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中国胆固醇教育计划(CCEP)系列讲座(八)临床血脂测定与应用(下)
4血脂测定方法与临床意义4.1TC测定:一般用酶法如胆固醇氧化酶-过氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法(CHOD-PAP法)作为临床实验室测定血清TC的常规方法.
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谈维生素C对甘油三酯(TG)测定结果的干扰
近年来,在临床生物化学检验中,酶比色测定法的应用越来越广泛.许多项目的测定都使用工具酶参与的反应,常用的是利用葡萄糖氧化酶、胆固醇氧化酶、甘油氧化酶等测定葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯等的酶法Trinder反应,即H2O2偶联过氧化物酶反应.是利用较高特异性的氧化酶产生过氧化氢(H2O2),再加氧化发色剂比色.该酶法的单试剂一步终点法,操作简便、快速准确、微量、试剂稳定,在半自动生化分析仪上的使用更是普及.但在实际工作中,却存在一些物质对该反应的干扰,给测定结果带来一定的分析误差.本文作者对一定浓度的维生素C对氧化酶(GPO)法测定甘油三酯(TG)做干扰试验,讨论维生素C对Trinder反应的干扰.
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荧光毛细分析法测定胆固醇
目的:建立采用荧光毛细分析法(FCA)测定液体中胆固醇含量的低成本方法.方法:样品溶液加入到含有一定量胆固醇氧化酶和过氧化物酶的对甲基酚溶液中反应一定时间,用毛细管吸取溶液放入毛细管固定座中,用荧光分光光度计测量荧光强度.结果:在优化的测试条件下,胆固醇浓度在1.0~10.0 μmol/L范围内与荧光强度成线性关系,线性回归方程为:F=280.4+72.3c(n=5,r=0.99),样品加标回收率为88.2%~111.0%.结论:荧光毛细分析法灵敏度高,试剂消耗量减少99%,检测成本低,是检测液态样品中胆固醇的有效定性、定量方法.
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马红球菌4-2胆固醇氧化酶的急性毒理学研究
马红球菌4-2产生的胆固醇氧化酶应用于降解食品原料中的胆固醇,效果明显,降解率大于40%.为了进一步研究其安全性.选用霍恩氏法测定半数致死量LD50.结果证明胞内酶提取液的经口LD50大于21500mg/kg,属于无毒级别,有必要进入后续阶段的毒理学试验;活菌制剂在1.72× 109个/ml剂量以下不会引起急性毒性反应.考虑到安全可靠性和简化操作,生产中应放弃使用活菌制剂,重点深入研究胞内酶的安全性.为生产实践提供参考.
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胆固醇氧化酶降解效果的研究
胆固醇氧化酶在食品加工、医疗检测、生物抗虫方面的作用日益受到人们的重视,并且显示出巨大的应用潜力.为了检验其对食品原料中胆固醇的降解效果,本实验选取液体鸡蛋黄为试验对象,采用直接添加法温育24小时后测定残余胆固醇含量,对比菌体、胞内酶提取液和发酵上清液对胆固醇的降解能力.结果显示,三者均有很好的降解效果,降解率分别为49.26%,40.92%和37.05%.经降解后的鸡蛋黄颜色气味正常,略有熟鸡蛋香味,无不良感官变化.本试验有力地证明了胆固醇氧化酶的实用性,预示着其在食品加工过程中蕴藏着巨大的应用潜力,有必要进一步研究开发.