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乳酸菌在酸奶生产中的应用研究进展
新鲜的牛奶或其他的鲜奶制品经过高温灭菌处理后再接入乳酸菌等有益菌经过发酵后即可制成酸奶.酸奶不但风味口感独特,而且具有极高的营养价值和保健作用,因而愈来愈受到人们的青睐.高品质的酸奶离不开优质的乳酸菌发酵剂,本文主要对乳酸菌发酵剂在酸奶生产中的应用、类型以及国内外的研究进展进行综合阐述,并针对乳酸菌在酸奶生产中存在的问题提出建议.
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发酵型复合果蔬乳饮料的制备工艺研究
发酵型复合果蔬乳饮料综合了果蔬汁和乳酸发酵的优点，使原料风味与发酵风味浑然一体。本实验选取乳酸菌中保加利亚乳酸菌和嗜热链球菌（1：1），复合果蔬汁添加量为55％（苹果汁和番茄汁配比为2：1）。结果表明：蔗糖添加量为7％，接种量为10％，40℃发酵6h，pH值达到4.0±0.2为宜。置于4℃的冰箱中冷藏后熟20h。所得益生菌果蔬汁发酵乳组织均匀，口感细腻，酸甜适中，具有果蔬特有的滋味和芳香。
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乳酸菌发酵条件下葛根抗氧化能力研究
本实验研究了嗜热链球菌与保加利亚乳杆菌混合发酵条件下葛根抗氧化能力的变化.一共考查了还原力、DPPH·清除率、·OH清除率、抗脂质过氧化能力、对亚油酸的抗氧化作用、对ABTS自由基的清除作用等6个抗氧化能力方面的指标.经紫外分析发现葛根发酵后总黄酮含量增高,但发酵后只有还原力一个指标显示葛根酸奶的抗氧化能力较普通酸奶有所增强.酸奶贮藏第5d时总黄酮含量高为4.6671 mg/g.
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两株保加利亚乳杆菌产β-半乳糖苷酶条件的优化及酶活力测定
目的优化2株保加利亚乳杆菌产β-半乳糖苷酶的培养条件,测定其在适于产酶条件下的酶活力,并初步观察酶活力稳定性.方法测定2株保加利亚乳杆菌--来源于酸奶的wch9901和标准菌株1.1480在不同培养时间、培养基碳源、摇床转速、气体环境下产生的β-半乳糖苷酶的活力,优化产酶条件.测定2株菌在其适产酶条件下的酶活力.将制得的1.1480粗酶液分别置冰浴和20℃水浴,每隔1 h测定一次粗酶液中β-半乳糖苷酶活力,观察酶活力稳定性.结果2株保加利亚乳杆菌的适产酶条件分别为:1.1480于30℃有氧静止培养36 h;wch9901于37 ℃厌氧静止培养18 h,培养基含乳糖.在适产酶条件下,1.1480的酶活力为0.321NLU/ml粗酶液,比酶活为2.469 NLU/mg蛋白;wch9901的酶活力为0.401 NLU/ml粗酶液,比酶活为6.1 69NLU/mg蛋白.1.1480粗酶液于冰浴可稳定保存6 h,于20 ℃水浴可稳定保存5 h.结论wch9901与1.1480的适产酶条件有所差异,前者产酶迅速,产酶量多.
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H.pylori尿素酶B亚单位在保加利亚乳杆菌的表达与鉴定
目的 构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H pylori)尿素酶B亚单位(UreB)的基因工程乳杆菌,并对其进行初步的安全性评估.方法 采用高保真PCR从H.pylori标准菌株NCTC 11637中扩增ureB基因,插入乳酸菌表达质粒pMG36e,将重组质粒电转入保加利亚乳杆菌L6032中,获得表达ureB的基因工程乳杆菌.在含乳糖的MRS培养基诱导目的 蛋白表达,Western blot鉴定其免疫原性.连续传代培养60代,检测基因工程乳杆菌的稳定性、形态学与生理生化特性以进行初步的安全性评估.结果 特异PCR、酶切和测序鉴定均证实ureB基因克隆入表达载体pMG36e,SDS-PAGE结果显示,重组质粒pMG36e-ureB电转入保加利亚乳杆菌所构建的基因工程乳杆菌能表达约64KD的蛋白,Western blot证明该蛋白能与抗H.pylori ureB的兔血清反应.稳定性、形态学与生理生化特性检测结果表明,基因工程乳杆菌与原始菌株保加利亚乳杆菌完全一致.结论 成功构建能表达H.pylo-ri UreB的保加利亚乳杆菌L6032-UreB,该基因工程菌在形态与生理生化特性上未发生任何变异,从而为探索幽门螺杆菌感染的益生菌制剂调理疗法奠定了坚实的基础.
