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氢醌HQ对K562细胞WRN基因甲基化水平及DNMT1表达的影响
目的:探讨氢醌(hydroquinone,HQ)对K562细胞中WRN基因甲基化水平及DNMT1表达的影响.方法:K562细胞生长至对数期后,设置空白对照组,低(15 μmol/L)、中(30 μmol/L)、高(60 μmol/L)剂量HQ组,重复间隔染毒72 h,空白对照组加入等量的PBS培养.MTT比色法检测细胞存活率;重亚硫酸盐测序法(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测细胞WRN基因甲基化水平;FQ-PCR法检测DNMT1基因的mRNA表达情况;免疫印迹法检测DNMT1基因的蛋白表达情况.结果:①MTT结果显示,细胞存活率随着HQ染毒浓度增加而下降(P=0.000).②BSP检测结果显示,低、中、高剂量HQ组甲基化率与对照组比较,差异有统计学意义(x2=7.50,P=0.048).③与对照组比较,低、中、高剂量HQ组DNMT1基因mRNA及蛋白表达量呈下降趋势(P=0.000).结论:HQ染毒K562细胞可引起WRN基因甲基化水平增高,同时下调DNMT1基因的表达.
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氢醌对人白血病细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响
目的 研究氢醌对白血病细胞株U937细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响.方法 用不同浓度的氢醌处理U937细胞24 h、48 h后,采用MTT法来检测细胞增殖抑制率;经瑞-吉染色后,观察细胞形态变化;采用流式细胞仪检测细胞凋亡;采用免疫印迹法检测Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达.结果 (1)U937细胞的增殖抑制率随氢醌作用时间及浓度的增加而增加,呈时间-剂量依赖性(P＜0.05);(2)氢醌作用后,部分细胞体积增大,胞浆中有空泡,胞核发生畸形;(3)流式细胞术结果显示,细胞凋亡率随着氢醌作用时间及浓度的增加而增加,呈时间-剂量依赖性(P＜0.05);(4)免疫印迹结果显示,与空白组相比较,染毒48h时,细胞Bax蛋白的表达量增加(P＜0.05),而Bcl-2蛋白表达量减少(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值下降(P＜0.05),染毒24 h时,细胞Caspase-3蛋白的表达量增加(P＜0.05);与染毒24 h各组相比较,染毒48 h时细胞Caspase-3蛋白的表达量随时间延长呈增加趋势(P＜0.05).结论 氢醌可以诱导U937细胞凋亡,其机制可能与调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3的表达有关.
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高效液相色谱法检测化妆品中氢醌和苯酚
目的:为快速、灵敏、简便的检测祛斑类化妆品中禁用物质氢醌、苯酚的含量,建立二极管阵列检测器高效液相色谱分析法.方法:用甲醇溶解,超声波提取样品后,在适当的色谱条件下,用紫外吸收谱图和保留时间定性测定.结果:该法线性良好,相关系数氢醌为r1=0.9997,苯酚r2=0.9999;氢醌回收率为94.5%-95.7%,苯酚回收率为98.8%-100%.结论:方法分离效果好,简便快捷,灵敏度高,重复性好,适用于各类化妆品中氢醌、苯酚测定,为首选方法.
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调Q激光加外用氢醌联合光子嫩肤技术治疗面部黄褐斑的疗效观察
目的 研究调Q激光加外用氢醌联合光子嫩肤技术治疗面部黄褐斑的安全性及有效性.方法 选取60例面部黄褐斑患者,按照随机数字表法分为观察组(30例)、对照组(30例).观察组采用调Q激光加外用氢醌联合光子,对照组采用调Q激光加外用氢醌.进行两组间黄褐斑面积和严重指数(MASI)、临床疗效、VISIA皮肤图像分析的比较.结果 观察组MASI分值低于对照组(P<0.05),观察组的治疗总有效率高于对照组(P<0.05),观察组VISIA分析各项评分结果优于对照组(P<0.05).结论 调Q激光加外用氢醌联合光子嫩肤技术治疗面部黄褐斑疗效好,安全性高,值得推广应用.
