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PI3K/Akt信号通路在肿瘤中的表达及其与增殖和凋亡的作用
磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3 kinese/protein kinase B,PI3K/Akt)信号通路是1987年发现小鼠的白血病病毒可以引起上皮细胞系CCL264出现恶性转化灶,而在这个反转录病毒中找到的一个癌基因,由于该蛋白激酶需要丝氨酸、苏氨酸位点的磷酸化,故命名为蛋白激酶(Akt)[1] .它在真核生物的调控网络中普遍存在,同时是多种信号传导通路的相互交叉连接的重要枢纽,可调节多种细胞外因子的信号传递,并与Ras癌基因激活的过程密切相关[2].
关键词： 磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B 肿瘤 增殖 凋亡 -
LY294002对小鼠体内调节性T细胞的影响
背景:研究已证实,磷酸肌醇3激酶特异性阻滞剂LY294002在体外具有剂量依赖性抑制细胞活性的作用,可以用于诱导肿瘤细胞凋亡,但LY294002对正常免疫系统的影响尚不清楚.目的:观察抗肿瘤药物LY294002对C57BU6小鼠体内调节性T细胞的影响.设计、时间及地点:以调节性T细胞比例为观察对象,分组对比实验,于2008-08/12在广州南方医科大学珠江医院移植免疫研究所完成.材料:14只8周龄SPF级C57BL/6小鼠随机分成实验组与对照组,每组7只.LY294002购自广州英韦创律公司.方法:实验组腹腔注射LY294002溶液200 μL(0.1 mg),对照组给予等体积PBS.1 0 h后后眼眶静脉从采血,并分离脾脏、胸腺,制备单细胞悬液,流式细胞术检测小鼠外周血、脾细胞和胸腺细胞中的CD4+CD25high T细胞.主要观察指标:小鼠外周血、脾细胞和胸腺细胞中CD4+CD25high T细胞的比例.结果:实验组小鼠外周血、脾脏、胸腺中CD4+CD25high T细胞比例分别为(0.787±0.036)%,(0.921±0.063)%,(1.230±0.131)%,对照组小鼠外周血、脾脏、胸腺中CD4+CD25high T细胞比例分别为(0.640±0.030)%,(0.639±0.046)%,(0.857±0.077)%.实验组和对照组比较差异有显著性意义(P＜0.01,P＜0.05).结论:腹腔注射LY294002可提升小鼠体内调节性T细胞的比例,提示其有可能会抑制机体免疫反应,从而不利于治疗.
关键词： 磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B LY294002 调节性T细胞 -
GDNF在精原干细胞中对H19和A-myb表达的调控研究
目的 通过研究胶质细胞神经源性营养因子(GDNF)对H19和A-myb表达的调控,探讨GDNF调节精原干细胞自我更新的分子机制.方法 采用混合酶消化和差速贴壁法从出生后6d的小鼠睾丸中分离、鉴定并培养精原干细胞.用GDNF分别刺激精原干细胞和经磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路抑制剂LY294002预处理的精原干细胞后,采用RT-PCR技术检测细胞H19和A-myb的表达.结果 相关鉴定分析证实分离培养的细胞为精原干细胞.RT-PCR检测结果显示:GDNF刺激下的精原干细胞的H19和A-myb表达均显著上调,而经LY294002预处理的精原干细胞在GDNF刺激下其H19和A-myb的表达无明显变化.结论 在体外培养的小鼠精原干细胞中,GDNF通过PI3 K/A kt信号通路上调H19和A-myb的表达.
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吡格列酮对代谢综合征大鼠骨髓内皮祖细胞迁移能力的促进作用及其机制
目的 探讨吡格列酮(PIO)对代谢综合征(MS)大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs) 迁移能力的影响及其机制.方法 建立MS大鼠模型,培养MS大鼠骨髓EPCs,并进行鉴定EPCs.用细胞计数法对正常对照组、MS组及PIO干预组大鼠骨髓EPC迁移能力进行比较.将培养7d的EPCs分5组,分别加入一定浓度的PIO、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)拮抗剂GW9662、PIO及磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通道阻滞剂 Wortmannin、PIO及细胞外信号调节激酶(ERK)通道阻滞剂PD98059;并设立空白对照组,检测EPCs的迁移.结果 MS组较对照组迁移EPCs 数量明显减少(21.13±2.77比33.20±3.06,t=3.461,P=0.000);PIO组较MS组迁移EPCs数量增多(27.16±2.27比21.13±2.77,t=2.909,P=0.008).PIO可明显改善体外培养的MS大鼠骨髓EPCs迁移(13.30±3.11比24.90±5.10,t=4.509,P=0.005),GW9662和Wortmannin干预均可减弱PIO的促EPCs黏附作用,而PD98059不能减弱PIO的促EPCs迁移作用(24.90±5.10比25.10±4.99,t=0.431,P=0.153).结论 PIO可促进MS大鼠骨髓EPCs的迁移,这可能是通过PI3K/Akt信号通路介导.
