首页 > 文献资料
-
雪旺细胞体外培养的研究进展
近年来,人们研究发现,雪旺细胞(Sc),作为周围神经系统的主要胶质细胞,其功能极其活跃[1],它能分泌多种神经营养因子及轴突引导因子,维持周围微环境的稳定,防止神经元胞体死亡和促进神经元轴突的再生;合成和分泌诸如层黏连蛋白(LN),纤维黏连蛋白(FN)及Ⅰ、Ⅲ和Ⅴ型胶原等细胞外基质和细胞黏附因子,与神经系统的发育和再生有着密切的关系,尤其是在神经系统损伤后功能恢复上有着重要的作用[2].目前,运用雪旺细胞移植修复损伤的神经元是研究的热点,但是如何能快速获取大量纯化的雪叶细胞是移植的关键.为此,掌握雪旺细胞的培养方法,了解当前雪旺细胞培养进展显得尤为重要.本文就雪旺细胞的获取,培养技术的原理,方法,及其分离,纯化,扩增,鉴定等方面的研究做如下综述.
-
鼠胚脊髓运动神经元原代培养方法的改进
神经细胞原代培养是研究神经细胞形态及功能的重要手段之一.传统方法是将神经细胞与神经胶质细胞混合培养,无法满足在单一神经细胞培养基础上进行实验研究的需要.本实验在传统培养方法的基础上加以改良,对原混合培养方法在胎龄、取材、温度、消化、换液、抑制剂、机械操作等方面进行了控制和改进.本培养方法具体改进如下: 1.运动神经细胞取自E14大鼠胚胎的脊髓.因为胚胎运动神经元形态分化和化学分化程度较低,体外存活能力强,E14胎鼠脊髓易剥离.而传统方法是取E12~E16.E1 2胎鼠组织太嫩,不易分离;E16胎鼠脊柱已部分骨化,血液太多,挑离脊髓时易形成撕裂损伤.2.取材时将脊髓沿冠状面切开,取脊髓腹侧半,改变传统的整个脊髓培养,以达到培养单一运动神经元的目的.3.整个取材过程在冰袋上进行,更好的保持细胞活力.4. 严格控制胰酶的浓度和消化时间.胰酶浓度是0.125%,37℃二氧化碳孵育箱内消化 0.5hr较好,采用4℃含血清的DMEM液适时终止反应.为避免组织丢失,改吸弃胰酶为吸组织于另一试管中,且迅速终止消化反应.5.减少传统方法中的吹打次数,用弯头吸管代替直头吸管吹打;取消离心或细胞筛过目等步骤,降低细胞损害程度.6.细胞种植后改传统换全液为换半液,改传统培养2d换液为定时观察,按需换液.这样不仅保证了细胞在已适应了的环境中生长,并且减少了污染的机率.7.本方法不使用抑制剂,减少药物对运动神经元的损伤,使神经细胞在更接近于体内自然环境中生长.种植细胞1~2hr即可观察到细胞贴壁,胞体呈圆形,饱满、透亮,有短的突起出现.因此,本方法的优点是: 不仅能够大大缩短从取材到种植的时间,提高运动神经元的活性,而且成功的获得了相对单一的运动神经元培养物(纯度达90%以上),为进一步开展神经生物学研究提供了相对稳定的体外模型.
-
肝细胞简易分离、培养和鉴定方法初探
长期以来,Guguen等[1]的两步胶原酶灌注法分离获得肝细胞的方法,几乎成了肝细胞分离的经典方法;在此基础上又发展了多种不同的培养方法,如在培养瓶内加纤连蛋白(febronectin)以促进肝细胞附壁[2],添加生长因子于培养基促其生长等.但上述方法步骤繁琐,成本较高,且两步胶原酶灌注法主用于大鼠肝细胞的分离,不适于新生鼠肝细胞的分离,甚至分离成年小鼠肝细胞,都因为血管的纤细,在实际应用中也很困难.
-
肝细胞原代培养在毒理学研究中的应用
人们早采用整体动物实验研究化学物毒性及毒作用机制.随着细胞培养方法的建立和成熟,其在毒理学研究领域中的应用已越来越广泛.1967年Howard报道了用胶原酶和透明质酸酶灌流肝脏并分离肝细胞的新方法,使原代肝细胞的培养成为一种简便、快速、经济的毒理学体外实验系统.
-
羊水细胞培养染色体检查在产前诊断中的应用
羊水脱落细胞培养及染色体核型分析目前仍是应用为广泛的一种可靠的产前诊断方法,羊水细胞培养要求高,给实际操作带来了一定的困难,我们根据本室的具体情况,对传统培养方法做了一些改良,进行了101例羊水染色体的制备,现报告如下.
