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微管形成文献资料
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过表达miR-455促进肝癌细胞诱导的管型形成
目的:构建miR-455前体的真核表达载体,探讨其对肝癌细胞诱导管型形成的影响.方法:采用PCR扩增miR-455前体序列,通过双酶切将其连接到真核表达载体pcDNA3中.连接产物转化入大肠杆菌内进行扩增,采用菌落PCR、双酶切和测序鉴定重组子.将构建的质粒转染SMMC-7721细胞,通过real-time PCR检测成熟miR-455的表达,采用ELISA方法检测培养液上清中VEGF的表达.用该上清处理人脐静脉内皮细胞HUVEC后,检测管型形成的情况.结果:本实验成功构建了miR-455前体的真核表达载体,将其瞬时转染SMMC-7721细胞后,real-time PCR检测结果显示miR-455表达水平显著升高(P＜0.01).过表达miR-455后,SMMC-7721细胞上清VEGF表达水平呈时间依赖性升高(24 h P＜0.05,48 h和72 h P＜0.01).人脐静脉内皮细胞分别用转染pcDNA3和pcDNA3-pre-455的肝癌细胞培养液上清(72 h)重悬,接种于基质胶Matrigel上,转染pcDNA3-pre-455组形成典型的微管,管样结构明显完整.结论:过表达miR-455可促进肝癌细胞诱导的微管形成.
