疫蛋白印迹分析(Western blot)法检测磷酸化p38MAPK (p-p38MAPK),磷酸化细胞外信号调节激酶(P-extracellular-signal regulated protein kinase,p-ERK)1/2及磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-c-Jun amino-terminal kinase,p-JNK)1/2含量的变化.结果 给予LPS刺激THP-1细胞0.5 h时,L组p-p38MAPK、p-ERK1/2及p-JNK1/2的相对灰度值分别为14.67±0.82、1.34±0.05、4.49±0.51,与C组比较表达均显著增加(P＜0.05).给予刺激1h时,L组p-p38MAPK、p-ERK1/2及p-JNK1/2的相对灰度值分别为11.78±0.75、0.58±0.05、3.31±0.55,与C组比较表达均显著增加(P＜0.05)；P+L组p-ERK1/2的相对灰度值为0.14±0.02,与L组比较磷酸化水平显著降低(P＜0.05).给予刺激2h时,L组p-p38MAPK和p-JNK1/2的相对灰度值分别为15.60±0.96、8.33±0.70,与C组比较表达均显著增加(P＜0.05)；P+L组p-p38MAPK和p-JNK1/2的相对灰度值分别为4.52±0.23、1.80±0.70,与L组比较磷酸化水平显著降低(P＜0.05).给予刺激6h时,L组p-p38MAPK及p-JNK1/2的相对灰度值分别为18.89±1.22、2.58±0.50,与C组比较表达均显著增加(P＜0.05)；P+L组p-p38MAPK的相对灰度值为3.91±0.30,与L组比较磷酸化水平显著降低(P＜0.05).结论 丙泊酚抑制由LPS刺激THP-1细胞引起的p-p38MAPK、p-ERK1/2及p-JNK1/2表达增加,这可能是其抗炎的重要作用机制之一.
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丙泊酚对脂多糖诱导人单核细胞表达Peroxiredoxin-2蛋白和超氧化物歧化酶蛋白的影响
目的 研究丙泊酚对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人单核细胞(THP-1)表达Peroxiredoxin-2及超氧化物歧化酶(SOD1)的影响.方法 将体外培养的THP-1细胞按照完全随机方法分为4组:正常对照组(C组);LPS刺激组(L组):加入LPS 1 mg/L;丙泊酚处理组(P组):给予丙泊酚15 mg/L和丙泊酚预处理合并LPS刺激组(P+L组):给予丙泊酚15 mg/L,1 h后再给予LPS 1 mg/L.通过Western blot法分别检测各组内Peroxiredoxin-2及SOD1含量的变化,用四唑盐快速比色法(MTT)观察各组THP-1细胞的存活率.结果 在LPS刺激12 h后收集细胞,Westernblot结果显示与正常对照组(C组)、丙泊酚处理组(P组)、丙泊酚预处理合并LP3刺激组(P+L组)3组相比,LPS刺激组(L组)中Peroxiredoxin-2和SOD1的表达量明显降低,而L组与(P+L)组比较,(P+L)组中Peroxiredoxin-2和SOD1的表达量则明显高于L组;MTT结果显示L组与(L+P)组相比较,L组细胞存活率明显低于(L+P)组细胞存活率(P<0.05)结论丙泊酚可以逆转LPS对THP1细胞表达抗氧化蛋白Peroxiredoxin-2及SOD1的抑制作用,其抗氧化作用可能与增加Peroxiredoxin-2及SOD1的表达有关.
关键词： 丙泊酚 脂多糖 人单核细胞 Peroxiredoxin-2 超氧化物歧化酶 -
阿萨希毛孢子菌对单核细胞产生细胞因子影响的研究
毛孢子菌(Trichosporon spp.)是一种机会致病真菌,可引起皮肤局限性及系统性感染.近年来国外有关该菌在免疫缺陷和肿瘤患者中引起播散性感染的报道逐渐增多[1,2],但也有报道由该菌所致的播散性毛孢子菌病患者无免疫性或肿瘤疾患存在[3].肿瘤坏死因子α(TNF-α)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素10(IL-10)是单核细胞抗感染中产生的细胞因子,具有行多种生物学活性.本实验通过阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii)与人单核细胞的混合培养,观察该菌对单核细胞产生TNF-α、GM-CSF、IL-10的影响,以探讨细胞因子在阿萨希毛孢子菌致播散性毛孢子菌病感染中的作用.
