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化合物1487B抑制肿瘤坏死因子-α生成机制研究
目的 研究化合物1487B对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的作用,探讨其抗炎机制.方法 利用荧光标记底物,检测在不同浓度化合物1487B作用下,THP-1细胞中肿瘤坏死因子-α转化酶(TACE)的活性;采用实时定量PCR法,分析肿瘤坏死因子-α的转录水平;利用酶联免疫吸附实验及免疫印迹,测定肿瘤坏死因子-α的分泌表达水平.结果 在THP-1细胞中,1487B对胞内TACE酶活性有一定的抑制作用,实时定量PCR检测1487B可降低肿瘤坏死因子-α转录,且呈明显的剂量依赖性;免疫印迹及酶联免疫吸附实验检测终浓度为50、100、200 μmol·L-1的1487B作用THP-1细胞后,肿瘤坏死因子-α前体的表达减少63％ (P＜0.01)、72％ (P＜0.01)、67％ (P＜0.01),肿瘤坏死因子-仅的分泌水平降低24％(P＜0.05)、31％ (P ＜0.01)、70％ (P ＜0.001).结论 1487B通过抑制THP-1细胞胞内TACE酶活性和肿瘤坏死因子-α转录,减少肿瘤坏死因子-α生成,本实验初步阐明了化合物1487B的抗炎机制,为其进一步应用奠定了基础.
关键词： 新化合物 1487B 肿瘤坏死因子α 类风湿关节炎 肿瘤坏死因子-α转化酶 -
肿瘤坏死因子转化酶(TACE)抑制剂的研究进展
肿瘤坏死因子转化酶(TACE)已经成为治疗关节炎、癌症、糖尿病和HIV恶病质等疾病的一种潜在新靶点.通过对国外近几年来出现的新型TACE小分子抑制剂的介绍,旨在对现有抑制剂进行筛选和结构改造,进一步提高TACE抑制剂的选择性,降低体内代谢毒性.
关键词： 药物化学 构效关系 综述 小分子抑制剂 肿瘤坏死因子-α转化酶 -
TACE及其抑制剂在炎症性肠病中的作用
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)转化酶(TACE)是一种金属蛋白酶,可以将TNF-α前体(proTNF-α)加工为TNF-α.虽然有大量蛋白激酶可以加工处理proTNF-α,但TACE是有效的.目前已证实TNF-α在炎症性肠病(IBD)患者肠道的慢性损伤中起关键性的作用.因此广泛参与致炎作用的TNF-α分子成为许多免疫新药的靶标,而对TACE的抑制也是阻断TNF-α产生的一个重要途径.该文就TACE的生物学特性及TACE抑制剂对炎症性肠病的治疗作用作一综述.
关键词： 肿瘤坏死因子-α转化酶 抑制剂 炎症性肠病 -
肿瘤坏死因子－α转化酶在人体胎盘绒毛及子宫蜕膜组织中的表达
目的：初步探讨早期自然流产与肿瘤坏死因子－α转化酶（ tumor necrosis factor－αconverting enzyme ，TACE）在子宫蜕膜及胎盘绒毛中的表达变化的相关性。方法采用半定量RT－PCR、免疫组织化学和Western blot 技术分别检测人体自然流产和同期正常妊娠人工流产蜕膜及绒毛组织TACE mRNA及TACE蛋白的表达情况并进行比较。结果半定量RT－PCR结果显示，人工流产蜕膜及绒毛组织TACE mRNA的表达明显高于自然流产蜕膜及绒毛组织，差异有统计学意义（P＜0．01）；免疫组织化学结果显示，TACE蛋白主要分布于胎盘绒毛滋养层细胞及蜕膜组织腔上皮细胞和腺上皮细胞胞质中，并且免疫组织化学及Western blot 都显示TACE蛋白在人工流产和自然流产蜕膜及绒毛组织的表达结果与半定量RT－PCR结果基本一致，即TACE蛋白在人工流产蜕膜及绒毛组织中的表达明显高于自然流产蜕膜及绒毛组织，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 TACE在自然流产患者蜕膜及绒毛组织中的低表达可能与自然流产的发生有关。