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保加利亚乳杆菌原生质体的制备与回复研究
目的:通过对保加利亚乳杆菌的原生质体的制备和回复的方法学探讨,为乳杆菌的基因操作和其相关研究提供技术思路和实验条件.方法:用酶浓度分别为1 μg/ml、4 μg/ml、10μg/ml Mutanolysin(变溶菌素)对保加利亚乳杆菌进行处理,脱去细胞壁以探讨其原生质体形成与时间和酶浓度的关系;并选用较为适宜的酶浓度制备其原生质体,在自制的双层再生培养基上观察其原生质体在普通培养、CO2培养、厌氧培养时的回复生长情况.结果:保加利亚乳杆菌对Mutanolysin较敏感,酶浓度为1 μg/ml时只需40min大部分菌体形成原生质体.经1μg/ml Mutanolysin处理后制得的保加利亚乳杆菌原生质体倾入自制的双层再生培养基中,置于CO2和厌氧环境条件下培养能很好的回复生长.结论:本文的研究为乳杆菌的基因工程方面的研究提供了相关的技术条件和实验基础.
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保加利亚乳杆菌微胶囊化工艺研究
目的 制备保加利亚乳杆菌微胶囊,提高菌株的酸、热耐受性及降低菌体的分离成本.方法 以保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)为研究对象,海藻酸钠(SA)为壳材、CaCl2为固化剂,制备保加利亚乳杆菌微胶囊;包埋率、颗粒平均化程度、机械强度等为考核指标,研究保加利亚乳杆菌微胶囊化的工艺.结果 当海藻酸钠浓度为0.75％、CaCl2浓度为3％、电压为600 V、泵速为1.96 mL/min、震动频率为80 Hz时,微胶囊化包埋效果佳,经固定化后的菌微胶囊保持了良好的保加利亚乳杆菌的活性,微囊化保加利亚乳杆菌经过2次连续发酵后的产酸量分别达到59.4 g/L和55.8 g/L.结论 本研究为工业化生产乳酸提供了一条具有经济价值的途径.
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酸奶中保加利亚乳杆菌分离条件的优化
为优化从酸奶中分离保加利亚乳杆菌的培养条件，初步建立一种较简单有效的分离方法。以成都市市售的主要酸奶——华西牌瓶装酸牛奶为来源，采用MRS、SL、LS、番茄酵母4种经典的乳酸菌选择性培养基，并分别进行有氧及烛缸厌氧分离培养测定其得率。采用X2检验对不同组的分离得率进行统计学分析。结果表明MRS培养基为酸奶中保加利亚乳杆菌分离首选培养基，分离得率达66.67%；微氧环境优于有氧环境(P<0.05)。
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保加利亚乳杆菌冻干保护剂的优化
目的 研究4种常用冻干保护剂的添加量.方法 以保加利亚乳杆菌为出发菌株,以其冻干菌粉活菌数为指标,通过正交试验优化4种常用冻干保护剂的添加量.结果 保加利亚乳杆菌的佳冻干保护剂配比为乳糖∶谷氨酸钠∶抗坏血酸∶脱脂奶粉=3∶1∶2∶7,其中脱脂奶粉对菌体保护效果极显著(P＜0.01),乳糖对菌体保护效果显著(P＜0.05).结论 通过对保加利亚乳杆菌的4种常用冻干保护剂的添加量进行优化,为保加利亚乳杆菌的冻干工艺提供基础.