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糖基化终产物对人单核细胞EMMPRIN基因表达的影响
目的:探讨糖基化终产物(AGEs)对人单核细胞细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)表达的影响.方法:在培养的人单核细胞株中分别加入不同浓度AGEs干预24 h和同一浓度AGEs干预不同的时间点,以1640培养基和相应浓度的牛血清白蛋白为对照组.用逆转录聚合酶链反应检测EMMPRIN mRNA的表达水平.结果:AGEs干预人单核细胞的EMMPRIN mRNA水平与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05);且其表达呈时间和浓度依赖性降低(P＜0.05).结论:AGEs以时间及浓度依赖的方式减少人单核细胞EMMPRIN mRNA的表达.
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金属颗粒引起人单核细胞内氧化应激水平变化研究
目的：金属假体以其良好的性质在关节置换中得到广泛应用。文中探讨金属假体使用过程中产生的金属颗粒刺激对人单核细胞内氧化应激水平的影响。方法抽取15名健康志愿者外周血，离心后吸取单个核细胞，将细胞进行体外培养，分别加入将钴颗粒、铬颗粒、铁颗粒、钛颗粒形成钴、铬、铁、钛颗粒组，并使颗粒浓度终约达到20×109个/mL。对照组加入等渗盐水。分别在刺激后6、12、24、36、48 h检测细胞内活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽氧化物酶（ GSH）含量。结果单核细胞与金属颗粒共培养6、12、24、36、48 h后，经统计学分析各颗粒组MDA、ROS水平均高于对照组水平（P＜0．05）。钴、铬、铁颗粒组MDA、ROS水平均高于钛颗粒组（P＜0．05）；各颗粒组SOD、GSH水平均低于对照组（P＜0．05）。钴、铬、铁颗粒组SOD、GSH水平均低于钛颗粒组（P＜0．05）。结论金属颗粒能导致体外培养的单核细胞细胞内氧化应激水平升高，降低细胞内的抗氧化物酶水平，钴、铬、铁颗粒的诱导活性强于钛颗粒。氧化应激在金属颗粒介导的骨溶解中可能起到了关键作用。
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脓肿分枝杆菌经TLR2信号通路诱导人单核细胞株表达炎症细胞因子分析
目的 了解脓肿分枝杆菌脓肿亚种和马赛亚种诱导人单核细胞株内TNF-α、IL-8和IL-10的表达变化及与TLR2信号途径的相关性.方法 将脓肿分枝杆菌脓肿亚种和马赛亚种感染人单核细胞,感染复数(MOI)=3,采用荧光定量PCR检测人单核细胞被两细菌亚种感染6h～18h后胞内TNF-α、IL-8和IL-10的表达水平;采用Anti-TLR2 Abs阻断TLR2受体,荧光定量PCR检测人单核细胞被感染6h后胞内TNF-α、IL-8和IL-10的表达变化.结果 脓肿亚种和马赛亚种作用人单核细胞6h～18h后,均可诱导人单核细胞内TNF-α、IL-8和IL-10的表达水平上调,以TNF-α表达水平上调明显,IL-10表达水平上调较低,差异有统计学意义(P＜0.05);TLR2受体阻断后,脓肿亚种和马赛亚种感染人单核细胞上调胞内TNF-α、IL-8和IL-10表达均出现明显抑制,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 脓肿分枝杆菌脓肿亚种和马赛亚种均可经TLR2信号途径诱导人单核细胞内TNF-α、IL-8和IL-10表达水平上调,以TNF-α表达水平上调明显.
