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淫羊藿素体外抗淋巴瘤细胞增殖效应
目的 本实验以小鼠T细胞淋巴瘤细胞株EL-4细胞株为模型,研究淫羊藿素(icaritin,ICT)是否抑制瘤细胞增殖,并初步探讨其作用机制.方法 应用MTT比色法、透射电镜技术及流式细胞术检测ICT对EL-4细胞增殖能力的影响;用RT-PCR技术、比色法分析ICT的作用机制.结果 ICT对EL-4细胞增殖具有明显抑制作用,并呈量效及时效关系.透射电镜及流式细胞术结果显示,ICT可诱导EL-4细胞凋亡.RT-PCR显示,ICT作用于EL-4细胞后,bcl-2、P21基因的mRNA表达下调,Caspase-3、Caspase-9酶活性显著增强.结论 ICT可抑制体外培养的小鼠T淋巴瘤EL-4细胞的增殖并诱导其凋亡,可能系通过下调bcl-2、P21 mRNA表达,激活Caspase-3、Caspase-9蛋白等途径实现的.
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转染MIP-1α和B7-1基因增强小鼠的抗淋巴瘤效应
目的 观察转染趋化因子MIP-1α和共刺激分子B7-1基因增强小鼠抗淋巴瘤的效应.方法 将MIP-1α和B7-1基因慢病毒重组载体转染小鼠EL-4淋巴瘤细胞,应用RT-PCR检测MIP-1α和B7-1基因mRNA表达,Western blot法检测MIP-1α和B7-1蛋白表达；转基因EL-4细胞注入小鼠右腋皮下,观察成瘤情况；灭活的转基因EL-4细胞注入成瘤小鼠体内,观察其增强小鼠抗淋巴瘤效应.结果 RT-PCR检测发现EL-4/MIP-1α+ B7-1细胞内有MIP-1α及B7-1 mRNA表达,Western blot显示MIP-1 α及B7-1蛋白表达；MIP-1α组、B7-1组较对照组成瘤时间延长,成瘤率降低,肿瘤平均体积较小,而联合组成瘤性消失；MIP-1α和B7-1治疗组的肿瘤平均体积、重量及肿瘤器官转移率明显小于对照组(P＜0.05),而联合组的肿瘤平均体积及重量明显小于MIP-1α和B7-1组(P＜0.05),而且联合组小鼠平均生存期,均较单基因组、对照组明显延长(P＜0.05).结论 转染MIP-1α和B7-1基因能够明显增强小鼠机体抗淋巴瘤效应,明显延长荷瘤小鼠的平均生存期,为淋巴瘤的基因治疗提供了新的思路.
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基于Luminex液相芯片技术的NNK和AαC体外免疫毒性研究
目的 了解4-(甲基亚硝胺基)-1-(3-吡啶)-1-丁酮(NNK)和2-氨基-9H-吡啶并[2,3-b]吲哚(AαC)的体外免疫毒性特征.方法 分别以0、12.5、25、50、100、150和200 μg/ml NNK染毒小鼠淋巴瘤细胞(EL-4细胞)24 h,以0、2.5、5、7.5、10、12.5和15 μg/ml AαC染毒小鼠巨噬细胞(Ana-1细胞)24 h.采用CCK-8法检测细胞存活率,以Luminex液相芯片技术检测细胞上清液中与免疫相关的20种细胞因子分泌量,以BCA蛋白检测方法校正细胞因子的结果.结果 NNK染毒EL-4细胞后,白介素(IL)-10、IL-17 、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量随染毒剂量的增加而升高,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)含量随染毒剂量的增加而降低,且均存在剂量-效应关系;碱性成纤维细胞生长因子(FGF-basic)、γ-干扰素(IFN-γ)、IL-1α、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-12、IL-13、干扰素诱导蛋白-10(IP-10)、角质细胞诱导因子(KC)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、γ-干扰素诱导性单核因子趋化因子(MIG)、巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)含量无明显变化.AαC染毒Ana-1细胞后,IL-5、MCP-1、MIP-1α、TNF-α和VEGF含量随染毒剂量的增加而降低,其余15种细胞因子无明显变化.结论 NNK和AαC可以产生体外免疫毒性.