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不同细菌及酵母菌对阴道毛滴虫体外生长的影响
目的 研究大肠埃希菌J20、保加利亚乳杆菌、金黄葡萄球菌及AH109酵母菌体外对阴道毛滴虫生长的影响.方法 分别将不同浓度(104、105、106和107个/ml)的大肠埃希菌J20、保加利亚乳杆菌、金黄葡萄球菌及AH109酵母菌与阴道毛滴虫进行体外共培养,并对不同培养时间(2、4、6和8h)的虫体进行计数.结果 与空白对照组相比,大肠埃希菌J20及金黄葡萄球菌在低浓度(1 04个/ml)时即明显影响阴道毛滴虫体外生长(P均＜0.01),在6h时即可见白色死亡虫体沉淀:保加利亚乳杆菌仅在高浓度(106和107个/ml)时对阴道毛滴虫的生长有明显影响(P均＜0.01)∶AH109酵母菌在不同浓度及不同培养时间对阴道毛滴虫的生长均无明显影响(P＞0.05).结论 大肠埃希菌J20、金黄葡萄球菌及高浓度(106和107个/ml)保加利亚乳杆菌对阴道毛滴虫生长影响显著,而AH109酵母菌无明显影响,为进一步研究阴道毛滴虫感染后,在体内与阴道菌群的相互作用关系奠定了理论基础.
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适于德氏乳杆菌保加利亚亚种质粒抽提的混合培养基
目的 探讨适合提取德氏乳杆菌保加利亚亚种质粒的细菌培养基. 方法 配制含不同比例MRS的营养肉汤混合培养基,进行德氏乳杆菌保加利亚亚种的培养,通过生长曲线测定、细菌形态观察,菌体内天然质粒抽提质量等来确定适于该菌质粒抽提的佳混合培养基. 结果 单纯营养肉汤培养基不适合德氏乳杆菌保加利亚亚种的增殖,在含20％、40％、60％及80％ MRS的营养肉汤混合培养基中该菌的生长曲线与在MRS中的基本一致,但细菌数略低;形态学检测表明含MRS的营养肉汤培养基培养对德氏乳杆菌保加利亚亚种的形态无影响,质粒抽提结果表明,本研究所配制的几种含不同比例MRS的营养肉汤混合培养基中,含20％ MRS的营养肉汤混合培养基适合该菌质粒的抽提,提取的质粒浓度高,质量好. 结论 本实验制备的混合培养基中,含20％ MRS的营养肉汤混合培养基能保证德氏乳杆菌保加利亚亚种的正常增殖,而且可能由于产生较少的胞外多糖,使溶菌酶更易水解该菌细胞壁肽聚糖,适于该菌质粒的抽提.
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保加利亚乳杆菌β-半乳糖苷酶高产株的筛选
目的:鉴定和筛选β-半乳糖苷酶高产酶保加利亚乳杆菌.方法:采用涂片染色和形态特征观察,鉴别生化试验,(如过氧化氢酶试验、碳水化合物发酵产酸试验及牛奶石蕊试验)对购买的保加利亚乳杆菌1.1480,保加利亚乳杆菌6032和从酸奶中分离的保加利亚乳杆菌进行鉴定;采用X-gal定性试验和ONPG定量试验对酶活性进行测定以筛选高产酶菌株.结果:①保加利亚乳杆菌1.1480和从酸奶中分离的保加利亚乳杆菌均为保加利亚乳杆菌,保加利亚乳杆菌6032已发生变种.②保加利亚乳杆菌1.1480和从酸奶中分离的保加利亚乳杆菌均可在含有X-gal和IPTG琼脂培养基上产生蓝色菌落.进一步的定量试验表明保加利亚乳杆菌1.1480比从酸奶中分离的保加利亚乳杆菌酶活性高.结论:从酸奶中分离的保加利亚乳杆菌在作为酸奶菌种的过程中可能被人工训化;保加利亚乳杆菌1.1480的特性与伯杰手册第八版中描述的完全一致,且产酶量高.