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月桂氮酮对氢醌乳膏透皮释放的影响
目的:探讨月桂氮酮对氢醌透皮释放作用的影响,拟定月桂氮酮适浓度.方法:采用离体鼠皮及简单小室装置;紫外分光光度法测定氢醌浓度;各时间点累积透皮释放率,用三次抛物线拟合程序拟定月桂氮酮是适浓度.结果:含2%、3%、5%氮酮的氢醌乳膏,其氢醌的累积透皮释放率显著增加(p＜0.01),适浓度为(2.49±0.29)%.结论:月桂氮酮对氢醌乳膏透皮释放有促进作用,以2.5%氮酮浓度为宜.
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气相色谱法测定化妆品中苯酚和氢醌的可行性及误差分析
目的:探讨气相色谱测定化妆品中苯酚和氢醌的可行性,分析可能存在的误差来源及影响因素.方法:用气相色谱法FID检测器,以SE-30毛细管柱分离,误差分析方法按水质分析中的AQC工作程序进行.结果:苯酚和氢醌的低定量浓度分别为0.58 μg/g和2.02 μg/g,线性范围苯酚为1.0～200 μg/ml,氢醌为25～500 μg/ml.0.2c苯酚标准溶液、苯酚试样和加标苯酚的变异分析有非常显著差异(F＞F0 01),0.2c氢醌标准溶液差异非常显著(F＞F0.01),氢醌试样和加标氢醌变异不显著(F＜ F0.01),除氢醌加标试样的总标准差(St)＞浓度的5％(w),其他试样的St均＜浓度5％(w),苯酚和氢醌试样准确度的置信限(R/d)为1.03和1.01,平均回收R能被接受.结论:方法的灵敏度较高,线性范围符合要求,试样及标准溶液的变异主要误差来源是苯酚和氢醌的不稳定所带来的随机因素而致,应控制其试样保存温度、放置时间以及光的照射等条件,才能确保测定结果理想的精密度和足够的准确度.
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氢醌对K562细胞着色性干皮病基因D甲基化的影响
目的：了解不同剂量苯代谢物氢醌（ HQ）对人白血病细胞株K562细胞着色性干皮病基因D（ XPD）甲基化水平的影响。方法：分别以终浓度为0、15、30和60μmol/L HQ溶液重复处理K562细胞48 h，采用MTT比色法检测K562细胞增殖能力，采用亚硫酸氢盐处理后测序法检测XPD甲基化水平；观察各组细胞存活率及甲基化率。结果：HQ 0、15、30、60μmol/L 处理后，K562细胞存活率分别为（100.00±0.00）％、（85.46±0.60）％、（63.46±7.02）％和（51.20±6.49）％，15μmol/L 组与0μmol/L 组比较，差异无统计学意义（ P ＞0.05），30μmol/L和60μmol/L组与0μmol/L组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；XPD基因甲基化水平分别依次为1.03％（3/290）、0.34％（1/290）、0.34％（1/290）和0.70％（2/290），15、30、60μmol/L组与0μmol/L组比较，差异无统计学意义（χ2=1.531，P＞0.05）。结论：HQ对K562细胞生长有明显的抑制作用，但对细胞中XPD基因甲基化水平无影响。
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氢醌对 K562细胞着色性干皮病基因 D转录及表达的影响
目的：探讨苯代谢物氢醌（ HQ）对人白血病细胞株K562细胞中着色性干皮病基因D（ XPD）mRNA转录及蛋白表达的影响。方法：分别用终浓度为0、15、30、60μmol/L HQ溶液处理K562细胞48 h后，单细胞凝胶电泳实验检测细胞DNA损伤效应，Taqman探针实时荧光定量PCR法检测XPD基因mRNA转录水平，蛋白印迹法分析XPD基因蛋白表达水平，观察荧光显微镜下细胞的尾矩，计算mRNA及蛋白的相对表达量。结果：不同浓度HQ处理后，各组细胞尾矩与0μmol/L HQ组比较，差异有统计学意义（ P＜0.05）；不同浓度HQ处理后， K562细胞中XPD基因mRNA和蛋白相对表达量与0μmol/L HQ组比较，差异无统计学意义（ P＞0.05）。结论：HQ处理K562细胞48 h后，细胞中DNA有明显的损伤效应，但XPD基因mRNA及蛋白无变化。
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WRN基因在氢醌致U937细胞DNA损伤中的作用
目的 WRN基因在氢醌(HQ)致U937细胞DNA损伤中的作用.方法 常规培养白血病细胞U937至生长对数期,低剂量HQ组、中剂量HQ组、高剂量HQ组分别以10、20、40μmol/L HQ染毒24 h及48 h,以等体积的完全培养基培养的细胞组为完全空白对照组.采用单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞DNA损伤;采用免疫印迹法检测WRN蛋白的相对表达量.结果 (1)HQ可导致细胞DNA损伤,且损伤效用随染毒浓度增加而增大,48 h比24 h的DNA损伤程度增加,呈时间—剂量依赖性(P＜0.05);(2)免疫印迹结果显示,HQ染毒24 h,WRN蛋白相对表达量在各组差异无统计学意义(P＞0.05);HQ染毒48 h高剂量组分别与空白组、低剂量、中剂量中比较,WRN蛋白相对表达量呈降低的趋势(P＜0.05).结论 HQ诱导WRN蛋白表达下调影响U937细胞DNA损伤修复.
