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荧光定量PCR技术及其应用
PCR技术是一种体外核酸扩增技术.1986年第1台PCR热循环仪的问世使PCR技术实现了操作自动化.通过PCR技术可对特定基因进行扩增,其主要应用领域是基因检测和临床基因诊断.但是,PCR技术应用于基因诊断还存在许多局限性,主要表现在不能准确定量和易产生假阳性和交叉污染等.
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临床诊断中的实时PCR技术(文献综述)
目前,DNA分析技术已被广泛应用于临床,包括分子遗传学、肿瘤学、微生物学、血液学及免疫学,其中许多技术依赖于靶分子的PCR扩增及扩增后分析,如限制性酶切与凝胶电泳以检测特异性扩增片段.这种定性检测重复性差,可靠性低,易给临床诊断带来混乱,而实时PCR的出现实现了DNA的定量分析,明显提高了诊断的特异性、灵敏度,快速、简单、自动、有效.有多种反应平台可以完成实时PCR分析,如Roche Light Cycler、ABI Prism7700、PE5700和超速热循环仪等.
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LAMP技术及其在人类传染病病原体检测的研究进展
自1985年PCR方法发明以来,在传染病检测领域得到了广泛应用,但是人们一直未间断探索更为特异、敏感、快速、简便的方法来发展常规的PCR方法.日本学者Notomi等[1]于2000年发明了一种全新的核酸扩增方法--环介导等温扩增技术(LAMP,loop-mediated isothermal amplification),该法在保持PCR技术优点的基础上,进一步增强了反应的特异性和缩短了检测时间;特别是它不需使用昂贵的热循环仪,在等温条件下就能完成反应,且扩增产物用肉眼能观察,更便于推广应用,现就该法的进展综述如下.