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乌苏里蝮蛇血凝酶的分离纯化和质量研究
目的 建立一种分离纯化乌苏里蝮蛇血凝酶(WH)的方法并为其制定质量标准.方法 先后采用分子筛层析法、离子交换色谱法、亲和层析法从乌苏里蝮蛇毒中分离纯化得到一种具有凝血活性的酶成分,并采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法、RP-HPLC法测定其纯度,HPSEC法测定其分子量,IEF法测定其等电点,Lowry法测定其蛋白浓度,并用标准人血浆法测定该酶的比活力.结果 从乌苏里蝮蛇蛇毒中分离纯化了一种凝血酶成分,SDS-Page显示为一条带、测得分子量约为34 kD,RP-HPLC得到单一的色谱峰,HPSEC法测得该酶分子量为34.7 kD,等电点为5.25,此酶具有体外凝血活性,比活力为5.40 μg/U.结论 该方法可用于WH的分离纯化,制定的质量标准可用于控制该血凝酶的质量.
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长白山乌苏里蝮蛇降纤酶层析分离和特性研究
采用简洁、高效、高产、高速及制药企业容易实施的分步洗脱制备降纤酶工艺，生产的降纤酶符合部颁标准，并适合制药企业连续大规模生产。
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中国长白山乌苏里蝮蛇降纤酶基因克隆和结构分析
目的:克隆乌苏里蝮蛇(Gloydius ussuriensis)降纤酶(Difibrase)基因,为用基因工程方法生产降纤酶打下基础.方法:从乌苏里蝮蛇毒腺制备总RNA,经RT-PCR扩增、克隆和顺序测定. 结果:降纤酶cDNA开框读码序列全长702个核苷酸,编码234个氨基酸,推测其活性中心为His41、Asp86和Ser180,含有6对二硫键. 结论:确定乌苏里蝮蛇降纤酶cDNA顺序,推导出其氨基酸顺序和活性中心结构.
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乌苏里蝮蛇采毒周期对排毒量的影响
目的探讨乌苏里蝮蛇(Gloydius ussuriensis Emelianov)采毒周期与排毒量的关系.方法将实验的蛇分成6个组,全部采一次毒后分别测定采毒间隔周期为5、10、15、20、25、30天的排毒量;测定5～10月份,周期为30天的排毒量;并测定采毒频次的增加对排毒量、含水率和蝮蛇死亡率的影响及测定体重对排毒量的影响. 结果 5、6、9、10月份可20天为一个采毒周期,在月平均温度较高的7、8月份,15天为一个采毒周期,排毒量接近或超过该种的平均排毒量11.4mg.结论采毒频次增加其蛇毒的含水率和蛇的死亡率也有所增高.
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降纤酶的药理作用及其研究进展
蛇毒以多种方式影响血液凝集和血小板功能,如中国长白山乌苏里蝮蛇(Gloydius ussurisis)毒液,不仅含有血小板活化及抑制成分,而且还含有出血毒及参与止血的降纤酶.降纤酶(Difibrase, DF)是蛇毒中的一种丝氨酸蛋白酶,又称为类凝血酶,能分解纤维蛋白原,但它不激活凝血因子Ⅷ,因此不形成交联的血凝块,而形成头对头、肩并肩结构的纤维蛋白,并可立即被纤维蛋白溶解酶彻底降解,导致体内纤维蛋白原降低,呈抗血液栓塞效应.由长白山乌苏里蝮蛇毒制得的 DF,活性较本属其它蛇毒高 2倍～ 3倍 [1],大量的临床资料证实了其治疗血栓的高效性.在临床应用上,其对脑血栓、血栓性静脉炎、动脉硬化性闭塞症、肺栓塞、缺血性冠心病等的治疗均有显著疗效.近年来, DF在癌症领域的研究也取得了巨大进展,并通过对其进行基因克隆拓宽了研究空间.
