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亲和毛细管电泳法研究卡拉胶及其降解产物与R15K的相互作用
HIV-1包膜蛋白gp120的V3 loop区在HIV-1病毒进入靶细胞的过程中发挥着关键的作用.V3 loop区中相对保守的区域R15K,可代替重组gp120分子用于结合实验的研究.聚阴离子化合物如卡拉胶,可通过干扰gp120与CD4的相互作用发挥抗病毒的活性,并且已有研究通过对其进行结构修饰来提高其抗病毒的活性.本实验首次采用亲和毛细管电泳的方法研究卡拉胶及其降解产物与R15K的相互作用,并且我们得到的结论为卡拉胶降解产物可与R15K结合,结合常数为(2.94±0.57)×106 mol/L.该结果提示卡拉胶降解可能为R15K拮抗剂,可通过拮抗HIV-1病毒的进入过程来抑制HIV-1的感染.
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一种将HEK293细胞固定在毛细管内壁上作为药物筛选固定相的新方法研究
将细胞固定在毛细管内壁上,利用亲和毛细管电泳研究受体配体相互作用并对组合化学合成化合物及天然产物进行筛选是近年来发展起来的新技术.在本文中,我们发展了一种将HEK293细胞固定在毛细管内壁上的新方法,对4个重要的固定化条件进行优化,其中包括细胞注入密度、PLL浓度、细胞培养时间和无菌处理方法.在优化后的实验条件下制备的固定化细胞贴壁毛细管柱,其均匀度、稳定性和耐用性良好,适用于毛细管电泳实验.该方法也可将超表达特定膜受体的HEK293细胞固定在毛细管内壁上,进而应用于靶向特定膜受体的亲和毛细管电泳药物筛选.
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利用亲和毛细管电泳和毛细管区带电泳快速筛选新疆一支蒿提取物中与HIV-1包膜蛋白gp120上V3环以及逆转录酶相互作用的活性成分
HIV-1侵入宿主细胞的过程中与一系列受体和协同受体结合.这些受体和协同受体都由HIV-1的包膜蛋白gp120识别,在病毒入侵过程中是重要环节之一.逆转录酶拮抗剂是早针对抗病毒治疗的几个靶点之一,对其的改进对于寻找新型拮抗剂十分关键.许多天然植物如新疆一支蒿被报道具有抗病毒的生物活性.这些天然植物也许就是潜在的靶向针对包膜蛋白gpl20上V3环或者逆转录酶的艾滋病毒抑制剂.V3环结构中的相对保守的肽段R15K可以被用来研究蛋白的相互作用.本研究利用毛细管亲和色谱方法研究了R15K与新疆一支蒿各种粗提物之间的相互作用.利用毛细管区带电泳法研究了逆转录酶与新疆一支蒿各种粗提物之间的相互作用.实验结果表明,新疆一支蒿的氯仿层提取物与R15k和逆转录酶之间均存在较明显的相互作用.本研究提供了一种可以快速高通量筛选天然植物中抗艾滋病毒的活性成分的方法.
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β-环糊精与白藜芦醇结合常数的亲和毛细管电泳测定
应用亲和毛细管电泳,在β-环糊精(β-CD)、硫酸化β-环糊精(SCD)二元环糊精体系中同时测定β-CD、SCD与顺、反式白藜芦醇和顺、反式白藜芦醇糖苷的结合常数.结果表明β-CD与4种单体形成了摩尔比为1:1的包合物.比较了4种单体与β-CD结合常数的大小,并对包合机理进行了讨论.
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埃索美拉唑及其光学异构体的亲和毛细管电泳手性拆分
以牛血清白蛋白为手性添加剂,建立埃索美拉唑对映体杂质检查的亲和毛细管电泳方法,并采用荧光光谱、圆二色光谱法,通过研究埃索美拉唑及光学异构体与牛血清白蛋白作用的热力学参数、焓熵驱动过程及蛋白构象变化对其拆分机理进行探讨.建立的电泳分离条件为:未涂层石英毛细管柱(50 cm×50 μm,有效长度41.5 cm),以pH 8.0的20mmol/L磷酸二氢钠-磷酸氢二钠缓冲液(含250 μ mol/L牛血清白蛋白和7％正丙醇)作为运行缓冲液,正向运行电压30kV,柱温25℃,检测波长302 nm,压力进样(5 kPa,5 s).在优化的实验条件下,埃索美拉唑与其对映体的分离度大于1.8,对映体杂质的低检测限和定量限分别为0.8和2.0μg/mL,在2～20μg/mL浓度范围内线性关系良好;平均回收率为100.4％,RSD小于2.0％.该方法可用于埃索美拉唑原料药的对映体杂质检查.
