多酚氧化酶在食品和中药领域中的应用

多酚氧化酶(Polyphenol oxidase,PPO)是自然界中分布极为广泛的一种金属蛋白酶,普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中,甚至在土壤中腐烂的植物残渣上都可以检测到多酚氧化酶的存在.本文通过对多酚氧化酶广义上所分三大类的了解,一一阐述了多酚氧化酶这三大类别分别在食品和中药领域中的应用.

旱莲草等中药对皮肤酪氨酸酶mRNA表达的影响

目的选择离体实验中对黑色素合成的的作用机制.方法旱莲草、夏枯草、女贞子、鸡血藤、刺蒺藜、薄荷、甘草及补骨脂分别制成乙醇提取物,以棕色豚鼠为动物模型,采用mRNA原位杂交方法观察中药外涂对豚鼠皮肤酪氨酸酶mRNA水平的影响.结果中药处理组原位杂交阳性细胞数和杂交信号的灰度值明显高于和低于乙醇组和生理盐水组(P＜0.01),尤其以旱莲草、夏枯草、刺蒺藜等显著.结论旱莲草等7种中药能上调酪氨酸酶的基因表达.

中西药对白癜风发病机制中酪氨酸酶调控的研究现状

酪氨酸酶(Tyrosinase,TYR)是皮肤黑素生成途径中的主要限速酶,是黑素细胞分化成熟的一个特征性标志,其活性与黑素合成含量呈正相关.黑素在黑素细胞的黑素小体中合成,由酪氨酸酶催化酪氨酸生成多巴和多巴醌,再经过一系列反应而合成,并通过黑素细胞的树突而运输到附近的角质形成细胞中,从而形成表皮的色素.

白癫消酊剂促实验白癜风黑色素生成作用机制研究

目的 探讨自制白癫消酊剂促实验白癜风黑色素生成作用机制.方法 40只豚鼠分成4组:即正常对照组(Normal)、模型对照组(Model)、白癜消酊剂治疗组(BDXD)、敏白灵阳性对照组(Control),每组10只.采用5％氢鲲外搽复制豚鼠白癜风模型,连续给药40天后,观察其病理组织学变化及皮肤色素变化评价,并采用紫外分光光度法检测其外周血酪氨酸酶(TYR)、单胺氧化酶(MAO)、胆碱酯酶(CHE)水平.结果 与模型组比较,自制白癜消酊给药后,皮肤颜色明显加深,总有效率明显增加,同时表皮毛囊黑色素明显增加(P＜0.05),且外周血TYR、MAO、CHE水平均显著升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 自制白癜消酊可有效缓解豚鼠白癜风白斑严重程度,其可能与酪氨酸酶活性增强有关.

339 巴西蜂胶中抑制酪氨酸酶的物质

中医药治疗白癜风作用机制的相关研究进展

近十年,中医药方法治疗白癜风取得的疗效备受瞩目;有关中医药治疗白癜风的作用机制研究日益增加,在相关领域取得了一定的研究成果;本文集有关中医药治疗白癜风作用机制相关研究从研究对象、黑素细胞的数量及活性、酪氨酸酶的活性、炎症因子、自身免疫、氧化应激反应及信号通路等层面进行综述,望帮助研究者进一步探索中医药治疗白癜风的作用机制,指导临床用药,终致患者满意疗效.

还原型谷胱甘肽与维生素C联用对黄褐斑的治疗作用

目的 实验以酪氨酸酶的活性水平作为指标,证明还原型谷胱甘肽(Glutathione,GSH)能显著的抑制酪氨酸酶活性,继而抑制多巴醌的生成,从而阻断黑色素形成,达到抑制黄褐斑生成的目的.方法 酪氨酸酶是黑色素合成的关键酶,而黑色素又是黄褐斑形成的关键,因此对酪氨酸酶的抑制作用对黄褐斑的治疗起着至关重要的作用,本实验通过A375黑色素瘤进行细胞实验研究GSH+维生素C(Vitamin C,Vit C)对酪氨酸酶的抑制作用.结果 在72 h时内,各浓度GSH+VitC溶液对A375黑色素瘤细胞均具有抑制效果,浓度为50.00~200.00μg/ml时抑制效果为显著.结论 实验结果表明GSH+VitC能显著的抑制酪氨酸酶的活性,且其对酪氨酸酶的抑制率随着摩尔质量分数增大而增大,达到一定值时增长缓慢,其对黄褐斑的治疗能够起到明显的作用,为治疗黄褐斑的临床研究应用提供了有效的依据.

