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卡介苗穿梭质粒pMSIFN-α2a的构建与鉴定

周晓燕;冯永堂;苗乃法

摘要: 目的 构建分泌性表达IFN-α2a的卡介苗重组质粒.方法 分别以卡介苗(BCG)和IFN-α2a cDNA为模板,通过PCR扩增得到约117bp的BCG-Ag85B信号肽序列和495bp的IFN-α2a基因序列.将BCG-Ag85B信号肽序列与大肠杆菌-卡介苗穿梭表达载体pMV261重组,得到重组质粒pMS.再将IFN-α2a基因序列克隆至pMS中,得到重组质粒pMSIFN-α2a.结果 质粒pMSIFN-α2a用双酶切和PCR扩增及测序鉴定证实,克隆基因BCG-Ag85B和IFN-α2a正确插入载体pMV261.结论 重组质粒pMSIFN-α2a可望在BCG中分泌性表达细胞因子IFN-α2a,从而促进IFN-γ的释放,该质粒的构建成功为改造卡介苗、发展新型抗膀胱肿瘤疫苗奠定了基础.

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