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miRNA-455延缓长期压力负荷后心力衰竭的机制
目的：探讨上调 miR-455表达改善长期压力负荷后的心力衰竭的机制。方法建立活体小鼠升主动脉缩窄后心室重构的模型。选用18只昆明种雄性小鼠，随机分为手术结扎(升主动脉缩窄)+miR-455为实验组，手术结扎+GFP为阴性对照组和假手术组。术后4周对心肌组织进行苏木精伊红(HE)和马松(Masson)染色观察组织病理学变化；TUNEL染色观察心肌细胞凋亡；聚合酶链反应(PCR)与斑点试验(Western blot)分析 miR-455的靶基因和蛋白。结果实验组小鼠体内 miR-455的表达水平显著高于阴性对照组(P <0.01)。上调 miR-455的表达后可见心肌胶原纤维显著减少；心肌细胞凋亡减轻(P<0.05)。Western blot 分析，钙网蛋白(Calr)是 miR-455的靶蛋白之一。PCR示Calr下降同时也有Calr mRNA的下降。结论上调 miR-455表达可以改善长期压力负荷后的心力衰竭进程，其机制为 miR-455通过降解靶 mRNA使Calr降低改善了心室重构。
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过表达miR-455促进肝癌细胞诱导的管型形成
目的:构建miR-455前体的真核表达载体,探讨其对肝癌细胞诱导管型形成的影响.方法:采用PCR扩增miR-455前体序列,通过双酶切将其连接到真核表达载体pcDNA3中.连接产物转化入大肠杆菌内进行扩增,采用菌落PCR、双酶切和测序鉴定重组子.将构建的质粒转染SMMC-7721细胞,通过real-time PCR检测成熟miR-455的表达,采用ELISA方法检测培养液上清中VEGF的表达.用该上清处理人脐静脉内皮细胞HUVEC后,检测管型形成的情况.结果:本实验成功构建了miR-455前体的真核表达载体,将其瞬时转染SMMC-7721细胞后,real-time PCR检测结果显示miR-455表达水平显著升高(P＜0.01).过表达miR-455后,SMMC-7721细胞上清VEGF表达水平呈时间依赖性升高(24 h P＜0.05,48 h和72 h P＜0.01).人脐静脉内皮细胞分别用转染pcDNA3和pcDNA3-pre-455的肝癌细胞培养液上清(72 h)重悬,接种于基质胶Matrigel上,转染pcDNA3-pre-455组形成典型的微管,管样结构明显完整.结论:过表达miR-455可促进肝癌细胞诱导的微管形成.
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miR-455在原因不明复发性流产病人绒毛组织中表达及意义
目的 探讨miR-455在原因不明复发性流产(URSA)病人绒毛组织中表达及意义.方法 72例URSA病人根据自然流产次数分为2~3次者(n=45)和≥4次者(n=27),同期,选取要求终止妊娠的正常早孕者40例作为对照组,留取绒毛组织,利用实时荧光定量PCR技术检测绒毛组织中miR-455、血管内皮生长因子(VEGF)和可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)基因表达,免疫组化SP法检测绒毛组织中微血管密度(MVD).结果 URSA病人绒毛组织中miR-455和sFlt-1 mRNA表达量均高于对照组,而VEGF mRNA表达量低于对照组,URSA中2~3次者miR-455和sFlt-1 mRNA表达量均低于≥4次者,而VEGF mRNA表达量高于≥4次者,均差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示,URSA病人绒毛组织中MVD为(9.9±3.2)条,低于对照组的(21.5±3.8)条,URSA中2~3次者绒毛组织中MVD为(13.4±3.1)条,高于≥4次者的(7.2±2.4)条,均差异有统计学意义(P<0.05);Pearson相关分析显示,URSA病人绒毛组织中miR-455表达量与VEGF mRNA表达量和MVD均呈负相关(r=-0.452、-0.433,P<0.05),而与sFlt-1 mRNA表达量呈正相关(r=0.539,P<0.05).结论 miR-455在URSA病人绒毛组织中呈高表达,且与sFlt-1表达呈正相关,与VEGF表达和MVD均呈负相关,提示可能通过促进sFlt-1表达而抑制VEGF信号通路活性,从而抑制绒毛组织中血管新生.