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三羟基苯甲酸对淋巴瘤细胞凋亡及周期影响
目的 观察不同剂量3,4,5三羟基苯甲酸化合物(TAD)对小鼠淋巴瘤细胞株EL-4细胞的存活率、细胞凋亡及细胞周期进程的影响,探讨其对肿瘤生长抑制的机制.方法 应用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪检测经不同浓度(3.125～25 μg/ml)TAD处理的EL-4细胞存活率、细胞凋亡率及细胞周期的变化.结果 EL-4细胞经过3.125,6.25,12.5和25 μg/ml TAD处理后,各观察组细胞存活率依次为(80.60±6.01)%.(75.39±4.97)%,(71.42±3.73)%和(54.96±4.57)%;与对照组100%存活率相比明显降低(P<0.01,P<0.001).细胞凋亡率依次为(4.95±1.76)%,(19.58±7.91)%,(35.85±7.01)%.(11.67±2.96)%;明显高于对照组的(0.36±0.33)%(P<0.01,P<0.001).TAD引起细胞周期进程的改变,G1期细胞百分数明显高于对照组(P<0.05,P<0.01,P<0.001),S期细胞百分数明显低于对照组(P<0.05,P<0.01,P<0.001);G2期细胞无明显变化.结论 TAD能够降低EL-4细胞存活率,诱导EL-4细胞凋亡,阻止G1期细胞向S期进程,其抑制作用可能通过G0/G1期阻滞引起.
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5-氟尿嘧啶对Jurkat和EL-4细胞周期解偶联的影响
目的:研究5-氟尿嘧啶(5-FU)不同剂量和给药后不同时间Jurkat和EL-4细胞周期解偶联的变化规律.方法:采用不同剂量(0、0.001、0.010、0.100和1.000 mg·L-1)5-FU处理Jurkat和EL-4细胞,给药0、4、8、16、24和48 h后分别收集细胞,应用碘化丙啶(PI)荧光标记及流式细胞术(FCM)检测分析细胞倍体变化的剂量-效应和时间-效应规律.结果:不同剂量5-FU给药后16 h,Jurkat细胞八倍体细胞百分率在0.001、0.010、0.100和1.000 mg·L-1各个剂量组均显著低于0 mg·L-1组(P＜0.01),无剂量依赖性;EL-4细胞八倍体细胞百分率在0.010和0.100 mg·L-1组显著高于0 mg·L-1组(P＜0.05).0.100 mg·L-15-FU给药后,Jurkat细胞八倍体细胞百分率在8、16和24 h显著低于相应对照组(P＜0.01),48 h显著高于相应对照组(P＜0.01);EL-4细胞八倍体细胞百分率在4、8和16 h显著高于相应对照组(P＜0.05),48 h显著低于相应对照组(P＜0.01).结论:5-FU可以诱导EL-4细胞发生细胞周期解偶联,而不能诱导Jurkat细胞发生细胞周期解偶联.