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番石榴叶总黄酮抑制泡沫细胞形成及LOX-1表达的实验研究
目的：研究番石榴叶总黄酮抑制泡沫细胞形成及 LOX-1表达的作用。方法建立 T HP-1单核-巨噬细胞源性泡沫细胞模型，根据CCK-8法测定的番石榴叶总黄酮对该细胞的安全浓度范围，将配制的番石榴总黄铜溶液在其安全范围内选取低、中、高三个剂量组，以无血清培养液的空白对照组及ox-LDL 模型组为对照。采用油红O染色观察细胞内脂质堆积情况，酶偶联比色法检测细胞内总胆固醇含量，Western blot法检测 LOX-1的蛋白表达水平。结果三个剂量组细胞内总胆固醇含量均低于模型组（P＜0.05），并随番石榴叶总黄酮浓度升高而下降；三个剂量组的 LOX-1蛋白表达均低于模型组（P＜0.05），抑制作用随剂量升高而增强。结论番石榴叶总黄酮通过抑制 LOX-1的表达，减少巨噬细胞摄取ox-LDL ，抑制泡沫细胞形成，从而起到抗动脉粥样硬化的作用。
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C-反应蛋白直接刺激人单核细胞肿瘤坏死因子α、白介素-6 表达的实验研究
目的比较急性冠状动脉综合征(ACS)患者与健康人外周血单核细胞对一定浓度的C-反应蛋白(CRP)或细菌脂多糖(LPS)刺激的炎症反应,并观察pravastatin的干预效应.
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M2型巨噬细胞向M1型巨噬细胞的转化及其意义
目的 诱导人单核细胞向M2型巨噬细胞转化及探讨诱导M2型巨噬细胞向M1型巨噬细胞转化的可行性.方法 通过磁珠阳性分选法从健康成人新鲜血液中获得人单核细胞,经重组入巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导6d,应用流式细胞仪鉴定M2型巨噬细胞标志物CD163阳性表达率.对M2型巨噬细胞应用干扰素(IFN)-γ和脂多糖(LPS)诱导2～3d,应用流式细胞仪鉴定M1型巨噬细胞表面标志物CD16阳性表达率.结果 经重组人M-CSF诱导后的单核细胞,M2型巨噬细胞的CD163阳性表达率为(66.37±2.67)％,M1型巨噬细胞的CD16阳性表达率为(13.37 ±4.41)％,M2型巨噬细胞阳性表达率明显高于M1型巨噬细胞阳性表达率(P＜0.01).而M2型巨噬细胞再经IFN-γ和LPS诱导后,M1型巨噬细胞的CD16阳性表达率为(48.57 ±5.98)％,M2型巨噬细胞的CD163阳性表达率为(25.83±1.95)％,M1型巨噬细胞的阳性表达率明显高于M2型巨噬细胞的阳性表达率(P＜0.05).结论 人M2型巨噬细胞在IFN-γ和LPS诱导下可向M1型巨噬细胞转化.
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解脲脲原体LAMPs激活核因子κB诱导人单核细胞表达诱导型一氧化氮合酶和前炎症因子
目的 分析解脲脲原体(Uu)的脂质相关膜蛋白(LAMPs)对人单核细胞(THP-1)表达诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和前炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的影响. 方法 用Uu的LAMPs刺激人单核细胞后,Western blot法检测核因子κB(NF-κB)的激活和iNOS基因的表达,格氏试剂测定NO,ELISA法测定IL-1β、TNF-α和IL-6的含量. 结果 Uu LAMPs通过激活NF-κB诱导人单核细胞表达iNOS,且能以时间和剂量依赖方式刺激人单核细胞产生NO,诱导表达前炎症因子(IL-1β、TNF-α和IL-6);NF-κB抑制剂PDTC可抑制NF-κB的激活、iNOS的表达及NO的产生. 结论 Uu LAMPs通过激活NF-κB途径诱导人单核细胞表达iNOS和前炎症因子,可能是产生某些疾病的一个重要的因素.