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mi RN A-455在小鼠心室重构中的作用及机制探讨
目的：探讨 microRNAs-455（miR-455）在心室重构中的作用及其机制。方法选择小鼠18只，分为miR-455组、GFP组及假手术组各6只。miR-455组、GFP组均行升主动脉缩窄术，术后4周即进展为心室重构模型。假手术组术中仅游离主动脉弓但不结扎。miR-455组于术后第1、8、15、22天尾静脉注射包被miR-455的腺病毒0．1 mL，GFP组及假手术组于同时点尾静脉注射包被GFP的腺病毒0．1 mL。术后4周造模成功，应用心脏超声检查测量各组左心室舒张期内径（LVIDd）、左心室舒张末容积（LVEDV）、左心室舒张期前壁厚度（LVAWd）、左心室射血分数（EF）。处死各组大鼠取心室肌行HE及Masson染色，观察心肌病理改变。采用qRT-PCR法检测各组心肌组织心肌肥厚基因[包括心房钠尿因子（ANF）、骨骼肌肌动蛋白1（ACTA1）、β肌球蛋白重链]及心肌纤维化基因[包括转化生长因子β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）]表达。采用Western blot法检测各组心肌细胞中凋亡蛋白Bax及抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达。采用TUNEL染色法检测各组心肌细胞凋亡情况，计算凋亡指数。结果与假手术组相比，GFP组LVIDd增加、LVEDV增加、LVAWd增厚、EF降低（P＜0．01或0．05）；与GFP组相比，miR-455组LVIDd降低、LVEDV降低、LVAWd增厚、EF增加（P＜0．01或0．05）。GFP组心肌组织呈心肌肥厚、心肌纤维化病理改变，miR-455组较GFP组心肌肥厚、心肌纤维化病理改变明显减轻。GFP组各心肌肥厚基因及心肌纤维化基因mRNA表达均高于假手术组，miR-455组各心肌肥厚基因及心肌纤维化基因mRNA表达均低于GFP组（P＜0．01或0．05）。与假手术组相比，GFP组Bax表达增加、Bcl-2表达降低、心肌细胞凋亡指数增高（P＜0．01或0．05）；与GFP组相比，miR-455组Bax表达降低、Bcl-2表达增加、心肌细胞凋亡指数降低（P＜0．01或0．05）。结论 miR-455具有抑制心室重构、改善心功能的作用，可能与其抑制心肌肥厚、心肌纤维化、心肌细胞凋亡有关。
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三维能量多普勒超声检测宫颈癌的血流与miR-455表达的相关性研究
目的:探讨经阴道三维能量成像(3D-CPA)检测宫颈癌的血流与miR-455相对表达量的关系.方法:采用实时荧光定量PCR技术检测68例宫颈癌和49例慢性宫颈炎组织中miR-455的表达.用3D-CPA成像对宫颈血流进行检测并计算血管指数(VI),后进行比较分析.结果:慢性宫颈炎组宫颈血流不丰富,VI为(0.439±0.181)条/cm3;宫颈癌组宫颈血流丰富、杂乱,VI为(0.940±0.447)条/cm3.宫颈癌组VI高于慢性宫颈炎组,P＜0.01.宫颈癌组织内miR-455的表达量低于慢性宫颈炎组(1.17±0.59 vs 2.58±0.83,P＜0.01).宫颈癌组织内miR-455的表达水平与VI呈负相关(r=-0.295,P=0.014).结论:miR-455低表达可能促进宫颈癌的血管生成,是一个潜在的抑癌基因.
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miR-455在宫颈癌中的表达及其与MVD、VEGF表达的相关性研究
目的:探讨miR-455在宫颈癌中的表达及其与微血管密度(MVD)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的关系.方法:采用实时荧光定量PCR技术检测68例宫颈癌患者和49例慢性宫颈炎(对照组)组织中miR-455的表达.免疫组化方法检测组织内MVD及VEGF蛋白表达水平.结果:宫颈癌组织内miR-455的相对表达量显著低于慢性宫颈炎(1.17 ±0.59 vs 2.58±0.83,P＜0.01).68例宫颈癌标本MVD表达的计数结果为30.45 ±7.9.Pearson相关分析结果显示,宫颈癌组织内miR-455表达水平与MVD呈负相关(r=-0.835,P＜0.01.宫颈癌VEGF表达为阴性、弱阳性、中度阳性和强阳性组中,miR-455相对表达定量(RQ)分别为1.77 ±0.58、1.59±0.50、1.34 ±0.35和0.68 ±0.26,Spearman等级相关分析结果显示,miR-455表达水平与VEGF的表达呈负等级相关(rs=-0.857,P＜0.01).结论:miR-455低表达可能通过VEGF信号通路促进宫颈癌内微血管形成,是一个潜在的抑癌miRNA.