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电离辐射和5-氟尿嘧啶对EL-4细胞周期的解偶联作用
目的:研究电离辐射和5-氟尿嘧啶(5-FU)对EL-4细胞周期解偶联的时间-效应关系和剂量-效应关系.方法:取指数生长期EL-4细胞,采用不同照射剂量(0、1.0、2.0和4.0 Gy)电离辐射和不同浓度5-FU(0、0.001、0.010、0.100和1.000 mg·L-1)处理EL-4细胞,于0、4、8、16、24和48 h后分别收集细胞,碘化丙啶(PI)荧光标记及流式细胞术(FCM)检测细胞倍体变化.结果:与假照组比较,2.0 Gy X射线照射后,EL-4细胞二倍体细胞百分率在照射后8～24 h显著增加(P＜0.05或P＜0.01),48 h恢复至正常水平;四倍体细胞百分率在照射后8～48 h显著降低(P＜0.05或P＜0.01);八倍体细胞百分率在照射后16～24 h显著降低(P＜0.05).1.0～4.0 Gy X射线照射后16 h,与假照组比较,二倍体细胞百分率剂量依赖性增加(P＜0.05或P＜0.01),四倍体细胞百分率呈剂量依赖性下降(P＜0.01),八倍体细胞百分率变化不显著.0.100 mg·L-1 5-FU给药后,与0 mg·L-1组比较,EL-4细胞二倍体细胞百分率在给药后16～48 h显著降低(P＜0.01);四倍体细胞百分率在给药后8～24 h显著增加(P＜0.05或P＜0.01),48 h回降;八倍体细胞百分率在给药后4～16 h显著增加(P＜0.05).不同剂量5-FU给药后16 h,与0 mg·L-1组比较,EL-4细胞二倍体细胞百分率显著降低(P＜0.05或P＜0.01),四倍体细胞百分率显著增加(P＜0.05或P＜0.01),二者变化在0.001～1.000 mg·L-1剂量范围内呈剂量依赖性;八倍体细胞百分率仅在0.010和0.100 mg·L-1组显著增加(P＜0.05或P＜0.01).结论:1.0～4.0 Gy电离辐射无诱导EL-4细胞发生细胞周期解偶联作用,0.010～0.100 mg·L-1 5-FU可以诱导EL-4细胞发生细胞周期解偶联.
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p53蛋白在低剂量电离辐射诱导EL-4细胞适应性反应中的变化
目的:研究低剂量电离辐射诱导EL-4细胞适应性反应中p53 mRNA及蛋白的表达,为探讨低剂量电离辐射诱导细胞适应性反应的DNA损伤修复机制提供实验依据.方法:将EL-4细胞分为空白对照组,单纯照射组(其照射剂量分别为1 Gy、2 Gy和3 Gy),以及诱导适应性反应照射组(其照射剂量分别为75 mGy+1 Gy、75 mGy+2 Gy、75 mGy+3 Gy).应用流式细胞仪和RT-PCR方法分别检测p53蛋白及mRNA水平表达.结果:单纯照射组p53蛋白水平较对照组显著升高(P＜0.01),预先给予75 mGy照射诱导的适应性反应组其p53蛋白水平较单纯照射组则显著降低(P＜0.01).p53 mRNA水平表现出与p53蛋白表达相同的变化.结论:p53蛋白在诱导适应性反应照射组中低表达,说明其在低剂量电离辐射诱导适应性反应中可能起重要作用.
关键词： 淋巴瘤 辐射 电离 肿瘤抑制蛋白质p53 EL-4细胞 -
破壁灵芝孢子粉对小鼠T细胞淋巴瘤细胞抑制作用
目的 研究灵芝孢子粉在体内、外对小鼠T细胞淋巴瘤细胞生长的抑制作用.方法 运用噻唑蓝(MTT)法研究灵芝孢子粉在体外对EL-4细胞的抑制作用;建立MNU诱导小鼠胸腺T细胞淋巴瘤的裸鼠移植瘤模型,利用裸鼠移植瘤研究灵芝孢子粉对胸腺T细胞淋巴瘤细胞的抑制作用,HE染色观察淋巴瘤组织结构的改变.结果 灵芝孢子粉对EL-4细胞的IC50值随作用时间增加而减小,72 h达到低,为4.76 g/L.体内抑瘤试验显示,灵芝孢子粉剂量为4 g/kg时,抑制率为45.8％,镜下观察,灵芝孢子粉高剂量治疗组肿瘤坏死区域较大,核碎屑、细胞固缩较多.结论 高浓度及高剂量的灵芝孢子粉具有抑制肿瘤细胞生长的作用.