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苯的代谢产物氢醌改变细胞氧化还原状态诱导TNF-α表达
目的:研究苯的代谢产物氢醌(HQ)对HL-60细胞TNF-α产生和细胞活性的影响,并探讨这种影响是否通过氧化还原调节来实现.方法:HL-60细胞用不同浓度HQ刺激24 h后,收集细胞及培养液上清,检测细胞内活性氧、氧化型/还原型谷胱甘肽含量,CCK8检测细胞增殖,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,ELISA法检测TNF-α含量.结果:5 μmol/L HQ即可诱导GSH水平增高,抑制HL-60细胞增殖,但对GSH/GSSG比例,TNF-α表达及细胞凋亡无显著影响.50、 100 μmol/L HQ可破坏细胞内氧化还原状态,GSH/GSSG比例下降,TNF-α表达增高,显著抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡,抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸能拮抗HQ诱导的TNF-α表达、增殖抑制及细胞凋亡.结论:HQ可通过改变HL-60细胞内氧化还原状态诱导TNF-α表达,导致细胞凋亡.
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“黑脸娃娃”激光联合祛斑调经胶囊内服及氢醌外用治疗黄褐斑31例疗效观察
黄褐斑亦名妊娠斑,是多见于中青年女性面部的色素沉着性皮肤病.目前认为可能与妊娠、口服避孕药、内分泌、紫外线、某些药物化妆品、遗传、微量元素及肝脏疾病等有关.黄褐斑不但影响容貌,而且大多数患者伴有不同程度的内分泌及植物神经系统功能紊乱.如:月经失调、失眠、心烦易怒等,给患者带来生活及精神方面诸多烦恼和痛苦[1].2011年1月～2013年12月,笔者科室采用“黑脸娃娃”激光联合祛斑调经胶囊内服及氢醌外用治疗黄褐斑患者31例,取得了满意疗效,现报道如下.
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氢醌乳膏联合胶原贴敷料治疗烧伤后色素沉着疗效观察
目的:探讨氢醌乳膏联合胶原贴敷料治疗烧伤后色素沉着的安全性和有效性.方法:采用随机、平行对照的研究方法,将107例烧伤后色素沉着患者(实际完成103例)分为试验组(53例)和对照组(50例).试验组采用2％氢醌乳膏联合胶原贴敷料治疗,对照组采用胶原贴敷料治疗,总疗程为8周.观察治疗后两组患者全身情况和不良反应及不同时相点的总有效率.结果:治疗前后两组患者生命体征,血、尿常规及肝、肾功能比较,差异均无统计学意义(P＞0.05),不良反应轻微.治疗2、4、6、8周后,试验组总有效率( 39.62％、84.91％、90.57％、92.45％)均显著高于对照组(20.00％、60.00％、72.00％、78.00％,P＜0.05),试验组疗效明显优于对照组(P＜0.05).结论:氢醌乳膏联合胶原贴敷料治疗烧伤创面愈合后遗留的色素沉着有显著疗效,并且有较好的安全性.