关键词： 内皮祖细胞 代谢综合征 吡格列酮 迁移 磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B -
吡格列酮对代谢综合征大鼠骨髓内皮祖细胞黏附能力的促进作用及其机制
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂吡格列酮(PIO)对代谢综合征大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)黏附能力的影响及其机制.方法 建立代谢综合征大鼠模型,使用密度梯度离心法及差速贴壁法联合的方法培养代谢综合征大鼠骨髓EPCs,并使用双荧光染色的方法进行鉴定.用细胞计数法对正常对照组(NC组)、代谢综合征组(MS组)、PIO组等3组大鼠骨髓EPC黏附能力进行比较.将体外培养7d的代谢综合征大鼠骨髓EPCs分5组:空白对照组、PIO干预组、PIO及PPARγ拮抗剂GW9662干预组、PIO及磷酸肌醇3激酶(PBK)/蛋白激酶B(Akt)通道阻滞剂Wortmannin干预组、PIO及ERK通道阻滞剂PD98059干预组;检测EPCs的黏附.结果 代谢综合征组较正常对照组贴壁EPCs数量明显减少[(21.13±2.77)个比(33.20±3.06)个,t=3.516,P=0.000];PIO组较代谢综合征组贴壁EPCs数量增多[(27.16±2.27)个比(21.13±2.77)个,t=2.917,P=0.007].PIO可明显改善体外培养的代谢综合征大鼠骨髓EPCs黏附[(35.50±3.56)个比(21.30±2.78)个,t=4.512,P=0.006],PPARγ拮抗剂GW9662和PI3K/Akt通道阻滞剂Wortmannin干预均可减弱PIO的促EPCs黏附作用[(22.50 ±3.16)个比(35.50±3.56)个,t=4.512,P=0.006;(23.t0±3.11)个比(35.50 ±3.56)个,t=4.011,P=0.008],而ERK通道阻滞剂PD98059不能减弱PIO的促EPCs黏附作用[(34.90±3.46)个比(35.50±3.56)个,t=0.355,P=0.211].结论 代谢综合征大鼠骨髓EPCs黏附能力减弱,PIO可促进代谢综合征大鼠骨髓EPCs的黏附,这种作用可能是通过PI3K/Akt信号通路介导.
关键词： 内皮祖细胞 代谢综合征 吡格列酮 黏附 磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B -
第10号染色体缺失的磷酸酶与张力蛋白的同源基因通过调控乳腺癌扩增性抗原1和磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路抑制胆管癌细胞QBC939的增殖能力
目的 探讨第10号染色体缺失的磷酸酶与张力蛋白的同源基因(PTEN)对人胆管癌细胞QBC939增殖能力的抑制作用及其机制.方法 利用4μg PTEN质粒或小干扰RNA(siRNA)转染人胆管癌细胞株QBC939,转染72 h后,采用噻唑蓝(MTT)实验和Western blot检测上调或下调PTEN表达对QBC939细胞增殖能力、乳腺癌扩增性抗原1(AIB1)和磷酸肌醇3激酶(P13K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路中重要的分子标志物表达的影响.结果 人胆管癌细胞株QBC939经PTEN质粒转染72 h后,其吸光度(A)值(0.216 ±0.013)较对照组(0.243 ±0.002)降低(P=0.026),表明增殖能力减弱,同时AIB1蛋白和PI3 K/Akt信号通路中的磷酸化Akt (p-Akt)蛋白表达也明显减少.用siRNA下调PTEN表达,其A值(0.403 ±0.011)较对照组(0.490 ±0.033)降低(P =0.013),表明增殖能力减弱,同时上调AIB1蛋白和p-Akt蛋白表达.结论 PTEN可以通过调控AIB1和PI3K/Akt信号通路抑制胆管癌细胞QBC939增殖.
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受体酪氨酸激酶通过磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B-p21激活激酶-1通路对肝癌细胞转移的调控
目的 观察受体酪氨酸激酶(Axl)在肝癌细胞转移过程中的作用及其对磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)-p21激活激酶-1(PAK1)信号通路的调控作用.方法 体外培养肝癌细胞株MHCC97-H和MHCC97-L细胞.运用Western blot方法研究Axl在肝癌细胞MHCC97-H和MHCC97-L细胞株中的蛋白表达水平.通过短发夹RNA(shRNA)转染肝癌细胞MHCC97-H细胞株抑制Axl的表达,探究Axl对PI3 K/Akt-PAK1信号通路的调控作用机制,并分析Axl蛋白表达与肝癌细胞侵袭与转移的关系.结果 与MHCC97-L细胞株比较,Axl在MHCC97-H细胞株中具有更高的表达水平.MHCC97-H细胞中Axl表达下调降低了PI3K、Akt、PAK1信号通路分子的磷酸化水平,并明显抑制了肝癌细胞的侵袭性;侵袭实验结果示:Axl-短发卡RNA(shRNA)转染组穿过基质胶的细胞数为(23±3)个,较质控组的(37±5)个和正常细胞MHCC97-H组的(38±5)个明显减少(P＜0.05).用PI3K特异性抑制剂LY294002或Akt-小干扰RNA (siRNA)阻断PI3K/Akt信号通路明显抑制PAK1的激活及细胞的侵袭性;侵袭实验结果显示:Akt-siRNA转染组和PI3K特异性性抑制剂LY294002抑制组穿过基质胶的细胞数为(23±3)、(18±3)个,较质控组的(37±5)个,二甲基亚砜(DMSO)组的(38±5)个明显减少(P＜0.05).结论 Axl能够通过PI3 K/Akt-PAK1调节肝癌细胞的转移过程.