小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关基因表达的影响

目的:研究不同浓度小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关酶酪氨酸酶(tyrosinase,TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(tyrosinase related protein-1,TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(tyrosinase related protein-2,TRP-2)mRNA表达的影响.方法:采用CCK8检测细胞活力,选取小柴胡汤低、中、高质量浓度分别为0.1,1,2.5 g·L-1用于实验,逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测B16细胞中TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA的表达.结果:与正常组比较,随着浓度的增加,小柴胡汤水煎液能够显著下调细胞TYR,TRP-1,TRP-2 mRNA的表达(P＜0.05,P＜0.01).结论:小柴胡汤对黑素合成的抑制作用除了通过直接抑制TYR活性外,还可通过下调酪氨酸酶家族其他成员TRP-1,TRP-2的基因表达、蛋白合成3方面实现其抑制黑素生成的作用,提示小柴胡汤对黑素生成的抑制可通过对酶蛋白转录后调节途径来实现.

山茱萸水提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的:考察山茱萸水提取物对体外构建的人黑素瘤细胞(A375)与角质形成细胞(Hacat)单层混合共培养模型黑素合成的影响.方法:将山茱萸水提取物制备成含生药0.75～12 g·L-1 5个质量浓度,细胞给药,通过MTT法、NaOH裂解法、多巴氧化法分别测定给药前后A375细胞与Hacat细胞共培养模型的细胞活力、黑素含量和酪氨酸酶活性.结果:与空白对照组相比,6,3,1.5,0.75 g·L-1山茱萸水提取物对共培养体系的细胞增殖率影响不大,对共培养体系黑素生成均有显著差异(P＜0.01),对共培养体系酪氨酸酶活性有差异(P＜0.05或P＜0.01);与阳性对照药物熊果苷相比,6,3 g·L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成有显著差异(P＜0.01),作用强于熊果苷,1.5,0.75 g·L-1山茱萸水提取物对共培养体系黑素生成无差异;与阳性对照药物熊果苷相比,6,3,1.5,0.75 g·L-1山茱萸水提取物对共培养体系酪氨酸酶活性无差异.结论:山茱萸水提取物能够通过抑制酪氨酸酶活性来抑制A375细胞和Hacat细胞共培养体系的黑索合成,为临床使用山茱萸治疗黄褐斑提供了实验依据.

高温处理补骨脂对酪氨酸酶活性的影响

目的:研究高温处理补骨脂对酪氨酸酶活性的影响.方法:采用体外酪氨酸酶多巴速率氧化微量法,测定高温处理补骨脂后对酪氨酸酶活性的影响.结果:除低浓度和30 min中浓度外,同一浓度和高温处理时间下,随着温度的升高,对酪氨酸酶的激活率逐渐增大;同一浓度和温度下,随着高温处理时间的增大,对酪氨酸酶的激活率未呈现规律性的增强或减弱的趋势,其中,在2g·L-1浓度下,121℃加热40 min和20 min对酪氨酸酶的激活率高,分别为135.45％±4.29％和106.97％±3.21％.结论:控制合适的高温处理时间和温度可以增强补骨脂浸膏对酪氨酸酶的激活活性.

甘草黄酮分离纯化工艺

目的:筛选具有酪氨酸酶抑制作用的甘草黄酮分离、纯化工艺.方法:以甘草总黄酮含量及酪氨酸酶抑制率为指标,对甘草黄酮分离纯化工艺进行优化,同时考察不同分离条件对其酪氨酸酶抑制活性的影响.结果:甘草黄酮的佳分离纯化工艺为30 ～ 60目聚酰胺,上样液pH 6,料液比(甘草黄酮粗提物-聚酰胺)32.48:1,上样液质量浓度3.215 g·L-1,洗脱剂乙醇体积分数70％,洗脱流速3 mL·min-1·g-1,洗脱剂用量1 BV.结论:采用该优选工艺成本低,收率高,安全,操作简便,适合工业化大生产.