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补肾养血明目方含药肠吸收液对ARPE-19细胞氧化损伤的保护作用
目的:探讨补肾养血明目方含药肠吸收液对氢醌(hydroquinone,HQ) 诱导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19) 氧化应激损伤的保护作用.方法:采用不同浓度HQ诱导体外培养ARPE-19 细胞氧化损伤,确定佳造模浓度;制备补肾养血明目方含药肠吸收液.采用CCK-8法检测补肾养血明目方含药肠吸收液对ARPE-19细胞活力的影响,TUNEL技术观察其对细胞凋亡的保护作用,以及化学比色法检测细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性.结果:当HQ浓度达到90滋mol/L以上时,ARPE-19 细胞活性明显降低.相较于模型组,预防给药时,浓度1%和2%补肾养血明目方含药肠吸收液对HQ损伤具有有显著保护作用(均P<0.01),0.5%和5%含药肠吸收液对HQ损伤有一定保护作用(均 P<0.05);治疗给药时,1%和2%含药肠吸收液对 HQ 损伤有一定保护作用(均 P<0郾05).与模型组相比,预防组的细胞凋亡率显著下降(P<0.01),治疗组的细胞凋亡率有一定下降(P<0.05).抗氧化酶检测结果显示与模型组相比,预防组和治疗组均能明显提高SOD和GSH-Px含量(均P<0.05),其中预防组的作用更为显著(P<0.01,P<0.05).结论:补肾养血明目方对HQ诱导的ARPE-19 细胞氧化损伤有保护作用,其作用机制可能与增加细胞内抗氧化酶的含量有关.
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化学脱色法制备白癜风豚鼠模型的比较研究
目的 比较研究过氧化氢和氢醌两种化学脱色法制备白癜风豚鼠模型,发现存在的问题,并分析影响因素.方法 豚鼠随机分成模型组和对照组,每组12只,雌雄各半.采用3种方式制备白癜风模型:5％过氧化氢溶液局部皮肤涂抹、5％过氧化氢溶液局部皮肤封闭透皮、5％氢醌溶液局部皮肤涂抹,对照组平行给予生理盐水,连续40～50 d.肉眼观察皮肤表面局部色素脱失现象;取白斑区皮肤切片,硫酸亚铁Lillie法染色,光镜下观察皮肤组织形态和黑色素分布情况;Advanced3.0图像分析软件测量表皮黑色素照片的平均积分光密度.结果 采用5％过氧化氢溶液两种方式造模,豚鼠均未出现皮肤色素脱失,白癜风模型未成立;采用5％氢醌溶液涂抹后,局部皮肤出现灰白色斑片状色素脱失,基本达到模型的外观要求;经组织病理学半定量或定量分析,与对照组比较,表皮含黑色素毛囊比例、黑色素分布评分、表皮平均积分光密度均显著降低(P＜0.05、0.01).结论 过氧化氢通过破坏黑色素结构脱色,对其生成影响不大,模型较难成立;氢醌为酪氨酸酶抑制剂,可减少黑色素生成,更易形成白癜风模型.
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测定美白类化妆品中氢醌和苯酚的高效液相色谱法改进研究
目的:对高效液相色谱法测定美白类化妆品中氢醌、苯酚的色谱条件进行优化.方法:以系统适用性为指标,比较了色谱柱类型、缓冲盐种类及流动相pH对氢醌、苯酚和化妆品样品分离效果的影响.对优化后色谱条件进行了方法学考察,并在此条件下对抽检的化妆品样品进行测定.结果:优色谱条件:采用C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以10 mmol·L-1磷酸二氢钾水溶液(磷酸调pH 3.5)-甲醇为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL·min-1,柱温25℃,检测波长280 nm,进样量5μL.在优色谱条件下,氢醌质量浓度在0.4～40μg· mL-1范围内,苯酚质量浓度在0.7～70 μg·mL-1范围内线性关系良好,相关系数分别为0.999 8和0.999 9,氢醌、苯酚检测限分别为0.000 5和0.001μg,定量限分别为0.002和0.003 5μg,精密度试验的RSD分别为0.4％～1.0％和0.3％～1.8％,回收率分别为98.4％～99.5％和100.4％～102.2％.对市售的美白祛斑类化妆品200批进行测定,在本文的样品处理方法下氢醌和苯酚的检出限分别为1和2μg·g-1,定量限分别为4和7μg·g-1,杂质峰和目标峰能够实现基线分离、峰形对称.结论:本法测定美白祛斑类化妆品中氢醌、苯酚含量的专属性好,可以为化妆品检验标准的改进提供参考.