关键词： 受体酪氨酸激酶 磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B p21激活激酶-1 肝癌 转移 -
磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路在基质细胞衍生因子-1诱导的Tip血管内皮细胞迁移中的作用
目的 磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路在基质细胞衍生因子-1(SDF-1)诱导的Tip内皮细胞迁移中的作用.方法 采用密度梯度离心法从人外周血单个核细胞中分离培养出血管内皮祖细胞,并将其诱导分化为Tip内皮细胞,将TiP内皮细胞随机分成阴性对照组、AMD3100对照组、LY294002对照组、实验组、AMD3100阻断组、LY294002阻断组、外源性PIP3组,Transwell迁移实验检测各组中Tip内皮细胞的迁移数.结果 实验组迁移到下室的细胞数量[(100.667 ±4.509)个/高倍视野]较阴性对照组[(16.333±2.082)个/高倍视野]增多(t=29.415,P =0.003),AMD3100阻断剂组迁移到下室的细胞数[(20.333±0.577)个/高倍视野]与阴性对照组比较,差异无统计学意义(t=2.590,P=0.096),AMD3100阻断剂组和LY294002阻断剂组迁移到下室的细胞数分别为(20.333±0.577)、(40.000±2.646)个/高倍视野,均小于实验组(t=30.603、20.102,P=0.019、0.006),而在AMD3100阻断剂组中外源性的加入磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)产物PIP3,迁移到下室的细胞数[(99.667±3.786)个/高倍视野]与实验组比较差异无统计学意义(t =0.294,P=1.000).结论 PI3 K/Akt信号通路是SDF-1诱导Tip血管内皮细胞迁移的下游机制之一.
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川陈皮素通过下调磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路诱导凋亡抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖
目的 体外观察川陈皮素对乳腺癌细胞增殖的抑制作用并探讨机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)法观察川陈皮素对人乳腺癌细胞MCF-7增殖影响;Hoechst 33342染色观察川陈皮素处理后细胞形态的变化;膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)/碘化丙锭(PI)检测川陈皮素对MCF-7细胞凋亡的影响;Western blot检测川陈皮素处理后MCF-7细胞中蛋白表达的改变.结果 10 μmol/L川陈皮素能明显的抑制MCF-7细胞生长(P＜0.05),抑制作用呈剂量、时间依赖关系;10、20、40 μmol/L川陈皮素处理24 h后,MCF-7细胞出现细胞核皱缩,凋亡小体,并且细胞凋亡率(13.5％、37.7％、49.96％)随着川陈皮素作用浓度的增加而上升;川陈皮素能引起B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)/B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)比率上升(P＜0.01),磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关蛋白表达下降(P＜0.01).结论 川陈皮素在体外能抑制乳腺癌细胞增殖,其作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路从而诱导细胞凋亡有关.
关键词： 川陈皮素 乳腺癌 脱噬作用 磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B -
吡格列酮对大鼠骨髓内皮祖细胞血管新生能力的促进作用及其机制
目的 探讨选择性过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂吡格列酮(PIO)对大鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)血管新生能力的影响及其机制.方法 采用密度梯度离心法和差速贴壁法培养大鼠骨髓EPCs,并使用双荧光染色的方法进行鉴定.将大鼠骨髓EPCs置于含0、1、10、50、100、200μmol/L PIO的培养基中培养,检测EPCs的血管新生.将培养 7d 的EPCs随机分5组:对照组加含二甲基亚砜的培养液;PIO组加入 50μmol/L PIO;PPARγ拮抗剂组加入 50μmol/L PIO及 10μmol/L PPARγ拮抗剂GW9662;磷酸肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)阻滞剂组加入 50μmol/L PIO及 50μmol/L PI3K/Akt通道阻滞剂Wortmannin;细胞外信号调节激酶(ERK)阻滞剂组加入50μmol/L PIO及20μmol/L ERK通道阻滞剂 PD98059,检测EPCs的血管新生.结果 倒置显微镜下见培养前4d细胞增殖不明显,第5~10天迅速增殖,并可见细胞集落及线状结构形成,第10天可达 80%融合.培养第7天的EPCs具有吞噬Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白和异硫氰酸荧光素(FITC)标记的荆豆凝集素1的功能.10~200μmol/L的PIO均可明显促进EPCs的血管新生,以50μmol/L PIO的作用明显.进一步阻断相关信号通路发现,Wortmannin和GW9662可明显拮抗PIO的促细胞血管新生作用,而PD98059对PIO的作用无影响.说明PIO促进大鼠骨髓EPCs血管新生的作用是通过PI3K/Akt信号通路介导的.结论 PIO可促进EPCs的血管形成能力,这种作用可能是通过PI3K/Akt信号通路介导.
关键词： 内皮祖细胞 吡格列酮 血管新生 磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B
