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PMSG 和 hCG 诱导长爪沙鼠超数排卵方案的优化
目的：优化PMSG和hCG诱导长爪沙鼠超数排卵方案。方法通过对动物周龄、激素剂量和间隔时间等系统研究，优化出用于长爪沙鼠超数排卵的佳动物周龄、激素组合剂量和间隔时间。结果对6周龄长爪沙鼠使用10单位激素计量及间隔70 h可以获得佳超数排卵效果。在合笼16 h后80％的动物得以排卵，获卵数为32.6±3.0枚／只，其中24.8±5.4枚／只可以发育至二细胞胚胎。结论本研究获得了利用PMSG和hCG诱导长爪沙鼠超数排卵的优化方案，为长爪沙鼠胚胎生物技术研究奠定了基础。
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育阴灵活疗排卵障碍机理的实验研究
1实验材料与方法选用未成年雌性小白鼠(16～18g)65只,随机分为3组,第1组22只为育阴灵药组;第2组23只为HCG组;第3组20只为生理盐水组.用药前作阴道脱落细胞检查,均显示无激素作用的底层细胞.第1d8AM,65只小白鼠腹腔注射小剂量孕马血清促性腺激素(PMSG)2U/只,仅用1次,注射完毕后随机分成3组.第1组取小鼠22只,用PMSG后30min,育阴灵药液0.8ml(临床成人量25倍),按公斤体重计算灌胃,每天1次,连续3d.第2组取小鼠23只,于用PMSG后第3d8AM腹腔注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)5iu/只,仅用1次.第3组取小鼠20只,于腹腔注PMSG 30min后,用生理盐水0.8ml灌胃,每天1次,连续3d.第4d8AM各组动物均用切断颈动脉法取血,经离心后取血清,用放射免疫法测定Progestrone含量,取出卵巢,剥离周围脂肪组织,用分析天平称其重量;并分组取卵巢标本,用10%福尔马林溶液处理作组织切片.
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小鼠超数排卵的比较试验
为了确定适于超排的小鼠品系,对KM、NIH和C57BL/6J小鼠超排的激素剂量和注射间隔时间进行比较.KM、NIH和C57BL/6J雌鼠各40只,分别随机分为4组,用5IU或10IU的PMSG和HCG,间隔48h或72h注射,比较排出卵母细胞的数量.各品系5IUPMSG十5IUHCG剂量、间隔48h注射组超排效果好,与间隔72h注射组比较有显著差异;封闭群NIH和KM超排效果较近交系C57BL/6J好,有显著差异.结果提示:各品系小鼠超排的佳激素剂量为5IUPMSG+5IUHCG,合适的注射间隔时间为48h,封闭群小鼠较近交系小鼠超排效果好.
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Prdx2在促性腺激素预处理的小鼠卵巢中的表达
目的:探讨促性腺激素预处理的小鼠在卵泡发育及排卵过程中Prdx2 在卵巢中的表达,为进一步研究Prdx2 在调控卵泡生长、发育及成熟中的作用奠定基础.方法:将22 ～ 24 d 大小的75 只C57/BL6 雌性小鼠随机分成14 组(生理盐水组10 只,其余各组5 只),分别为注射孕马血清促性腺激素(PMSG)后2、4、6、8、10、12、24、48 h 组和注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)后5、8、10、12、24 h 组以及生理盐水组,其中生理盐水组分别于注射生理盐水后2 h(C0,5 只)及48 h(C1,5 只)取出卵巢.采用实时定量PCR 及免疫印迹法检测Prdx2 mRNA 及蛋白在促性腺激素处理后不同时间点的动态表达.结果:小鼠腹腔注射PMSG 后Prdx2 表达均低于生理盐水组,于注射后2 h 表达量低,随后表达逐渐增高,24 h 到达高点,但表达仍低于生理盐水组.生理盐水组注射生理盐水后2 h(C0)与注射PMSG 后2、4、6、8、10、12、48 h 相比差异均具有统计学意义(P<0.05),而与注射PMSG 后24 h 相比则差异无统计学意义(P = 0.238).注射PMSG 后不同时间点两两比较结果表明2 h Prdx2 的表达同6 h 相比差异有统计学意义(P = 0.00),其他时间点两两比较差异无统计学意义(P>0.05).小鼠腹腔注射PMSG 后48 h(P48)注射hCG 促排卵,促排卵后不同时间点卵巢标本mRNA 表达量同P48 相比差异均无统计学意义(P>0.05).同生理盐水组注射生理盐水后48 h(C1)相比差异均有统计学意义(P<0.05).Prdx2 蛋白在小鼠腹腔注射PMSG 后10 h 表达水平低,其他各组间差异无统计学意义.注射hCG 后各时间点同生理盐水组相比,表达差异均无统计学意义.结论:Prdx2 可能在小鼠卵泡发育及排卵过程中发挥重要作用.
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抑制素A及促性腺激素对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟的影响
目的:探讨抑制素A(Inhibin A,INH A)对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟(In vitro maturation,IVM)的影响.方法:从孕马血清促性腺激素(Pregnant mare serum gonadotrophin,PMSG)组(使用PMSG组,16例)及无PMSG组(未使用PMSG组,20例)获得的生殖泡期(Germinal vesele,Gv)卵母细胞在不同浓度INH A的培养液中进行体外培养,观察第一极体(The first polar body,PBI)排出和皮质颗粒(Cortical granules,CG)染色情况.结果:PMSG组获卵数为(17.2±2.6)个/只,无PMSG组获卵数为(15.9±1.8)个/只(P>0.05);PMSG组与无PMSG组的PBI率分别为57.7%、50.7%(P＞0.05).PMSG组中INH A 200、350 ng/ml组的PBI率较对照组高(P<0.05);无PMSG组中各INHA组PB1率与对照组比较无显著差异(P＞0.05);结论:INHA和PMSG对体外培养GV期卵母细胞核成熟有促进作用.
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孕马血清促性腺激素对小鼠受孕的影响
目的 观察孕马血清促性腺激素(PMSG)对于小鼠受孕率的影响.方法 通过注射PMSG进行超数排卵处理,建立实验组和自然周期组昆明小鼠妊娠模型,比较两组小鼠的受孕率和获得的平均胚胎数.结果 在PMSG妊娠小鼠模型中,小鼠妊娠率为75%,平均受孕17个胚胎;自然周期小鼠妊娠率为40%,平均受孕10个胚胎.结论 PMSG能促进小鼠排卵,增强小鼠受孕率.