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左羟丙哌嗪和羟苯磺酸钙中2个1类杂质的遗传毒性(Q)SAR评价及质控限度评估
目的:对左羟丙哌嗪和羟苯磺酸钙的已知杂质进行遗传毒性评价,并对现行标准杂质限度的合理性进行评价.方法:按照ICH M7指导原则的要求,采用基于专家知识规则的Derek和基于统计学的Sarah两类(Q)SAR评价系统,对左羟丙哌嗪的3个杂质右羟丙哌嗪、苯基哌嗪、缩水甘油,羟苯磺酸钙及其杂质Ⅰ(氢醌)进行评价和分类.对于确定为遗传毒浊杂质的,根据药物临床用量计算杂质的暴露量,并按照遗传毒性杂质相关指导原则的要求,对其标准限度进行评估.结果:右羟丙哌嗪、苯基哌嗪预测结果为阴性,缩水甘油和氢醌预测结果为阳性,且分类为1类.缩水甘油的标准限度低于可接受安全剂量.氢醌的标准限度过高,存在安全隐患.结论:缩水甘油和氢醌为1类遗传毒性杂质,缩水甘油的标准限度合理,氢醌的标准限度应该进一步严格.
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miR-146a对氢醌抑制HL-60细胞分化的调控作用
目的：观察氢醌对HL-60细胞向单核细胞分化的影响，并初步探讨miR-146a的调控作用。方法：设miR-146a-5p抑制剂和阴性对照处理的HL-60细胞，分别以不同浓度(0、0.5、1.0、2.5和5.0μmol/L)的氢醌处理3 h后，接种于含豆蔻酰佛波醇(PMA)的培养基中，培养72 h诱导其分化。采用实时荧光定量PCR检测细胞内miR-146a及其靶基因TRAF6的表达量，流式细胞术检测CD11b和CD14的表达，Western blot检测TRAF6蛋白及其下游调控因子IκBα蛋白的表达水平。结果：与对照组相比(0μmol/L)，氢醌可抑制PMA诱导的HL-60细胞CD11b和CD14的表达，5.0μmol/L的氢醌使其表达量分别减少44%和38%(P均<0.01)；同时miR-146a的表达比对照组升高近2倍(P<0.01)；TRAF6 mRNA的表达下降约40%，其蛋白表达下降74%(P均<0.01)；磷酸化IκBα蛋白的表达减少约45%，IκBα总蛋白表达升高约73%(P均<0.01)。当抑制miR-146a的表达后，氢醌对TRAF6、IκBα和磷酸化IκBα蛋白表达的影响不明显。结论：miRNA-146a是氢醌影响HL-60细胞分化的调控因子之一。
关键词： 氢醌 HL-60细胞 细胞分化 microRNA-146a NF-κB -
气相色谱法测定化妆品中氢醌、苯酚及其参数限度的考察
目的:通过对参数限度的考察,建立气相色谱法测定化妆品中氢醌、苯酚的有效方法.方法:用乙醇溶解、超声波提取样品后,用气相色谱法FID检测器检测,以DB-WAX毛细管柱(320×30mm)分离,在适当的升温条件下进行定性和定量测定.结果:线性关系:氢醌Y=1.49645X,r=0.99968(n=5);苯酚Y=1.44015X,r=0.99986(n=5);精密度:氢醌:1.1%,苯酚2.0%;重复性:氢醌1.5%,苯酚1.0%;回收率:氢醌98.5-118.1%;苯酚96.2%-115.0%.结论:该方法分离效果好、检测器灵敏度高,线性、精密度、重复性和回收率等参数均在合理限度范围内.
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葡萄籽提取物对白癜风小鼠模型的影响
目的:筛选能促进黑色素表达的天然产物,建立小鼠背毛脱色模型,并通过观察小鼠的毛发颜色的表型来探究这些药物改善氢醌引起小鼠背毛脱色的分子机制.方法:在细胞水平初步筛选天然药物,观察细胞黑色素合成情况.建立小鼠背毛脱色模型,将小鼠随机分为正常组,模型组,药物治疗组,在模型组和药物治疗组小鼠背部涂抹4％ 氢醌,建立小鼠背毛脱色模型.同时在治疗组上施加筛选出的天然药物.结果:发现葡萄籽提取物在细胞水平上能显著提高黑色素的生成情况,并且在白癜风模型小鼠的治疗上也有显著效果.