-
大肠腺瘤细胞原代培养方法的初步研究
近年流行病学、病理形态学和分子遗传学从不同角度揭示了"大肠腺瘤-癌"序列变化过程[1,2],证实腺瘤为癌前病变[3],对这一癌前病变的研究也越来越受到人们重视.目前关于大肠腺瘤细胞的体外培养,国内外报道尚不多[4-6].本研究从人大肠腺瘤组织取材,分离培养大肠腺瘤细胞,探索其培养方法,以期为今后研究大肠腺瘤的体外试验奠定初步的方法学基础.
-
护士情绪智力培养的研究进展
随着临床护理模式的转变,人们对健康的关注日益增加,对护理服务的需求也逐渐增长,使得护理工作面临巨大的挑战。护士不仅要具备扎实的业务理论知识和精湛的护理技术,更要在复杂多变的医疗环境中学会理解他人,具有掌控和调节自己与他人情绪能力以及拥有良好人际沟通能力[1]。但现实中护士对情绪的把握、控制及感知能力远没有达到“以病人为中心”的服务需求。许多病人对护理工作不满意的不是技术问题,而是护士缺乏对病人的移情能力,没有给予病人足够的人文关怀和有效沟通。有研究[2]证实,拥有高情绪智力,可帮助临床护士正确识别自己的情绪,并通过认知和行为策略有效调控自己的情绪,避免不良情绪影响工作;还能很好地理解病人,从病人的利益出发,根据病人的不同需求,不断满足病人的身心需要。可见,只有加强护士情绪智力培养,才能使护理达到一个新的飞跃,满足人们日益提升的服务需求。
-
一种用改装消毒器培养空肠弯曲菌的实用方法
空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni,CJ)系螺旋科弯曲菌属胎儿亚种,为一类微需氧嗜热Gram阴性杆菌.是世界范围内常见的胃肠道致病菌之一.在亚洲、欧洲、非洲、澳洲及南美洲急性或亚急性腹泻病例中分离率高达11%以上[1].因此,该类细菌的快速有效培养具有应用意义.目前常用换气法、烛缸法、减压产气法及微氧袋法.但是上述方法均需要较为特殊的仪器,或气体条件不好控制,往往导致培养失败或生长不好.本文报告了一种简便而有效的CJ的培养方法.
-
基层年轻护士长管理能力培养方法初讨
随着医院规模的扩大,护理队伍也迅速增大,本院于2003~2007年采用竞聘上岗方式新聘6名护士长.这些护士长作为护士,无疑是优秀的,但要成为一个新时期的合格管理者,还存在很大差距.她们在管理工作和病房运作方面缺乏相应的知识和能力的准备.
-
解脲脲原体和人型支原体培养方法的比较研究
目的 探讨泌尿生殖道解脲脲原体和人型支原体佳的培养方法.方法 用液体培养法、传统培养法、直接固体培养法对临床198例标本进行培养.结果 传统方法总阳性检出率为39.9%(79/198),液体法总阳性检出率为44.9%(89/198),直接固体法总阳性检出率为49.5%(98/198).液体法与传统法比较,两法阳性检出率有显著性差异(x2=4.05,0.01
-
直接涂片法检查淋球菌技术的实验定控制
近年来,我国性病蔓延迅速,其中以淋病为主,约占性病的80%左右。淋病的实验室检查方法有直接涂片法、细菌培养法、拭条怜惜检法、免疫学法等。WHO强调培养方法,但我国目前许多实验室,尤其基层单位的实验室一段时间开展培养工作仍有困难。
-
UCG-淋病初筛的理想试验
淋病奈瑟氏菌(Nesseria Gonorrhoeae)的检测有许多种方法,经典的涂片法阳性检出率低,而传统的培养方法要求高,不适合基层医院开展.
-
1105例血液细菌培养结果分析
目的:了解单用硫酸镁葡萄肉汤血液增菌培养方法能否及时为临床提供诊断及治疗依据.方法:使用上述培养方法对某些住院部疑为败血症病人的血液进行细菌培养.结果:1105份血液标本中77份分离出细菌,检出率为7%.结论:由于抗生素的广泛使用和周围环境的变化造成细菌自身变异,此方法已不能完全反映临床细菌的感染情况,需在做此方法培养的同时,加做厌氧培养,L型细菌增菌培养.使用微生物分析仪快速培养、鉴定.
-
机械牵拉细胞培养方法与机械应力对培养细胞影响的研究进展
在机械应力的作用下,细胞的生长发生改变,细胞分裂增殖,这在医学领域中很常见,整形外科的皮肤软组织扩张术、牵张术,骨科的肢体牵引延长术以及颅颌面外科的颅颌骨牵引术等通过外力刺激因素获得"额外"组织的临床技术便是基于这一原理,同时此类现象亦见于一些病理变化之中,如肾小球高血压对系膜细胞的反复压力刺激而使之增生等.近年来,机械应力对组织细胞的作用机理已越来越受到有关学者的关注.尽管基于该原理的此类技术已广泛应用于临床,在该领域也开展了一些基础研究,并取得了初步的结果,但是,机械应力作用于组织促进细胞增殖的详细原理仍不清楚.在近二十多年的时间里,随着机械作用细胞培养模型的建立,应力对体外培养细胞作用的研究得以实现,已取得了一批成果.本文就该领域的研究方法及研究进展予以综述.