基于美白功效对当归补血汤药效关系的分析

目的:通过研究当归补血汤中黄芪、当归不同配比对美白功效的影响,探索该复方美白功效的佳药效配比.方法:采用生化酶学法测定当归补血汤对酪氨酸酶的抑制率1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)分析法测定当归补血汤的抗氧化活性,综合2种方法筛选当归补血汤的美白功效的佳药效配比.采用Franz扩散池试验评价该复方的透皮吸收效果.结果:当归补血汤的配伍佳剂量组合为黄芪-当归(1∶7),对酪氨酸酶活性的抑制率89.65％,对DPPH自由基的清除率90.96％.阿魏酸和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的24 h累积透过量分别为0.030 4,0.001 2 mg·cm-2,渗透率依次为59.27％,57.79％.结论:方剂配伍比例的变化会影响其功效的发挥,甚至改变组成方中药物的地位,使全方主治证及功用发生变化,为当归补血汤开发成为绿色天然美白化妆品提供参考.

补骨脂酚对酪氨酸酶活性的影响及动力学分析

目的:采用酶促反应动力学方法研究补骨脂酚对酪氨酸单酚酶和二酚酶活性的影响,并考察补骨脂酚对酪氨酸酶的作川机制及动力学参数 方法:在pH6.8的磷酸盐缓冲体系中,分别以L-酪氨酸和左旋多巴为底物,37℃反应后在475 nm处测定吸光度,研究补骨脂酚对酪氨酸酶催化反应进程和酶活性抑制的影响,计算抑制动力学参数.结果:补骨脂酚对酪氨酸单酚酶和二酚酶均有抑制作用,半抑制浓度分别为1.49,0.41 mmol· L-1,其中对酪氨酸二酚酶的抑制作用表现为可逆抑制,其抑制作川表现为竞争性抑制,抑制常数0.955 mmol·L-.结论:在低浓度范围内,补骨脂酚对酪氨酸酶的抑制作用较熊果苷更明显,具有开发成天然酪氨酸酶抑制剂的潜力.

甘草桔梗皂苷对酪氨酸酶抑制的合并效应研究

目的:考察不同比例桔梗和甘草皂苷合用对酪氨酸酶的抑制作用.方法:改进传统的分光光度法,在微孔板上测定甘草、桔梗皂苷及二者的不同配比对酪氨酸酶的抑制活性,并采用国外常用的等高线和改良的等高线法对甘草桔梗不同配比的合用作用进行评价.结果:随着配比中甘草皂苷含量的增多,药物对酪氨酸酶的抑制活性从拮抗、相加到协同.结论:配比直接影响两药合用的效果.

28味中药酸性成分提取物影响黑素合成的实验研究

目的:证实中药酸性成分对黑素的产生具有抑制作用.方法:采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法,体外测定28味中药酸性成分高、中、低浓度对酪氨酸酶活性的影响.结果:①28味中药酸性成分在高浓度(25g/L)时对酪氨酸酶活性均具有抑制作用,其中乌梅抑制率高,达96.50%;五味子次之为85.33%,与2mol/L的熊果苷抑制作用(56.67%)相比有极显著差异(P<0.01);地肤子(81.66%)、枇杷叶(81.65%)等8味中药酸性成分有显著差异(P<0.05).②19味中药酸性成分高、中、低浓度对酪氨酸酶活性呈剂量依赖性抑制作用.③甘草、枸杞子、五味子等8味中药酸性成分对酶活性呈高浓度抑制,中、低浓度激活的双向作用.结论:中药酸性成分提取物可抑制黑素的合成,其机制与抑制酪氨酸酶活性有关.

小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关蛋白表达的影响

目的:研究不同浓度小柴胡汤对B16黑素瘤细胞黑素合成相关酶酪氨酸酶(TYR),酪氨酸酶相关蛋白-1(TRP-1),酪氨酸酶相关蛋白-2(TRP-2)蛋白表达的影响.方法:采用CCK8检测细胞活力,选取小柴胡汤低、中、高浓度分别为0.1、1.0、2.5mg/mL用于实验,Western Blot法检测B16细胞中TYR、TRP-1、TRP-2蛋白的表达.结果:与对照组比较,随着浓度的增加,小柴胡汤水煎液能够显著下调细胞TYR、TRP-2蛋白的表达(P＜0.05,P＜0.01);小柴胡汤中、高浓度组较对照组降低TRP-1活性(P＜0.01).结论:小柴胡汤对黑素合成的抑制作用除了通过直接抑制TYR活性外,还可通过下调酪氨酸酶家族其他成员TRP-1、TRP-2的基因表达、蛋白合成三方面实现其抑制黑素生成的作用,提示小柴胡汤对黑素生成的抑制可通过对酶蛋白转录后调节途径来实现.