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荚膜唾液酸缺失对2型猪链球菌与人单核细胞相互作用的影响
目的 本研究以人单核细胞THP-1为靶细胞,研究荚膜唾液酸成分对2型猪链球菌与人单核细胞相互作用的影响.方法 透射电镜定性比较野生株及敲除株与人单核细胞相互作用并观察细菌的超微结构；通过涂板计数定量测定比较细胞对细菌的内吞及细菌在细胞内的存活情况；ELISA法检测野生株及敲除株刺激人单核细胞分泌炎症因子的水平.结果 猪链球菌唾液酸突变株与人单核细胞间相互作用,在黏附、内吞及胞内存活方面与野生株相比均有显著的差异；野生株对人单核细胞杀伤的抵御能力显著强于唾液酸缺失突变株；唾液酸突变株能更加快速的刺激人单核细胞分泌IL-8,且分泌水平要高于野生株,但对IL-6的分泌无影响.结论 荚膜唾液酸在2型猪链球菌致病过程中发挥着重要作用,为进一步探讨荚膜唾液酸参与2型猪链球菌强致病性调控奠定了基础.
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硼酸对脂多糖诱导的人单核细胞产生TNF-α的影响
目的 研究硼酸对脂多糖(LPS)激活后的人单核细胞THP-1产生,INF-α的影响.方法 采用 ELISA法检测硼酸对LPS诱导的THP-1分泌TNF-α的影响;采用RT-PCR方法检测硼酸对LPS激活的THP-1表达TNF-α mRNA的影响.结果 LPS(1 μg/mL)处理THP-1细胞3 h后,THP-1细胞TNF-α mRNA表达升高,培养液中TNF-α的水平也升高,硼酸预处理24h后再给予LPS,则TNF-α的分泌和mRNA表达都呈剂量依赖关系的下降,25 μmol/L硼酸组与LPS组相比有显著性差异(P<0.05).结论 硼酸能抑制LPS诱导的THP-1细胞,INF-α mRNA的表达和分泌,提示硼酸可能通过对炎症因子TNF-α的负性调控而发挥其抗炎作用.
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染料木素对脂多糖诱导的人单核细胞与主动脉内皮细胞黏附的影响
目的 探讨染料木素对脂多糖(LPS)同时诱导的人单核细胞(THP-1)与人主动脉内皮细胞(HAEC)黏附的影响作用.方法 分别培养THP-1细胞与HAEC细胞,用不同浓度染料木素预处理两种细胞30 min,然后用LPS同时诱导两种细胞4h,将THP-1细胞加入到HAEC细胞中共培养1h,用孟加拉玫瑰红法检测THP-1细胞与HAEC细胞黏附情况;用酶联免疫吸附法检测细胞培养液上清中血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的浓度.结果 LPS能促使THP-1细胞与HAEC细胞黏附,促进VCAM-1和ICAM-1释放;加入染料木素后,两种细胞的黏附量及VCAM-1和ICAM-1的释放呈浓度依赖性减少(P＜0.05).结论 染料木素对脂多糖同时诱导的THP-1细胞与HAEC细胞的黏附有抑制作用.
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VEGF家庭成员
血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)又称血管通透性因子(vascular Permeability factor,VPF)或血管调理素(Vasculotropin),是一组功能强大且能产生多种效应的细胞因子[1].1989年Ferrara等[2]从牛垂体滤泡星状细胞体外培养液中首先分离纯化出来的一类糖蛋白,随后在鼠垂体前叶肿瘤细胞系AtT20、人单核细胞、豚鼠瘤、鼠神经胶质瘤细胞系等细胞培养液中也纯化出了VEGF蛋白.它具有增加微静脉、小静脉的通透性,促进血管内皮细胞分裂与增殖,使细胞质钙聚集,诱导血管生成,在胚胎发育、创伤愈合、肿瘤生长与转移过程中起重要作用.VEGF是一个家庭,包括VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D以及胎盘生长因子(Placental growth factor,PGF)等.
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白念珠菌在体外诱导人单核细胞凋亡
目的:研究白念珠菌在体外对人单核细胞存活率、增值率及凋亡率的影响.方法:在体外将白念珠菌与人单核细胞共培养.用细胞计数法测定单核细胞存活率;用XTT法检测单核细胞增值率;用Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒在流式细胞仪下检测单核细胞的凋亡率.结果:白念珠菌在体外能够降低单核细胞存活率,抑制单核细胞增值率,并诱导单核细胞早期凋亡.结论:白念珠菌对人单核细胞的抑制活性可以降低宿主抗真菌感染免疫,加重临床感染症状.