关键词： 自然流产 肿瘤坏死因子-α转化酶 半定量RT-PCR 免疫组织化学 -
ADAM17在胰腺癌细胞中的表达及其对细胞增殖迁移的影响
目的：探讨解整合素金属蛋白酶17（a disintegrin and metalloproteinase-17，ADAM17）在人胰腺癌细胞株中的表达及其对细胞增殖迁移的影响。方法：利用实时定量PCR法和蛋白质印迹法检测3种人胰腺癌细胞株内ADAM17 mRNA和蛋白的表达水平。构建可诱导表达ADAM17-shRNA的慢病毒载体，转染人胰腺癌细胞株，并筛选出稳定转染的克隆细胞株。在不同浓度（0，30μg／mL）的多西环素诱导ADAM17-shRNA表达后，通过CCK-8法和细胞划痕实验检测人胰腺癌细胞的体外增殖、迁移能力。结果：ADAM17 mRNA及蛋白在人胰腺癌细胞株PANC1、SW1990和Patu8988中均有表达。与未诱导表达ADAM17-shRNA的对照组相比，诱导表达特异性ADAM17-shRNA后，细胞AD-AM17蛋白表达和体外增殖、迁移能力均受到明显抑制（均P＜0．05）。结论：ADAM17在人胰腺癌细胞中高表达，在其增殖、迁移过程中可能发挥重要作用。
关键词： 解整合素金属蛋白酶17 肿瘤坏死因子-α转化酶 胰腺癌 增殖 迁移 -
高效液相色谱法测定抑制剂对肿瘤坏死因子-α转化酶的抑制作用
目的 对高效液相色谱法(HPLC)测定抑制剂对肿瘤坏死因子-α转化酶(TACE)的抑制作用进行方法 改进,以提高其准确度和普及性,并用于测定抑制剂GM6001及抑制剂A对TACE的抑制作用.方法 TACE与多肽底物经37℃孵育15 min后,加入Ala-Dpa作为内标物,用高效液相色谱法进行分析.以55%甲醇水溶液为流动相,检测波长353 nm.根据剩余底物与内标物的色谱峰面积比,从校准曲线中得出底物的转化量,据此计算TACE的酶活性.结果底物与内标物的色谱峰面积比与底物浓度呈良好线性关系,相关系数为0.996 8,线性范围10 μmol/L 至 400 μmol/L.精密度试验表明,采用内标法定量,精密度得到显著改善.经测定,抑制剂GM6001及抑制剂A对TACE的半数抑制浓度IC50分别为317.5 nmol/L和175.8 nmol/L.结论 以Ala-Dpa作内标物,HPLC测定TACE 酶活性,为TACE抑制剂的筛选提供了一种更准确、更实用的方法 .
关键词： 高效液相色谱法 内标法 肿瘤坏死因子-α转化酶 抑制作用 -
肿瘤坏死因子-α转化酶的研究进展
肿瘤坏死因子-α转化酶属于ADAM家族,具有蛋白水解酶活性,可裂解多种跨膜蛋白,释放出有活性的可溶性细胞外结构域.它在生长发育、肿瘤发生发展、免疫应答和缺血损伤、缺血耐受中发挥着重要的生物学作用.
关键词： 肿瘤坏死因子-α转化酶 跨膜蛋白 细胞外结构域 -
TACE-TGF-α相互作用参与胚泡着床的机制研究
目的:探讨胚泡着床过程中转化生长因子α(Transforming growth factor-α,TGF-α)对肿瘤坏死因子-α转化酶(Tumor necrosis factor-converting enzyme,TACE/ADAM17)的反馈调控机制.方法:用逆转录聚合酶链反应(Reverse transcription polyme rase chain reaction,RT-PCR)和免疫组化的方法分别检测实验组(注射TGF-α抗体)和对照组(注射小鼠血清)后子宫内膜TACE mRNA和蛋白的表达.结果:对照组TACE mRNA和蛋白明显高于实验组.结论:在胚胎着床过程中,TGF-α能反馈调控TACE在子宫内膜的表达.TACE-TGF-α-EGFR途径可能是胚胎着床的调控机制之一.