复方中药益气祛白方对蘑菇酪氨酸酶活性及黑素生成的影响

目的:运用血清药理学方法研究益气祛白方对体外酪氨酸酶(TYR)活性及多巴色素自动氧化生成黑素量的影响.方法:分别以益气祛白方的水提物与醇提物制备含药血清,体外观察其对于TYR活性及多巴色素自动氧化生成黑素量的影响.结果:益气祛白方水提物及醇提物均可以明显提高TYR活性和多巴色素自动氧化生成的黑素量,与正常对照组比较,差异具有显著意义(P＜0.05),其中益气祛白方水提组效果更好.结论:益气祛白方对TYR活性和多巴色素自动氧化生成黑素的上调作用在白癜风的治疗方面具有积极意义.

荧光猝灭法研究肉桂酸及壬二酸对酪氨酸酶的相互作用

目的:研究肉桂酸和壬二酸与酪氨酸酶的相互作用机制,特别是两种化合物合用对酪氨酸酶的抑制作用模式.方法:运用荧光光谱猝灭法,计算了不同温度下肉桂酸和壬二酸与酪氨酸酶的结合常数Ka,结合位点数n,以及对应的热力学参数ΔG,ΔH和ΔS,探讨了它们之间的作用力类型,并运用Hill方程研究了药物协同性.结果:肉桂酸对酪氨酸酶荧光猝灭是静态猝灭过程;壬二酸对酪氨酸酶荧光猝灭是动态猝灭过程.结论:有壬二酸存在的条件下,肉桂酸对酪氨酸酶的荧光猝灭作用能明显增强.此研究为进一步研究肉桂酸及壬二酸,提供了新的思路.

复色1号方对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响

目的 探讨复色1 号方对小鼠B16 黑素瘤细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响.方法 采用MTT 法测定不同浓度的复色1 号方对小鼠B16 黑素瘤细胞增殖的影响,多巴速率氧化法测定对酪氨酸酶活性的影响,对其结果进行统计分析.结果 复色1 号方浓度在0.001～0.01g/l,范围内对小鼠B16 黑素瘤细胞的增殖与对照组相比无统计学意义(P＞0.05),0.05～0.1g/l 浓度范围内对小鼠B16 黑素瘤细胞的增殖与对照组相比有显著意义(P＜0.05),呈现一定的抑制作用;复色1 号方在0.001～0.1g/l 浓度范围内对小鼠B16 黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性的影响与对照组相比,各浓度含药培养基组的A 值均有显著性差异(P＜0.05),呈剂量依赖性激活作用.在0.001～ 0.01g/l 浓度范围内,复色1 号方的佳激活浓度为0.01g/l.结论 复色1 号方没有促进小鼠B16 黑素瘤细胞增殖的作用;在一定浓度范围内(0.001～0.1g/l),对小鼠B16 黑素瘤细胞酪氨酸酶的活性呈剂量依赖型激活作用.

响应面法优化桑椹黄酮超声辅助提取工艺及对酪氨酸酶活性抑制研究

目的 优选桑椹黄酮的提取工艺及其对酪氨酸酶活性的抑制.方法 在单因素试验基础上,采用响应面Box-Behnken中心组合设计试验,以乙醇浓度、料液比、超声时间、超声温度为自变量,黄酮含量为响应值,建立二次回归方程,研究各因素对黄酮含量的影响,同时运用多巴速率氧化法测定提取液对酪氨酸酶活性的影响.结果 通过二次回归模型响应面分析确定了超声辅助提取桑椹黄酮的佳条件:40％乙醇,料液比1∶30,超声温度60℃,超声时间50 min.在此条件下,黄酮含量为(19.16±0.23) mg/g,与理论预测值吻合,酪氨酸酶抑制率为(61.47-± 1.79) ％.结论 由响应面法优化得到的桑椹黄酮提取工艺方便可行,且具有较强的酪氨酸酶活性抑制作用.