-
大鼠原代小胶质细胞的分离和培养方法的改进
目的:探索改进大鼠原代小胶质细胞培养分离纯化方法,以获取数量多、功能活性稳定的小胶质细胞.方法:在Miriam Mecha的混合胶质细胞培养方法的基础上稍加改良,采用直立手摇法进行分离纯化小胶质细胞,细胞铺板后再采用差速贴壁法进一步得到更纯的小胶质细胞.使用台盼蓝法进行细胞计数;采用CD11b免疫荧光方法对纯化的小胶质细胞进行纯度鉴定;采用原代小胶质细胞吞碳粒实验对其功能活性进行检测.结果:改进的方法可以稳定地获取大约1×106个/培养瓶(75 cm2,10 ml)的小胶质细胞,纯度达到98%,并且其吞噬活性也非常强.结论:改进的原代小胶质细胞培养方法操作时间短,获得细胞数量多、稳定性好、纯度高、功能活性强,且可第二次收获细胞,对于离体条件下进行小胶质细胞的研究具有广泛的实用价值.
-
大鼠大脑皮层神经干细胞培养方法比较
目的:比较不同培养基对大脑皮层神经干细胞增殖的影响,以寻找培养神经干细胞的有效方法.方法:体外分离生后24 h SD大鼠大脑皮层细胞,使用DMEM/F12+ B27+ bFGF、Neurobasal+ B27 bFGF和Neurobasal+B27三种培养条件,分别用悬浮培养法和贴壁培养法对细胞进行培养.免疫细胞化学技术分别以Nestin、β-TubⅣ和GFAP标记神经干细胞、神经元和星形胶质细胞.结果:在悬浮培养情况下,三种培养条件均诱导所培养的细胞形成神经球,经染色鉴定神经球中的细胞均表达Nestin;其中DMEM/F12+ B27+ bFGF培养的神经干细胞增殖速度快(P<0.01),Neurobasal+B27培养的神经干细胞增殖效率高(P<0.01).在贴壁培养情况下,经染色鉴定,部分细胞表达β-TubⅢ或GFAP.结论:大脑皮层神经干细胞不适合贴壁培养,DMEM/F12+ B27+ bFGF条件适合大脑皮层神经干细胞体外增殖.
-
糠秕孢子菌培养方法的改进
糠秕孢子菌是一种嗜脂酵母菌。花斑癣是由糠秕孢子菌引起的浅表角质层的慢性真菌病。1999年6~7月,我科采用改进的培养方法,对42例花斑癣患者的皮损鳞屑进行了培养观察。现报告如下。
-
病原真菌菌种的五年调查及分析
为研究和了解病原真菌的分布及动态,我们对自1994年~1998年在我院分离的深、浅部真菌和条件致病菌作了调查分析,结果如下. 标本与方法浅部真菌标本均来自皮肤科门诊,深部真菌标本为病房、门诊及外院送检.培养方法:标本均接种于沙堡弱葡萄糖琼脂(SDA),浅部真菌的鉴定根据菌落生长的快慢、菌落形态特征及颜色、镜下孢子及菌丝的特征等确定其菌种.必要时作特殊鉴定;深部真菌的鉴定如系酵母先作芽管试验,如非白念珠菌经纯化后作API20C酵母同化试验,鉴定至种,霉菌则依据其菌落形态、色素及镜下产孢结构的特征确定,或在察氏培养基上作鉴定.
-
琼脂块培养法选育林可霉素菌种
诱变育种对于不断获得高产优质菌株、提高微生物发酵单位和产品质量都有很大的促进作用。近年来人们尝试将琼脂块培养方法用于春雷霉素菌种的选育[1],我们将该方法用于林可霉素菌种的筛选。1 仪器与材料1.1 仪器 ZY-300抗生素效价测定仪(北京先驱威锋技术开发公司);摇床(江苏金坛市医疗仪器厂)。1.2 试药 N-甲基-N,-硝基-N-亚硝基胍(NTG,武汉大学培养物保藏中心)。1.3 菌种林可霉素产生菌(林肯链霉菌S.linconlensis:12—97;山东大学微生物系微生物研究所);藤黄八叠球菌(聊城市药品检验所生测室)。
-
手术室专科护士培养方法研究
目的探讨手术专科护士培养的方法。方法运用包括改变理念框架、多层级管理和多样化培养方式。结果结合其特点提出了多样化培养模式和方法。结论加强手术室专科护士的培养与管理,可有效提升护理质量,有效发挥专科作用,提高人才队伍建设。