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夏枯草提取物体外诱导EL-4细胞凋亡的实验研究
目的:检测夏枯草提取物对EL-4细胞(小鼠T细胞性淋巴瘤白血病细胞株)体外抗肿瘤活性并探讨其诱导EL-4细胞凋亡的特点.方法:应用MTT法检测夏枯草提取物对EL-4细胞的体外抗肿瘤活性,并绘出其生长曲线:倒置显微镜和HE染色观察细胞用药前后形态学变化;琼脂糖凝胶电泳法及TUNEL法检测夏枯草提取物对EL-4细胞的诱导凋亡作用.结果:夏枯草提取物对EL-4细胞有显著的增殖抑制作用,IC50值为23.67μg/mL;琼脂糖凝胶电泳结果显示实验组出现明显的DNA梯形凋亡带而空白对照组没有出现;TUNEL结果显示夏枯草组EL-4细胞经染色后胞核中出现棕黄色颗粒或核周出现棕黄色半月形深染区,而空白对照组则仅有个别细胞出现胞核棕黄色深染.结论:夏枯草提取物对EL-4细胞有显著的体外抗肿瘤活性,诱导凋亡可能是其抗肿瘤的主要机制之一.
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低剂量电离辐射诱导EL-4细胞适应性反应中DNA-PKcs基因的作用研究
[目的]探讨低剂量电离辐射诱导EL-4细胞适应性反应中DNA-PKcs基因的作用.[方法]EL-4细胞应用渥曼青霉素处理后接受低剂量0.075 Gv预先照射,再分别进行较高攻击剂量照射(1.0,1.5和2.0 Gy),RT-PCR和免疫荧光法检测DNA-PKcs mRNA及蛋白表达.同时应用流式细胞术检测细胞凋亡和周期进程变化.[结果]应用渥曼青霉素能够阻断DNA-PKcs基因在mRNA及蛋白水平的表达.应用渥曼青霉素后直接接受攻击剂量照射和应用渥曼青霉素后先接受低剂0.075 Gv预先照射后再接受攻击剂量照射,均能诱导EL-4细胞发生适应性反应.[结论] DNA-PKcs基因在低剂量电离辐射诱导EL-4细胞发生适应性反应中可能不起决定性作用.
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夏枯草提取物体内外对小鼠T淋巴瘤EL-4细胞生长的影响
目的:观察夏枯草提取物体内外对小鼠T淋巴瘤EL-4细胞生长的影响.探讨夏枯草提取物的抗肿瘤作用机制.方法:用MTT法、DNA琼脂糖凝胶电泳、TUNEL等方法检测夏枯草提取物体外对小鼠T淋巴瘤EL-4细胞生长的影响.建立C57BL/6小鼠EL-4细胞移植瘤模型,分别给予500、300、100 mg,/(kg·d)夏枯草提取物,10 d后.计算抑瘤率,对肿瘤组织进行形态学观察,并测定其中bcl-2和Bax蛋白的表达情况.结果:夏枯草提取物体外能抑制EL-4细胞生长,半数抑制浓度(IC50)为(23.67±3.05)mg/L;夏枯草提取物能诱导EL-4细胞凋亡.夏枯草提取物能抑制EL-4细胞在C57BL/6小鼠体内的生长,500、300、100 mg/(kg·d)剂量组的抑瘤率分别为(39.54±1.83)%、(65.26±1.31)%、(22.30±3.7)%,平均生存时间分别为(25.50±1.87)、(28.50±2.62)、(24.86±2.19)d,均大于空白对照组(P<0.05),移植瘤bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达增加.结论:夏枯草提取物在体内外均能抑制EL-4细胞的生长,诱导凋亡可能是其抗肿瘤的主要机制之一.
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ATM基因在低剂量电离辐射诱导EL-4细胞适应性反应中的作用
目的:探讨低剂量电离辐射诱导EL-4细胞适应性反应中ATM基因的作用.方法:EL-4细胞应用渥曼青霉素处理后接受低剂量0.075 Gy预先照射,再分别进行较高攻击剂量照射(1.0,1.5和2.0 Gy),RT-PCR和免疫荧光法检测ATM mRNA及蛋白表达.同时应用流式细胞术检测细胞凋亡和周期进程变化.结果:渥曼青霉素能够阻断ATM基因在mRNA及蛋白水平的表达.应用渥曼青霉素后直接接受攻击剂量照射和应用渥曼青霉素后先接受低剂量0.075Gy预先照射后再接受攻击剂量照射,均能诱导EL-4细胞发生适应性反应.结论:ATM基因可能不影响低剂量电离辐射诱导EL-4细胞发生适应性反应.
